酶法制备汉麻籽蛋白抗氧化肽

采用不同蛋白酶酶解汉麻籽蛋白,确定Alcalase 2.4L碱性蛋白酶是酶解汉麻籽蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解汉麻籽蛋白的优化条件为:底物浓度50 mg/mL、水解时间2 h、温度50℃、加酶量2.2%、pH 9.4。优化酶解条件下,水解度约为20%,10 mg/ mL酶解产物的DPPH自由基清除率为82.65%,显示出较好的抗氧化活性。     

双酶水解玉米醇溶蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

为了制备抗氧化活性肽,利用Alcalase碱性蛋白酶和中性蛋白酶分步酶解玉米醇溶蛋白。在单因素的基础上,以1.1-二苯基苦基苯肼(DPPH·)自由基清除率、羟基自由基清除率和水解度(DH)为响应值,采用响应面(RSM)中心组合实验,选取Alcalase碱性蛋白酶加酶量、中性蛋白酶与Alcalase碱性蛋白酶活力之比、底物浓度为自变量,探讨最佳酶解工艺条件。采用Design-Expert软件,通过响应面优化确定修正后各因素的最佳工艺条件为:Alcalase碱性蛋白酶加酶量12880 U/(g底物)、中性蛋白酶与Alcalase碱性蛋白酶活力之比为1∶4,底物浓度为3.4%。在此修正条件下,DPPH·自由基清除率为42.98%,水解度为32.18%,与预测值的相对误差为1.04%。浓度为20 mg/m L时,玉米醇溶蛋白的DPPH·自由基清除率和羟基自由基清除率分别为同浓度VC的85.8%和67.0%。     

酶解中国毛虾制备清除羟自由基活性产物的研究

研究以高产低值的中国毛虾为原料,通过测定酶解物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果,从风味酶、复合酶、中性蛋白酶、Alcalase2.4L等10种常用蛋白酶中筛选出Alcalase2.4L作为酶解中国毛虾制备清除羟自由基活性酶解物的水解酶;以羟自由基清除率为指标,利用正交实验对酶解条件进行优化,将优化酶解条件下的酶解产物进行SephadexG-15凝胶色谱分离(1.6cm×68cm),测定分子量分布并收集各吸收峰。结果表明:Alcalase2.4L在温度55℃、pH9.0、酶底物浓度比[E/S]为12.0AU/g、时间3h的水解条件下,酶解物对羟自由基清除率为84.6%,水解度为26.28%,平均肽链长为3.81。Alcalase2.4L酶解物凝胶色谱分离得到一个较强羟自由基清除活性的组分分子量范围是2259～869,IC50为0.385mg/mL,肽链长度在22.4～7.7之间。     

苜蓿叶蛋白抗氧化肽水解用酶的筛选研究

研究了中性蛋白酶AS1.398、Neutrase及碱性蛋白酶Alcalase FG2.4L、Proleather FG-F、Protease S水解苜蓿叶蛋白的进程特性,考察了五种蛋白酶水解物及不同DH的Alcalase FG2.4L酶解物对二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)清除能力的影响。结果表明,碱性蛋白酶Alcalase FG2.4L是制备苜蓿叶蛋白抗氧化肽的最适水解酶,其DH20的酶解物浓度为1.6mg/ml时对DPPH·清除率达80%以上;其酶解物中相对分子质量小于1000的组分所占比例最高,达到67.86%;酶解物的DH与DPPH·清除率之间不存在线性关系。     

大豆蛋白酶解产物抗氧化活性与水解度相关性研究

利用碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解大豆分离蛋白,研究了底物浓度、加酶量、p H、温度因素对酶解液水解度和还原力的影响,并在此基础上用响应面分析法优化酶水解条件。以还原力为主要指标考察酶解产物的抗氧化活性,通过水解度与还原力的比较,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解大豆分离蛋白产物的抗氧化活性与水解度之间没有直接线性关系。在实验得到的最佳条件下制备的大豆肽抗氧化活性良好,具有良好的应用前景。     

