长双歧杆菌BBMN68微胶囊的制备及其应用性评价

长双歧杆菌BBMN68分离自广西巴马长寿老人粪便,已证明其具有双歧杆菌普遍的生理功能。为解决其不耐酸、不耐氧的缺点,本实验采用微胶囊包埋技术,以海藻酸钠、乳清蛋白以及VE为壁材,在氮气体系中采用挤压法包埋该双歧杆菌活菌体制备湿微胶囊和冻干微胶囊。结果表明：海藻酸钠、乳清蛋白和VE质量分数分别为2%、3%和10%条件下制备的湿微胶囊在酸奶中保存21 d仍能保持106 CFU/g以上的活菌数,耐胃酸实验2.0 h时活菌数仍高达3.16×107 CFU/g,肠溶实验中微胶囊在2.0 h实现完全崩解;海藻酸钠和乳清蛋白质量分数为2%和3%,氮气环境下制备的冻干微胶囊通过恒温加速实验测定可在室温条件下贮藏长达75 d。通过微胶囊包埋技术较好地解决了长双歧杆菌BBMN68不耐酸、不耐氧的缺点,同时也提供一种新型有效的补充肠道益生菌的形式。     

长双歧杆菌BBMN68诱导的树突状细胞对小鼠牛乳β-乳球蛋白过敏的缓解作用

为研究益生菌缓解食物过敏的作用机制,本实验以牛乳β-乳球蛋白(BLG)为过敏原构建小鼠食物过敏模型,灌服长双歧杆菌BBMN68(BBMN68),采用ELISA方法检测小鼠血清及细胞培养上清中抗体和细胞因子含量,流式细胞术分析小鼠体内树突状细胞(DCs)亚型及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量的变化。结果表明,BBMN68调节了BLG小鼠体内的Th1/Th2细胞失衡,缓解了过敏反应。与过敏组小鼠相比,BBMN68显著提高了派氏淋巴结DCs中CD103表达(p0.05),并降低了CD86和MHC-II表达(p0.05);提高了派氏淋巴结,肠系膜淋巴结和脾脏中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量,分别增加41.91%、71.16%和61.25%。分离BBMN68组小鼠派氏淋巴结的DCs与BLG过敏小鼠的CD4+T细胞共培养,发现Foxp3+Treg细胞比例显著增加,调节性细胞因子TGF-β和IL-10分泌显著增多(p0.05)。以上结果说明BBMN68缓解小鼠牛乳β-乳球蛋白过敏的机制与其调节DCs功能,促进其介导的免疫抑制有关。     

长双歧杆菌BBMN68 对便秘模型小鼠的通便作用

目的：研究长双歧杆菌活菌BBMN68 活菌液对便秘模型小鼠的润肠通便作用。方法：将Balb/c 雄性小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组和3 个剂量的给药组。给药组分别经口给予低、中、高剂量(1 × 107、1 × 108、1 × 109CFU/mL)的长双歧杆菌BBMB68 活菌液0.1mL/(kg·d)(以体质量计);空白组和模型组给予0.1mL/(kg·d)的质量分数10% 的脱脂奶溶液;阳性对照组给予1 × 108CFU/mL 动物双歧杆菌菌悬液0.1mL/(kg·d)。用复方地芬诺酯制造小鼠便秘模型,建模后各组分别给药,观察各组小鼠的首次排黑便时间、5h 内排便粒数和质量,测定粪便含水量和小肠墨汁推进率。结果：长双歧杆菌BBMN68 给药7d,可明显改善便秘小鼠首次排黑便时间、增加排黑便粒数和质量;长双歧杆菌BBMN68 给药15d 可显著提高便秘小鼠小肠墨汁推进率。表明长双歧杆菌BBMN68 具有润肠通便功能。     

