柱前衍生高效液相色谱法测定纤维蛋白原中精氨酸含量

目的测定人纤维蛋白原中的精氨酸含量。方法应用柱前衍生高效液相色谱法检测,用外标法计算含量。结果系统适应性测试:n=6,T=1·04,RSD%(定性)=0·2,RSD%(定量)=2·0,表明系统适应性良好。应用该法检测3批人纤维蛋白原,精氨酸含量分别为0·87%、0·85%和0·90%,结果符合《中国药典》要求。结论柱前衍生高效液相色谱法简单、迅速,可作为纤维蛋白原质量控制中检测精氨酸含量的方法。     

高效液相色谱外标法测定人纤维蛋白原中盐酸精氨酸含量

目的建立高效液相色谱外标法检测人纤维蛋白原中盐酸精氨酸含量,并对方法进行验证及初步应用。方法色谱柱:氨基键合柱(250 mm×4. 6 mm×5μm);流动相:乙腈-磷酸盐缓冲液(1∶1);流速:1. 0 m L/min;紫外检测波长:205 nm;柱温:40℃;进样量:20μL,采用面积外标法计算盐酸精氨酸含量,并验证方法的系统适应性、线性范围、重复性、稳定性、准确度及定量限(LOQ)。应用建立的方法测定3批人纤维蛋白原中盐酸精氨酸的含量,并与《中国药典》三部(2015版)规定方法进行比较。结果该方法色谱峰型单一,且无其他干扰,盐酸精氨酸与甘氨酸的分离度为10. 54;盐酸精氨酸浓度在0. 116 2～0. 536 1 mg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,线性方程为:y=7 476. 695 68 x+72. 418 815,相关系数(R)为0. 999 24;同一人纤维蛋白原样品重复6次检测盐酸精氨酸含量的相对标准偏差(relativestandard deviation,RSD)为0. 22%;人纤维蛋白原样品于4℃放置0、4、8、12、16、20 h,盐酸精氨酸检测结果 RSD为0. 57%;高、中、低3个浓度加样样品检测结果平均回收率为(101. 36±1. 53)%,RSD为1. 51%;LOQ为0. 581μg/mL。两种方法检测3批样品盐酸精氨酸含量为25. 9～26. 3 g/L,两者差异无统计学意义(P 0. 05)。结论高效液相色谱外标法操作简便,重复性、稳定性、准确度良好,可用于人纤维蛋白原中盐酸精氨酸含量的测定。     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定猴免疫缺陷病毒基因治疗产品中盐酸组氨酸含量

目的建立柱前衍生反相高效液相色谱法(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)基因治疗产品中盐酸组氨酸含量的方法。方法以正亮氨酸为内标,异硫氰酸苯酯(phenyl isothiocyanate,PITC)为柱前衍生化试剂,采用ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以醋酸钠缓冲液(pH 6.5)和80%乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长254 nm,进样量10μl,流速1.0 ml/min。用建立的方法检测样品中盐酸组氨酸含量,绘制标准曲线,并验证该方法的精密度、稳定性、专属性和准确性。结果盐酸组氨酸在12.54~31.35μg范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.999 9);3份供试品溶液,每份连续进样5次,盐酸组氨酸峰面积平均RSD值为1.77%;同1份供试品溶液0、3、6、12 h进样,盐酸组氨酸峰面积平均RSD值为1.03%;该方法可将甘氨酸、精氨酸和丝氨酸对照品有效分离;高、中、低浓度样品的平均回收率分别为103.37%、102.28%和102.91%。SIV基因治疗产品中盐酸组氨酸3次检测的平均含量为9.66 mg/ml。结论建立了柱前衍生RP-HPLC检测SIV基因治疗产品中盐酸组氨酸含量的方法,该方法重现性好,专属性强,精密度及准确度高,可对基因治疗产品中的盐酸组氨酸进行质量控制。     