牛骨股原蛋百肽体外清除自由基活性的研究

对经碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解的牛骨胶原蛋白肽清除自由基活性进行了研究。根据对羟基自由基、超氧阴离子自由基、二苯代苦味酰基自由清除能力的测定,以及还原能力、脂质抗氧化能力等抗氧化活性指标的测定,确定了水解度为7.9%左右的胶原蛋白肽清除自由基的综合效果最好,此时酶解产物的平均分子量为2025Da,含15个左右的氨基酸。在此条件下,超氧阴离子(O2-·)的清除率为63.86%,羟基自由基(·OH)的清除率为99.55%,二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除率为27.03%,对大豆卵磷脂过氧化作用的抑制率为74.78%。     

牛骨胶原蛋白肽体外清除自由基活性的研究

对经碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解的牛骨胶原蛋白肽清除自由基活性进行了研究。根据对羟基自由基、超氧阴离子自由基、二苯代苦味酰基自由清除能力的测定,以及还原能力、脂质抗氧化能力等抗氧化活性指标的测定,确定了水解度为7.9%左右的胶原蛋白肽清除自由基的综合效果最好,此时酶解产物的平均分子量为2025Da,含15个左右的氨基酸。在此条件下,超氧阴离子(O2-·)的清除率为63.86%,羟基自由基(·OH)的清除率为99.55%,二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除率为27.03%,对大豆卵磷脂过氧化作用的抑制率为74.78%。     

双酶水解小麦胚芽及水解物的抗氧化活性研究

本文研究双酶相继水解脱脂小麦胚芽及对水解物抗氧化活性的影响。实验结果表明,与碱性蛋白酶和Protamex组合及碱性蛋白酶和风味蛋白酶组合相继水解得到的水解物相比,用碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)和胰蛋白酶相继水解得到的水解物的清除DPPH自由基能力和还原能力最大。上述三组不同酶组合的水解物的抗氧化活性均高于碱性蛋白酶单酶水解脱脂小麦胚芽的水解物。小麦胚芽双酶水解物的抗氧化活性与水解物浓度有关,增加水解物浓度可有效提高其清除DPPH自由基能力和还原能力。     

椰肉蛋白酶解及其产物的抗氧化活性研究

将新鲜椰肉粉碎脱脂,利用碱溶酸沉法制备椰肉蛋白。用Alcalase碱性蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、Papain木瓜蛋白酶酶解椰肉蛋白,以DPPH自由基清除能力和水解度为指标对酶解过程进行分析,筛选出最适合制备抗氧化酶解物的酶为Alcalase碱性蛋白酶。然后采用单因素及多指标正交实验设计优化Alcalase碱性蛋白酶酶解条件,其中酶解温度和底物浓度对DPPH自由基清除率影响最大。优化后的制备参数为:酶解温度50℃,pH值10.5,加酶量14000 U/g,酶解时间7 h,底物浓度2%,该条件下水解液中蛋白含量为15.8 mg/mL,水解度和DPPH.清除率分别为29.16%和89.07%,椰肉蛋白酶解物显示出较强的抗氧化活性,接近同一浓度下谷胱甘肽的抗氧能力,比同浓度Vc的DPPH自由基清除率高3.33倍。     

酶法制备燕麦多肽的工艺条件优化及分析

燕麦蛋白是一种优质谷物蛋白,但其营养价值开发利用率较低,为提高燕麦蛋白生物价值的利用,以水解度为考察指标,采用响应面优化法对碱性蛋白酶酶解燕麦蛋白的工艺条件进行优化。另外,将制得的多肽经过超滤得到小于5 kDa的片段,并通过测定其不同浓度的1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼(1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical,DPPH)清除率和羟自由基清除率验证其体外抗氧化活性。得到最佳酶解条件:碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L FG使用量1.6 mL/L,底物浓度10%,酶解时间150 min,温度52℃, pH 9.2。在此条件下,燕麦蛋白的水解度为14.86%,多肽得率为19.02%。燕麦多肽清除DPPH的IC₅₀值为9.112 mg/mL,清除羟自由基的IC₅₀值为3.062 mg/mL。结果表明,经过响应面法优化制得的燕麦多肽具有较高的体外抗氧化活性。     