双歧杆菌生长促进剂—果寡糖

本文介绍果寡糖基本结构、生理功能以及在保健品和饲料添加剂中应用,作用从下水道污尼分离、选育出能分泌果寡糖酶的黑曲霉,介绍培养方法和果寡糖的生产工艺。     

氧气胁迫对长双歧杆菌葡萄糖代谢关键酶基因表达的影响

双歧杆菌对氧气敏感．耐氧性成为其重要的性状及研究内容之一。实验采用半定量RT-PCR法对在4％氧气条件下培养的长双歧杆菌BBMN68的葡萄糖代谢中关键酶基因mRNA表达水平进行了比较和分析;、结果表明,随着氧气浓度增加,长双歧杆菌BBMN68的生长逐渐受到抑制,在4％浓度胁迫条件下,葡萄糖磷酸变位酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、磷酸酮醇酶、转酮醇酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶在氧胁迫30min时的mRNA表达明显下降,60rain及120min后,xfp和gap酶的mRNA表达量恢复到厌氧条件下的水平。研究了长双歧杆菌在氧气胁迫下菌体生长以及葡萄糖代谢中关键酶基因mRNA的变化情况,这些可能是细胞受到氧气胁迫的应激反应之一,推测葡萄糖代谢酶与长双歧杆菌耐氧性有一定关联。     

双歧杆菌BBMN01体内免疫刺激功能研究

通过动物实验研究了从长寿老人肠道分离出的一株双歧杆菌BBMN01的免疫刺激功能.将活菌以不同剂量给小鼠灌胃3周后,通过迟发型变态(DTH)反应,腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力,半数溶血值(HC50),以及乳酸脱氢酶(LDH)实验来验证活菌对小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞吞噬功能以及自然杀上赴钚缘拇俳饔?与对照组比较,双歧杆菌各剂量组均能提高小鼠淋巴细胞转化能力、小鼠巨噬细胞吞噬能力和小鼠NK细胞活性,中、高剂量双歧杆菌组能提高小鼠的半数溶血值.表明双歧杆菌BBMN01对动物体具有免疫刺激功能.     

食用性壳寡糖(几丁质低聚糖)对长双歧杆菌的影响

本研究对比了不同浓度的壳寡糖对于益生菌中的长双歧杆菌的生理影响,找到了合适的食用添加浓度的壳寡糖对于长双歧杆菌的明显促生长作用,为其作为具有减肥和保健双重功能的新兴食品添加物质奠定了理论基础。     

褐藻胶寡糖对双歧杆菌体外生长影响的研究

探讨褐藻寡糖对双歧杆菌增殖的促进作用。采用光电比浊法研究褐藻胶寡糖在体外培养中对双歧杆菌生长的影响。褐藻胶寡糖在一定浓度（10g／L-0．3125g/L）下,可以明显地缩短双歧杆菌生长的适应期,使双歧杆菌大量增生,其中褐藻胶寡糖浓度为1．25g／L-0．625g/L时,作用效果最好。褐藻胶寡糖是一种有效的双歧杆菌的增殖因子,具有明显的促生长作用。     

长双歧杆菌BBMN68胞外多糖生物合成基因的克隆及生物信息学分析

目的:研究长双歧杆菌BBMN68胞外多糖生物合成途径和调控机制。方法:提取BBMN68胞外多糖,预测eps基因簇各基因编码蛋白功能,克隆关键基因并对其进行进化分析。结果:在CDM和MRSC培养基上,长双歧杆菌BBMN68产生胞外多糖,产量分别为100 mg/L和400 mg/L。本实验室工作人员对其进行全基因组序列测定。根据全基因组序列,分析得到eps基因簇,对该基因簇各基因编码蛋白的功能预测发现,BBMN68_1002编码1个可能具有多糖重复单元转运子功能的蛋白。BBMN68_1003、BBMN68_1006、BBMN68_1007和BMN68_1011与多糖重复单元聚合有关。BBMN68_1004、BBMN68_1008和BBMN68_1009参与糖基转移。BMN68_1010控制多糖分子链长。BBMN68_1012编码胞外多糖合成的关键酶——引导糖基转移酶(priming glycosyltransferase,Cps D),启动合成胞外多糖第1步。由Cps D基因构建的系统发育树,BBMN68与猿猴、狨猴及大猩猩的长双歧杆菌同枝,可能是饮食影响肠道细菌进化的结果。结论:本研究结果为解析长双歧杆菌BBMN68胞外多糖生物合成途径和调控机制奠定了理论基础。     