柱前衍生HPLC法测定人凝血因子Ⅷ中氨基酸的含量

目的建立人凝血因子Ⅷ中氨基酸含量的柱前衍生HPLC检测方法。方法采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(6-aminoquinoline-N-hydroxysuccinimide carbamate,AQC)在一定条件下与氨基酸形成稳定的衍生产物(柱前衍生),再通过高效液相色谱仪,采用氨基酸分析柱(150 mm×3. 9 mm,4μm)检测,以不同流动相进行梯度洗脱[在《中国药典》三部(2015版)的基础上进行调整],柱温为37℃,流速为1. 0 mL/min,检测波长为248 nm。同时验证方法的系统适应性、专属性、线性范围、精密性及准确度。结果甘氨酸及盐酸赖氨酸均可在25 min内获得较好分离,与相应相邻色谱峰之间的分离度均 1. 5,拖尾因子在0. 95～1. 40之间;各样品的氨基酸种类均能正确检出,混合样品与单纯样品出峰时间保持一致,且供试品溶液与对照品溶液主峰保留时间相对偏差均2%;当甘氨酸浓度在12. 5～62. 5μg/mL,盐酸赖氨酸浓度在4. 0～20. 0μg/mL时,与相应氨基酸与内标峰面积比呈良好的线性关系,相关系数(r)分别为0. 999 9和0. 999 8;甘氨酸及盐酸赖氨酸重复性的相对标准偏差(RSD)分别为0. 4%和0. 5%,中间精密度RSD分别为1. 3%和1. 0%;两种氨基酸的回收率均在95%～105%范围内,RSD均≤2%。结论建立的方法具有良好的专属性、精密性及准确度,可用于测定人凝血因子Ⅷ中的氨基酸含量。     

冻干人凝血酶中三羟甲基氨基甲烷含量离子色谱-脉冲安培测定法的建立及验证

目的建立检测冻干人凝血酶(Thrombin,TB)中三羟甲基氨基甲烷(Tris)含量的离子色谱-脉冲安培法,并进行方法验证。方法以戴安Ionpac CS16为阳离子交换色谱柱,40 mmol/L甲基磺酸(Methylsulfonic acid,MAS)溶液为淋洗液,流速为1.0 m L/min;采用500 mmol/L氢氧化钠溶液进行柱后衍生,流速:0.3 m L/min;柱温:30℃;进样体积:25μL;经脉冲安培检测器进行检测。同时对该方法进行专属性、精密度、准确性验证,并确定方法的线性范围、检测限和定量限。结果该方法可特异性检测Tris含量,供试品中甘氨酸、枸橼酸离子、钠离子等物质对Tris的测定无干扰;精密度RSD为0.18%;加标样品的平均回收率为98.1%,RSD≤5%;Tris对照品在0.01~0.08 mmol/L的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=1 755.3 X+1.838,R2=0.999 8;检测限和定量限分别为0.004和0.012 mg/L。结论成功建立了冻干TB中Tris含量的离子色谱-脉冲安培检测法,且方法具有良好的特异性、精密度及准确性。     

离子交换色谱法测定注射用双黄连(冻干)中氨基酸的含量

应用氨基酸自动分析仪,采用离子交换色谱-柱后衍生化法,测定注射用双黄连(冻干)样品、中间体及其药材中游离和水解后的氨基酸的含量。结果显示,注射用双黄连(冻干)成品3批样品中游离氨基酸含量分别为0.46%,0.38%,0.37%,总氨基酸含量分别为1.30%,1.40%,1.20%;金银花中间体中游离氨基酸和总氨基酸含量分别为1.07%和3.36%,黄芩中间体中游离氨基酸和总氨基酸含量分别为0.01%和0.1%,连翘中间体中游离氨基酸和总氨基酸含量分别为0.05%⁰.85%;金银花药材中游离氨基酸和总氨基酸含量分别为0.88%和9.40%,黄芩药材中游离氨基酸和总氨基酸含量分别为0.26%和4.73%,连翘药材中游离氨基酸和总氨基酸含量分别为2.83%和5.86%,该实验结果为注射用双黄连(冻干)质量标准的提高提供了参考依据。     

