纤维素酶协同超声波辅助提取北沙参多糖工艺优化及其理化性质和免疫调节活性研究

目的:响应面法优化纤维素酶协同超声波辅助提取北沙参多糖（Glehniae Radix polysaccharides，GLP）的工艺条件，并对其理化性质和免疫调节活性进行研究。方法:选择酶解时间、料液比、超声时间、超声温度、纤维素酶添加量为影响因素，以GLP的得率为评价指标，进行单因素考察。在此基础上，利用Box-Behnken响应面法进行提取工艺的优化。采用扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope，SEM）、热重分析-差示扫描量热仪（Thermogravimetric Analysis-Differential Scanning Calorimetry，TGA-DSC）、傅里叶变换红外光谱（Fourier Transform Infrared Spectroscopy，FT-IR）以及高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）对GLP的理化性质进行分析，通过体外试验评估其对RAW 264.7巨噬细胞的免疫调节作用。结果:GLP的最优提取工艺:酶解时间112 min、料液比1:30 g·mL?1、超声时间41 min、超声温度65 ℃、酶添加量2%。在此条件下，GLP的得率为39.58%±0.90%。此外，GLP主要由葡萄糖组成，热稳定性良好。体外免疫调节活性结果表明，在0.5~250 μg·mL?1浓度范围内，GLP均能显著（P<0.05）促进RAW 264.7巨噬细胞的增殖，且在0.5~10 μg·mL?1浓度范围内，显著（P<0.05）抑制LPS诱导的巨噬细胞过度活化。结论:该工艺稳定、可行，北沙参多糖GLP得率相对较高，且具有一定的免疫调节活性。     

白芍多糖提取工艺优化、分子特性分析及其对巨噬细胞的增殖作用

本文采用水提醇沉法提取白芍多糖,通过正交试验确定白芍多糖提取工艺参数并分析其化学组成,使用高效尺寸排阻色谱-紫外检测器-多角度激光光散射仪-示差折光检测器联机系统检测多糖分子量,利用气相色谱-质谱联用仪分析多糖的单糖组成和链接方式,采用WST法检测白芍多糖对巨噬细胞RAW264.7增殖率的影响。结果表明:白芍多糖的最佳提取工艺参数为液料比25:1 mL/g、提取温度85 ℃、提取时间3.0 h,得率12.40%。白芍多糖含有96.2%±1.2%总糖和5.5%±0.6%蛋白质,未检出硫酸根和糖醛酸,其分子质量和回转半径分别为2.3×106 u和234.9 nm。白芍多糖主要含葡萄糖,大部分是通过（1→4）糖苷键链接的。同时,白芍多糖可以在2、5、10 μg/mL浓度范围促进RAW264.7细胞增殖。其中,10 μg/mL处理组的细胞增殖率得到大幅提升,且与其他组别的细胞增殖率存在显著性差异（P<0.05）。     

两种方法提取佛手渣多糖及其对巨噬细胞RAW264.7免疫调节活性的研究

本文以提取精油和黄酮后的佛手渣为原料,分别采用连续相变萃取(CPE)法和热水浸提法(HWE)法提取佛手多糖,在单因素实验的基础上,以佛手多糖提取率为指标,通过响应面优化得出两种方法的最佳提取工艺,并利用RAW264.7巨噬细胞模型评价佛手多糖的免疫活性,采用MTT法、中性红比色法和Griess法分别检测佛手多糖对RAW264.7细胞的生长、吞噬活性和释放NO能力的影响。结果表明,CPE法提取佛手多糖的最佳工艺条件为:温度99 ℃,时间4.5 h,流速66 L/h,提取率为16.09%±0.12%,得率为21.31%±0.13%;HWE法提取佛手多糖的最佳工艺条件为:95 ℃,时间6.0 h,液料比63 mL/g,提取率为15.43%±0.21%,得率为20.22%±0.16%;与HWE法相比,CPE法将佛手多糖提取率提高了4.28%(P<0.05),得率提高了5.39%(P<0.05),且提取时间缩短了1/4。佛手多糖在浓度低于500 μg/mL时对RAW264.7巨噬细胞无明显毒性作用,且可以促进NO的分泌以及提高吞噬活性。上述结果说明,CPE法适合佛手多糖的提取,优于传统的HWE法,且佛手多糖具有免疫类保健食品和药品开发的潜力。     