不同苦荞蛋白酶解产物抗氧化活性研究

以苦荞蛋白作为底物,采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以及胃蛋白酶加胰蛋白酶模拟体内蛋白消化,制备苦荞麦蛋白水解物。采用DPPH及ABTS~+·法比较不同的蛋白水解物与水解前苦荞蛋白的体外抗氧化活性。结果表明:不同蛋白酶水解产物水解度由高到低的顺序为:碱性蛋白酶胃蛋白酶~胰蛋白酶胃蛋白酶木瓜蛋白酶胰蛋白酶,其中碱性蛋白酶水解苦荞蛋白水解度达29.95%。苦荞蛋白本身具有一定的抗氧化能力,其中DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别达71.91%及11.25%,但均显著低于阳性对照Vc。随着水解程度的增加,苦荞蛋白水解产物抗氧化能力逐渐增强。其中,以碱性蛋白酶酶解产物抗氧化活性最高,其DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别为91.65%(0.5 mg/mL)及16.67%(1 mg/mL),均显著高于原苦荞蛋白。其中,碱性蛋白酶水解产物的DPPH自由基清除率在高浓度(0.5mg/mL)条件下,与阳性对照Vc持平。同时碱性蛋白酶酶解产物抗氧化性(DPPH清除率及ABTS~+·清除率)显著优于其他蛋白酶解产物。因此,苦荞麦蛋白采用碱性蛋白酶解制备苦荞水解产物可作为天然的抗氧化剂。     

Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏制备抗氧化肽

通过Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏蛋白制备抗氧化肽,以酶解液的水解度(DH)、DPPH·和羟自由基清除率为指标,比较不同酶添加量、p H值、温度、料液比以及酶解时间对酶解效果的影响,并用响应面法优化Alcalase蛋白酶酶解反应的工艺条件。结果:Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏蛋白的最优工艺条件为:酶解p H9.0、底物质量浓度8 g/100 m L、温度62℃、加酶量4.26%、酶解时间3.7 h。在此条件下,蛋白质水解度为30.66%,DPPH自由基清除率为85.97%,羟自由基清除率为75.79%。对优化的酶解液进行氨基酸成分分析表明:大黄鱼内脏多肽含有丰富的组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、酪氨酸(Tyr)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro),具有较高的抗氧化活性。     

罗非鱼鱼肉及组分蛋白酶解产物的抗氧化特性

采用胃蛋白酶、中性蛋白酶、Alcalase2.4L碱性蛋白酶分别酶解罗非鱼肉蛋白,研究比较不同蛋白酶在1、2、4、6、8h对罗非鱼肉蛋白的酶解效果及产物的抗氧化活性,结果表明:3种酶的酶解产物都具有一定的抗氧化活性,中性蛋白酶酶解产物的水解度和蛋白回收率最高,胃蛋白酶酶解产物对DPPH自由基和羟自由基的清除效果最好;综合各项指标选择中性蛋白酶对罗非鱼肉的组分蛋白(肌原纤维蛋白、肌浆蛋白、基质蛋白)进行4h酶解,研究比较不同组分蛋白的酶解效果及产物的抗氧化活性,结果表明:组分蛋白中基质蛋白酶解产物的蛋白回收率最高,为89.8%,肌原纤维蛋白酶解产物的水解度最高,为10.1%,肌浆蛋白酶解产物的抗氧化活性最好,羟自由基和DPPH自由基的IC50值分别为12.352mg/m L和3.554mg/m L。     

酶解拟黑多刺蚁制备抗氧化活性肽

分别采用Alcalase2.4L、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰酶水解拟黑多刺蚁,利用超氧自由基、DPPH自由基、羟基自由基清除能力、还原力、铁离子螯合能力、亚油酸自氧化抑制能力6个指标衡量水解物的抗氧化能力,并结合水解度(DH)、蛋白质利用率、多肽含量等理化指标筛选最适蛋白酶。结果表明,酶解物具有良好的体外抗氧化活性,其抗氧化活性与抗氧化肽的剂量呈正相关,其中Alcalase2.4L水解能力、酶解液抗氧化能力最强。还研究了热处理、超声、均质等预处理方式对水解能力、抗氧化能力的影响,发现均质对酶解产物的影响最大。     