离子交换色谱法测定注射用双黄连(冻干)中氨基酸的含量

应用氨基酸自动分析仪,采用离子交换色谱-柱后衍生化法,测定注射用双黄连(冻干)样品、中间体及其药材中游离和水解后的氨基酸的含量。结果显示,注射用双黄连(冻干)成品3批样品中游离氨基酸含量分别为0.46%,0.38%,0.37%,总氨基酸含量分别为1.30%,1.40%,1.20%;金银花中间体中游离氨基酸和总氨基酸含量分别为1.07%和3.36%,黄芩中间体中游离氨基酸和总氨基酸含量分别为0.01%和0.1%,连翘中间体中游离氨基酸和总氨基酸含量分别为0.05%~0.85%;金银花药材中游离氨基酸和总氨基酸含量分别为0.88%和9.40%,黄芩药材中游离氨基酸和总氨基酸含量分别为0.26%和4.73%,连翘药材中游离氨基酸和总氨基酸含量分别为2.83%和5.86%,该实验结果为注射用双黄连(冻干)质量标准的提高提供了参考依据。     

HPLC测定盐酸美金刚片的含量和溶出度

目的：采用氯甲酸-9-芴基甲酯柱前衍生HPLC法测定盐酸美金刚片的含量和溶出度。方法：样品与氯甲酸-9-芴基甲酯衍生试剂室温静置30 min后,进样测定,采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6×150 mm,5μm),流动相为乙腈-水(80∶20),流速2.0 mL/min,检测波长210 nm。结果：方法的线性范围为0.030216～302.16μg/mL(r=0.9999);平均回收率为100.6%～101.1%,RSD=0.4%(n=9);在室温条件下,衍生产物在24h内稳定。结论：所用方法简单快速、专属性好、结果准确可靠,可用于盐酸美金刚片的含量和溶出度测定。     

一种测定农药氨基寡糖素含量的高效液相色谱方法

建立一种高效液相色谱法测定氨基寡糖素产品中有效成分含量的方法。用8 mol/L的盐酸在98℃下水解氨基寡糖素4 h，再以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为衍生剂对水解产物进行衍生，采用高效液相色谱法，以乙腈-磷酸盐缓冲液作为流动相，使用SB-C₁₈色谱柱和PDA检测器，在波长为254 nm下对氨基寡糖素母药及氨基寡糖素可溶液剂中氨基寡糖素的含量进行分析。该方法的氨基寡糖素线性范围为1～264 mg/L，线性相关系数为0.999 9，氨基寡糖素母药及氨基寡糖素可溶液剂的相对标准偏差分别为0.69%和1.43%，水解回收率分别为95.1%～98.2%和95.2%～99.4%，衍生回收率分别为97.6%～104.1%和98.5%～103.8%。该方法准确、快速，适用于氨基寡糖素相关产品中有效成分的检测。     

亚硝化衍生检测除草剂产品中草甘膦方法比较

[目的]比较2种检测草甘膦含量的方法,选出准确、重现性好的方法。[方法]用亚硝化法处理样品,用紫外分光光度法和柱前衍生-高效液相色谱法分别检测其草甘膦真实含量。[结果]前者方法绘制的标准曲线的线性相关系数R2=0.999 6,检测3个样品所得RSD分别为4.31%、7.03%和9.07%。后者方法绘制的标准曲线的线性相关系数R2=0.999 3,检测3个样品所得RSD分别为0.94%、1.86%和1.76%。[结论]柱前衍生-高效液相色谱法适用于检测产品中草甘膦含量,可推广应用于果蔬等食品中草甘膦微量残留的检测分析。     

RP-HPLC柱前衍生化法测定壳聚糖喷雾剂盐酸氨基葡萄糖含量

本实验旨在建立反相高效液相柱前衍生化色谱法测定壳聚糖喷雾剂盐酸氨基葡萄糖含量。实验采用Kromasil C18色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸盐缓冲液为流动相,梯度洗脱,流速0.6 m L·min-1。实验结果表明,制剂中盐酸氨基葡萄糖衍生化后产生的2个异构体均达到良好分离,加样回收率平均值为90.09%,RSD为0.91%。本实验所建立的反相高效液相柱前衍生化色谱方法专属性强,可用于壳聚糖喷雾剂质量控制。     