双歧杆菌BBMN01对小鼠肠道菌群的影响

本实验研究双歧杆菌菌株BBMN01对小鼠肠道菌群的影响.实验动物灌胃108CFU/ml双歧杆菌BBMN01活菌液0.2ml,以小鼠粪便中的双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌数量为检测指标,研究给予样品后不同时间内小鼠肠道菌群的变化.结果表明,小鼠连续灌胃双歧杆菌BBMN01菌液14d,对肠道微生物菌群有一定的调节作用,灌胃结束7d后,各指标菌数量回复到灌胃前水平.     

Characterization of a GH36 α-D-Galactosidase Associated with Assimilation of Gum Arabic in Bifidobacterium longum subsp. longum JCM7052

We recently characterized a 3-O-α-D-galactosyl-α-L-arabinofuranosidase (GAfase) for the release of α-D-Gal-(1→3)-L-Ara from gum arabic arabinogalactan protein (AGP) in Bifidobacterium longum subsp. longum JCM7052. In the present study, we cloned and characterized a neighboring α-galactosidase gene (BLGA_00330; blAga3). It contained an Open Reading Frame of 2151-bp nucleotides encoding 716 amino acids with an estimated molecular mass of 79,587 Da. Recombinant BlAga3 released galactose from α-D-Gal-(1→3)-L-Ara, but not from intact gum arabic AGP, and a little from the related oligosaccharides. The enzyme also showed the activity toward blood group B liner trisaccharide. The specific activity for α-D-Gal-(1→3)-L-Ara was 4.27- and 2.10-fold higher than those for melibiose and raffinose, respectively. The optimal pH and temperature were 6.0 and 50 °C, respectively. BlAga3 is an intracellular α-galactosidase that cleaves α-D-Gal-(1→3)-L-Ara produced by GAfase; it is also responsible for a series of gum arabic AGP degradation in B. longum JCM7052.     

A synbiotic marine oligosaccharide microcapsules for enhancing Bifidobacterium longum survivability and regulatory on intestinal probiotics

A novel synbiotic multiparticulate microparticle containing alginate oligosaccharide (AOS), chitosan oligosaccharide (COS) and Bifidobacterium longum CICC 6259 was produced in the current study to expand the synbiotic industrial applications. The influences of these treatments on encapsulation yield, size, morphology, protective effect and stability of microcapsules and on mice gut microbiome were studied in vitro and in vivo. In vitro experiments detected no significant difference (P > 0.05) in encapsulation yield with different types of microcapsules. However, the microcapsule diameter of marine oligosaccharide was approximately 60 μm greater, and these microcapsules increased the number of surviving cells by more than 3 log cfu/g after treatment with simulated gastrointestinal juices, compared to basic alginate microcapsules. In vivo, these microcapsules significantly increased the content of Bifidobacterium and Lactobacillus and reduced the content of Enterococcus and Escherichia in mice gut microbiome. Marine oligosaccharide probiotic microcapsules are promising as a novel functional food ingredient.     

蒺藜提取液对长双歧杆菌及青春双歧杆菌生长的影响

以MRS培养基为对照,OD600及pH值为响应,研究了蒺藜提取液浓度对2株双歧杆菌——长双歧杆菌及青春双歧杆菌生长的影响.结果表明;蒺藜提取液能促进长双歧杆菌和青春双歧杆菌的生长,但最适浓度因菌而已,长双歧杆菌和青春双歧杆菌在MRS培养基中的最佳蒺藜提取液的加量分别为2.0％和1.5％,37℃培养18h后,培养液的OD600分别达到1.388和1.564.     