榆黄菇多糖提取工艺优化及其免疫调节活性评价

以榆黄菇为研究对象,对榆黄菇多糖（PCP）提取工艺进行优化、纯化、测定单糖组成和分子量,再对其体外免疫活性进行评价。在单因素基础上通过响应面法确定榆黄菇多糖最优提取工艺为：提取温度59.81 ℃,提取时间2.40 h,液料比29.91 mL/g,在此条件下,预测得率为18.82%,实际得率为18.60%。经DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析从榆黄菇多糖中分离纯化出3个多糖组分（PCP-1、PCP-2、PCP-3）,采用离子色谱法和高效凝胶渗透色谱法分析多糖成分和分子量,得出PCP-1由半乳糖组成,分子量为 1.90×104 u;PCP-2由半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为4.36:5.64,分子量2.76×104 u;PCP-3由岩藻糖、盐酸氨基葡萄糖、半乳糖、葡萄糖和葡萄糖醛酸组成,其摩尔比为0.07:0.11:0.51:7.46:1.85,分子量为4.81×104 u。通过体外试验评估PCP对巨噬细胞RAW264.7免疫调节活性。结果表明,PCP-1、PCP-2和PCP-3多糖质量浓度在25~200 g/mL范围内对巨噬细胞RAW264.7无毒性并具有一定增殖作用、显著提高了NO释放量并增强了巨噬细胞RAW264.7的吞噬能力。当PCP-1、PCP-2和PCP-3多糖质量浓度为200 g/mL时,巨噬细胞RAW264.7 NO释放量达到最大值,分别为11.40、11.56、11.76 moL/L。该研究结果可为榆黄菇的精深加工综合利用提供理论依据。     

盐制巴戟天多糖结构表征及其免疫活性

该研究采用水提醇沉法从盐制巴戟天中提取粗多糖（SMP）,经DEAE-52纤维素柱和葡聚糖凝胶Sephadex G 100柱分离纯化得到多糖（SMP-4）,采用红外光谱、高效凝胶渗透凝胶色谱、气相色谱和核磁共振波对SMP-4进行结构表征,并以RAW264.7巨噬细胞为模型,通过测定其细胞增殖活性和细胞因子分泌水平来评价其免疫活性。多糖结构分析表明,SMP-4是由阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖、核糖、木糖、葡萄糖和甘露糖组成的,摩尔比例为：0.55:0.23:0.16:0.03:0.02:0.01:0.01,分子量为1.32×105 u的多糖。SMP-4具有六种糖苷键,其中→3)-D-Araf-(1→占比最高,为58.35%。在免疫活性评价分析中表明,与对照组相比,在15.625~500.000 μg/mL质量浓度范围内不影响RAW264.7细胞的增殖,同时能显著地促进肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的分泌。SMP-4质量浓度为500 μg/mL时,RAW264.7细胞分泌的TNF-α质量浓度最高,为2 100.00 pg/mL（P<0.001）;在31.25 μg/mL质量浓度下,RAW264.7细胞分泌的IL-1β质量浓度最高,为14.50 pg/mL（P<0.05）。综上,SMP-4表现出良好免疫活性,具有成为一种天然的免疫调节剂的潜力。     

火炬树芽多糖提取工艺的响应面优化及红外光谱分析

以火炬树芽为原料,在单因素试验的基础上,采用响应面分析法确定其多糖的最佳提取工艺。结果表明,火炬树芽多糖提取的最佳工艺参数为液料比24∶1(mL/g)、提取时间2 h、提取温度66℃、超声时间50 min。验证优化工艺参数得到多糖得率为3.59%,与模型预测得率3.67%基本吻合,由红外光谱分析表明所得提取物为多糖类物质。     

响应面法优化白英粗多糖提取工艺及其体外抗氧化活性的分析

为了优化白英多糖的提取工艺,探究其体外抗氧化活性,本研究采用响应面法对白英多糖的超声提取工艺进行优化：通过单因素实验探究提取温度、提取时间、料液比3个因素对白英多糖得率的影响;在此基础上,采用响应面法优化提取工艺,同时应用红外光谱对白英多糖结构进行分析,并检测其体外抗氧化活性。结果表明,白英多糖的最佳提取工艺为：料液比为1:57 g/mL、提取时间58 min、提取温度65℃,在此条件下白英多糖得率为7.54%±0.12%。红外光谱分析表明白英多糖具有典型的多糖结构。白英多糖对DPPH和ABTS⁺自由基的半抑制浓度(IC₅₀)分别为1.104、1.408 mg/mL,表明其具有良好的体外抗氧化活性。本研究为白英多糖的开发利用提供了理论依据。     

安康富硒茶中硒多糖的提取及抗氧化性研究

本研究以安康富硒茶为原料,利用单因素实验和正交实验优化茶硒多糖的提取工艺,并通过DPPH·、·OH清除实验和HepG2细胞氧化损伤模型评估茶硒多糖的抗氧化性。结果表明：茶硒多糖的最佳提取工艺：超声预处理（500 W,20 min）,液料比30:1 mL/g,提取温度85℃,提取时间150 min,茶硒多糖得率为（9.67±1.53）%;茶硒多糖（800μg/mL）的DPPH·和·OH清除率分别为（74.33±0.32）%和（70.16±0.21）%,均显著高于普通茶多糖;茶硒多糖能够显著缓解H2O2诱导的HepG2细胞氧化损伤,且效果强于普通茶多糖。     