氯化钠含量对人凝血因子Ⅷ冻干品结晶形态的影响

目的研究人凝血因子Ⅷ(FⅧ)中氯化钠含量与冻干品结晶形态的关系,为FⅧ冻干品的质量控制提供依据。方法采用阴离子交换凝胶柱层析法制备高纯度的FⅧ溶液,分别加入氯化钠至低中高浓度(40、80、160 mmol/L)后,真空冻干,并与添加160 mmol/L氯化钠和100 mmol/L甘氨酸的冻干品进行对比。目测法观察冻干品外观,扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)下观察结晶形态;差示扫描量热法(differential scanning calorimeter,DSC)检测热力学性质;参考《中国药典》三部(2010版)检测FⅧ活性、含水量、复溶时间。结果 FⅧ溶液随着盐浓度增加,冻干品外观依次变差,由疏松网孔状结构变致密片层状结构,共晶点降低,凝血活性降低,复溶时间延长,含水量增加;添加甘氨酸作为保护剂的冻干品外观明显变好,呈疏松网孔状结构,共晶点高,凝血活性强,复溶时间短,含水量低。结论氯化钠含量对冻干品结晶形态有显著影响,可在溶液配制阶段调节氯化钠含量及添加保护剂,以控制冻干品的结晶形态。     

美洲大蠊糖蛋白分子量分布及氨基酸和单糖组成分析

目的：对美洲大蠊糖蛋白(PAG)的分子量分布进行测定,并对构成PAG的氨基酸和单糖组成进行分析。方法：采用HPLC-ELSD法检测PAG的分子量分布;采用HPLC柱前衍生化法测定PAG中氨基酸和单糖的组成。结果：PAG分子量分布可分为4段,分子量大于66 kDa,占比约0.40%;分子量在66～14.5 kDa,占比约79.05%;分子量在14.5～5.8 kDa,占比约13.65%;分子量小于5.8 kDa,占比约6.90%。PAG由天冬氨酸、酪氨酸、丙氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、苏氨酸、精氨酸、甘氨酸、缬氨酸和甘露糖、盐酸氨基葡萄糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖组成。结论：本实验建立的PAG分子量分布测定的方法,可有效控制PAG分子量分布;PAG由10氨基酸和7种单糖组成。     

注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯处方工艺研究

本文研究了注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的处方及工艺。采用正交试验设计,以冻干得率为考察指标,考察冷冻温度、升华温度、冻干时间、灌装体积4个因素不同水平的冻干效果。结果表明,注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯最佳冻干工艺为A3B2C1D3,即预冻温度-45℃,升华温度-0℃,冻干时间50h,灌装量10mL为最佳工艺。该冻干工艺合理可行,冻干产品质量稳定,符合生产需求。     

脊髓灰质炎病毒冻干保护剂的筛选

目的筛选脊髓灰质炎病毒冻干保护剂。方法将不同配方的冻干保护剂与脊髓灰质炎病毒(SabinⅠ型、SabinⅡ型及中Ⅲ2型)混合,进行冻干,并检测冻干前后病毒感染性滴度及冻干后的热稳定性。结果经检测发现,第Ⅷ组配方(海藻糖8%、人白蛋白1%、山梨醇5%、明胶0·5%和甘氨酸1%)在脊髓灰质炎病毒的冻干过程中保护作用较好。冻干前后感染性滴度下降在0·5LgCCID50/ml以内,且热稳定性好,37℃放置1周后SabinⅠ型、SabinⅡ型及中Ⅲ2型病毒的感染性滴度平均下降分别为0·2、0·3和0·4LgCCID50/ml,而相应对照组的感染性滴度平均下降分别为1·1、1·1和1·3LgCCID50/ml,二者差异有显著意义(P<0·05)。结论含有海藻糖、人白蛋白、山梨醇、明胶和甘氨酸的保护剂对脊髓灰质炎病毒冻干具有良好的保护效果。     