海藻糖和透明质酸对长双歧杆菌的保护作用

根据长双歧杆菌存活率、产酸力、形态、生长曲线和β-D-半乳糖苷酶泄漏率,研究了海藻糖、乳糖、蔗糖、透明质酸、海藻糖和透明质酸组合物以及脱脂乳粉对长双歧杆菌的保护作用。在长双歧杆菌冷冻干燥和高温贮存过程中,各种保护剂均显示了不同程度的保护作用,其中海藻糖和透明质酸组合物的作用最佳。     

海藻糖和透明质酸对冻干双歧杆菌细胞的保护作用

为探讨冷冻干燥对长双歧杆菌细胞的损伤及海藻糖和透明质酸(HA)的保护作用机制,考察冻干长双歧杆菌再水化后,蛋白质与核酸泄漏情况、β -D- 半乳糖苷酶和ATP 酶(ATPase)活性变化、菌体形态特征、膜脂和菌体蛋白结构变化。结果表明：冻干损伤微生物细胞膜和敏感蛋白质,海藻糖分别与细胞膜磷脂和菌体蛋白质极性基团形成氢键相互作用,代替极性基团周围失去的氢键结合水,从而维持磷脂“水化”状态和蛋白质二级结构稳定。由于HA 为高分子化合物,海藻糖与其复配后混合物的玻璃化温度(Tg)较高,两者复配作用互补,即海藻糖的“水替代”作用与HA 的“玻璃态”作用有机结合,使保护效果更佳。     

长双歧杆菌细胞壁完整肽聚糖分离鉴定的研究

长双歧杆菌NQ-1501菌株,经三级扩大培养,离心集菌,用三氯乙酸处理以除去细胞壁上的磷壁酸及菌体内的核酸,经甲醇、丙酮脱脂,再经胰蛋白酶及中性蛋白酶进行复合酶解去除菌体内部的蛋白质,离心清洗、冻干即可制得肽聚糖。经过溶菌酶溶解试验,紫外可见光谱扫描分析证明所得产物为肽聚糖,化学组分分析显示其主要由多肽与氨基己糖组成,透射电镜观察显示所提取的肽聚糖仍保持着原有的细菌细胞形态。证明所提取的肽聚糖为完整肽聚糖。     

1,6-α-L-Fucosidases from Bifidobacterium longum subsp. infantis ATCC 15697 Involved in the Degradation of Core-fucosylated N -Glycan

Bifidobacterium longum subsp. infantis ATCC 15697 possesses five α-L-fucosidases, which have been previously characterized toward fucosylated human milk oligosaccharides containing α1,2/3/4-linked fucose [Sela et al.: Appl. Environ. Microbiol., 78, 795-803 (2012)]. In this study, two glycoside hydrolase family 29 α-L-fucosidases out of five (Blon_0426 and Blon_0248) were found to be 1,6-α-L-fucosidases acting on core α1,6-fucose on the N-glycan of glycoproteins. These enzymes readily hydrolyzed p-nitrophenyl-α-L-fucoside and Fucα1-6GlcNAc, but hardly hydrolyzed Fucα1-6(GlcNAcβ1-4)GlcNAc, suggesting that they de-fucosylate Fucα1-6GlcNAcβ1-Asn-peptides/proteins generated by the action of endo-β- N-acetylglucosaminidase. We demonstrated that Blon_0426 can de-fucosylate Fucα1-6GlcNAc-IgG prepared from Rituximab using Endo-CoM from Cordyceps militaris. To generate homogenous non-fucosylated N-glycan-containing IgG with high antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) activity, the resulting GlcNAc-IgG has a potential to be a good acceptor substrate for the glycosynthase mutant of Endo-M from Mucor hiemalis. Collectively, our results strongly suggest that Blon_0426 and Blon_0248 are useful for glycoprotein glycan remodeling.