三种物理法辅助蛋白酶水解合浦珠母贝蛋白的效果评价

目的:研究了微波法(W)、超声法(U)与传统水浴法(H)3种模式辅助7种常用酶(Alcalase 2.4L蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶和枯草蛋白酶)酶解合浦珠母贝蛋白的效果。方法:通过RPHPLC法与Tricine-SDS-PAGE电泳实验,结合水解度、DPPH·清除率、·OH自由基清除率等评价指标。结果:物理辅助酶解能有效促进水解,微波结合木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和枯草蛋白酶处理,其作用效果优于超声波法和传统水浴法;Alcalase 2.4L蛋白酶与复合风味蛋白酶在三种辅助模式下相似。结论:综合各指标结果得出,微波助解合浦珠母贝蛋白最佳的酶为Alcalase 2.4L蛋白酶与复合风味蛋白酶。     

卵白蛋白多肽的酶解制备及抗氧化活性研究

以DPPH自由基清除率和水解度为指标,采用碱性蛋白酶酶解卵白蛋白制备抗氧化活性肽,考察底物质量分数、酶解时间、加酶量、温度等因素对制备的影响。正交实验结果表明,碱性蛋白酶的最佳水解条件为:底物质量分数4%、酶解时间6h、加酶量5500U/g,温度65℃,此条件下DPPH自由基清除率达到96.92%、水解度为57.14%。酶解时间对DPPH自由基清除率的影响最大,而底物质量分数对水解度的影响最大。     

脱脂豆粕酶水解物抗氧化活性的研究

采用碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)对脱脂豆粕进行水解,以二苯代苦味酰基自由基清除率和亚油酸过氧化抑制率为指标,通过对酶解温度、时间、pH、加酶量以及底物浓度等影响因素的系统研究,建立了脱脂豆粕的优化酶解工艺.结果表明,酶解温度为55℃、时间为3h、pH为8.0、加酶量19200U/g底物、底物浓度8%,酶水解物的自由基清除率和过氧化抑制率分别为41.13%、34.16%.水解度为35.O%.     

荠蓝籽蛋白酶解制备抗氧化肽工艺的研究

以荠蓝籽饼粕为原料,制备具有抗氧化活性的荠蓝籽肽.研究中以脱氧核糖-铁体系法测定酶解产物的羟自由基清除率为指标,从碱性蛋白酶Alacase2.4L等6种酶中筛选出酶解最佳用酶,并通过对酶用量,酶解时间,酶解温度以及pH等影响因子的系统研究建立了荠蓝籽饼粕蛋白的优化酶解工艺.结果表明,用碱性蛋白酶Alacase2.4L对荠蓝籽饼粕蛋白水解得到的荠蓝籽肽的最佳工艺条件为:加酶量800 U/g蛋白质,料液比1:35,pH9.5,在55 ℃下酶解3 h,酶解产物的羟自由基清除率可达79.31%±0.31%,水解度可以达到6.90%±0.02%.     

响应面法优化软枣猕猴桃蛋白水解及多肽的抗氧化研究

以酶解产物清除羟基自由基能力为指标,选用碱性蛋白酶为水解酶,利用响应曲面法优化软枣猕猴桃蛋白最佳酶解工艺条件并制取抗氧化肽。考察其水解度和清除率的相关性。结果表明：碱性蛋白酶最佳酶解工艺为温度50℃、pH9、加酶量4000U/g、酶解时间3h,此时水解度达到最大值为25.08%。在此条件下将软枣猕猴桃蛋白分别水解1、2、3、4、5h得到肽混合物进行抗氧化活性分析,得到其对羟自由基清除率分别为18.69%、24.67%、28.04%、25.82%、26.65%。当酶解时间为3h时,此时抗氧化肽的羟自由基清除率最高。     

鳙鱼肉酶解工艺及其产物清除羟自由基活性的研究

以高产低值的鳙鱼肉为原料,通过测定水解度及酶解产物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果,从胃蛋白酶、Alcalase2.4L、木瓜蛋白酶、胰酶4种常用蛋白酶中筛选出木瓜蛋白酶作为酶解鳙鱼肉制备清除羟自由基活性酶解物的水解酶;以羟自由基清除率为指标,利用正交试验对酶解条件进行优化,将优化酶解条件下的酶解产物进行高效液相色谱分离,测定分子量分布。结果表明:木瓜蛋白酶在温度45℃、p H7.0、酶加量2%、底物浓度20%、时间3 h的水解条件下,酶解产物对羟自由基清除率达76.13%。木瓜蛋白酶酶解物利用高效体积排阻色谱测定其主要分子量范围是2 691~32 u。