吸附无细胞百白破联合疫苗中游离甲醛含量柱前衍生反相高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的建立检测吸附无细胞百白破联合疫苗中游离甲醛含量的柱前衍生反相高效液相色谱法,并进行验证。方法以2,4二硝基苯肼(DNPH)为衍生剂,采用ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以70%乙睛溶液为流动相进行等度洗脱,流速为1 ml/min,检测波长为360 nm,进样量为10μl。对该方法的专属性、线性范围、精密度、准确度进行验证。用建立的方法检测10批吸附无细胞百白破联合疫苗中的游离甲醛含量。结果DNPH、甲醛、戊二醛的保留时间分别为3.148、4.178和11.058 min,甲醛的拖尾因子为1.07,与戊二醛的分离度为26.8;甲醛浓度在20~100μg/ml范围内,与峰面积呈良好的线性关系,相关系数(r)为0.998 3;同一人员连续重复检测6次结果的相对标准偏差(RSD)为0.5%,2名人员于不同时间重复检测6次结果的RSD为0.6%;9份加标供试品溶液甲醛含量的回收率为101.0%~106.0%。10批吸附无细胞百白破联合疫苗中的游离甲醛含量均符合规定。结论建立的柱前衍生反相高效液相色谱法具有良好的精密度及准确性,可用于测定吸附无细胞百白破联合疫苗中的游离甲醛含量。     

柱前衍生高效液相色谱法测定盐酸苯海索中甲醛

目的:建立柱前衍生高效液相色谱法测定盐酸苯海索中甲醛的含量。方法:以2,4-二硝基苯肼作为衍生化试剂,以C18(4.6mm×150mm,5μm)为色谱柱,以磷酸溶液(取磷酸5.75g,加水稀释至1000ml,用氨水调pH值至2.85)-乙腈(50:50)为流动相;检测波长为336nm,进样量为20μl,流速为1.0ml/min。结果:甲醛在2.977～1488.7ng/ml范围内成良好的线性关系(R~2=0.9997);检出限为0.595ng/ml,定量限为2.977ng/ml;加标回收率平均值为90.1%(RSD=1.56%,n=9)。结论:经过方法学验证,该方法可应用于盐酸苯海索中甲醛的检测。     

HPLC法测定盐酸鲁拉西酮片中有效成分的含量

采用DIKMA Diamonsil C18柱色谱柱,以V(1%三乙胺溶液(磷酸调节至p H 3.5))∶V(乙腈)=65∶35为流动相,流速1.0 m L/min,柱温35℃,进样量10μL,检测波长为230 nm,建立了HPLC测定盐酸鲁拉西酮片中盐酸鲁拉西酮含量的方法。该方法对于盐酸鲁拉西酮检测浓度在0.15~0.45 mg/m L范围内线性关系良好(r=0.999 5),平均回收率为99.51%(RSD=0.59%)。此方法简便、结果准确,可用于盐酸鲁拉西酮片中有效成分的含量测定。     

清胃黄连片中盐酸小檗碱、药根碱、巴马汀的含量测定

建立了同一波长HPLC法同时测定清胃黄连片中盐酸小檗碱、盐酸药根碱和盐酸巴马汀含量的方法。采用Agilent C18(4.6 mm×250 mm,5μm)反相色谱柱,流动相为乙腈-25 mmol.L-1庚烷磺酸钠和50 mmol.L-1磷酸二氢钾溶液(含0.14%三乙胺、磷酸调pH 3.0)(30∶70),检测波长为348 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL.min-1。结果表明:盐酸小檗碱、盐酸药根碱和盐酸巴马汀的进样量线性范围分别为50.10～300.60μg,10.15～101.50μg和41.84～209.20μg。其平均加样回收率分别为99.76%,(RSD=1.11%)、99.89%(RSD为1.03%)和99.70%(RSD为1.19%)。3批样品中盐酸小檗碱、药根碱及巴马汀含量分别为407.20μg/片、138.51μg/片和274.32μg/片。该检测方法对同时测定清胃黄连片中3种有效成分含量比较可靠。     

高效液相色谱法测定复方愈酚麻黄糖浆中盐酸麻黄碱的含量

目的:建立高效液相色谱法测定复方愈酚麻黄糖浆中盐酸麻黄碱的含量。方法:使用Agilent C 18色谱柱,以乙腈和0.02 mol/L磷酸二氢钾为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为210 nm,柱温为25℃。结果:盐酸麻黄碱在1.006～10.060μg范围内线性关系良好,回收方程Y=1971.5 X+159.03(r~2=0.9999),回收率在99.75%～100.93%之间(RSD为0.2%～0.8%)(N=9)。结论:经方法学验证所选方法及色谱方法可用于复方愈酚麻黄糖浆中盐酸麻黄碱的含量测定。