猴头菇多糖和蛋白质闪式联合提取工艺优化

采用闪式提取法同步提取猴头菇中多糖和蛋白质,在单因素试验基础上利用响应面优化提取工艺条件,并分别采用红外光谱和SDS-PAGE电泳分析多糖的结构及蛋白质分子的亚基组成。结果表明,闪式法同步提取猴头菇中多糖和蛋白质的最佳工艺参数为：提取时间70 s、液料比171 （mL/g）、粉体粒度90目、提取电压100 V,猴头菇多糖提取得率达（9.24±0.15）%,蛋白质得率为1.33%。经红外光谱分析猴头菇多糖在3 400,2 930,1 400～1 200 cm^-1附近有吸收峰;SDS-PAGE电泳分析猴头菇蛋白质主要分布在44.3,66.4 kDa附近。采用闪式提取法可同步提取猴头菇中多糖和蛋白质,且能有效保护天然产物的活性成分。     

微波辅助双水相提取百合多糖的工艺优化及其结构表征

为高效获取百合多糖和表征多糖结构，本文采用微波辅助双水相提取百合多糖，通过单因素实验和正交试验确定最佳的提取工艺；依次通过DEAE-52和Sephadex G-100柱色谱法纯化百合多糖粗提物，获得单一多糖馏分（LP2-SG），同时利用高效凝胶渗透色谱和气相色谱法分别测定LP2-SG的分子量和单糖组成，并对其结构进行初步表征。结果表明微波辅助双水相提取百合多糖的最优工艺为：微波功率400 W、硫酸铵质量分数20%和乙醇体积分数50%和料液比1:30 g/mL，百合多糖得率为10.15%±0.11%。纯化后的多糖馏分（LP2-SG）分子量为530.51 kDa，单糖组成为甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成，其摩尔比为11.63:29.85:8.46。LP2-SG在260 nm和280 nm处无特征吸收，并具有典型的多糖红外光谱吸收特性。本研究结果为百合多糖的高效提取和深度开发提供重要参考。     

知母多糖复合酶提取工艺优化及其免疫活性

本文对知母多糖的提取工艺及体外免疫活性进行研究,为知母多糖的开发利用提供理论依据。试验以复合酶提取知母粗多糖,在正交试验确定复合酶比例的基础上,通过单因素实验和响应面优化试验,确定知母多糖的最佳提取工艺;采用DEAE-52纤维素层析柱进行分离得到4种多糖组分APSE-0、APSE-1、APSE-2和APSE-3。以RAW264.7巨噬细胞为研究模型,采用MTT法、Griess法测定知母多糖各组分对细胞增殖能力和一氧化氮（NO）释放量的影响。结果表明,最佳复合酶比例为:木瓜蛋白酶16000 U/g,纤维素酶1200 U/g,果胶酶1600 U/g。最优提取工艺为酶解时间2 h,液料比15:1（mL/g）,酶解温度52 ℃,在此条件下得率为（10.58%±0.03%）。体外免疫活性实验结果证明,四种知母多糖组分均能明显促进RAW246.7巨噬细胞的增殖,APSE-0、APSE-2和APSE-3均可极显著诱导NO的释放,其中,APSE-2的免疫活性最强,可作为潜在的功能性食品或作为免疫力低下人群的膳食补充剂。剂。     

5种食用菌多糖及复配多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

探究银耳多糖、茯苓多糖、香菇多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖5种食用菌多糖及其两两复配得到的10种复配多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。将RAW264.7细胞分为正常对照组、阳性组和样品（不同浓度的银耳多糖、茯苓多糖、香菇多糖、猴头菇多糖和竹荪多糖及其10种复配多糖）处理组,通过检测巨噬细胞的细胞活力、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）分泌水平以及吞噬能力评价免疫调节作用。结果表明：与正常对照组相比,在质量浓度5 μg/mL～320 μg/mL范围内,5种食用菌多糖在一定浓度时皆能表现出显著增强巨噬细胞RAW264.7的细胞活力,提高巨噬细胞的吞噬能力,促进细胞因子TNF-α的分泌效果（P<0.05）。此外,10种复配多糖在RAW264.7细胞的细胞活力、TNF-α分泌和吞噬能力皆呈现出显著的促进效果。10种复配多糖中,基于香菇多糖和猴头菇多糖的复配多糖在浓度为160 μg/mL时促进细胞因子TNF-α的分泌效果最好;基于茯苓多糖和香菇多糖复配得到的复配多糖对细胞吞噬功能的增强效果最佳,且优于其组成多糖单独作用效果。基于银耳多糖和竹荪多糖复配得到的复配多糖在浓度为80 μg/mL时促进RAW264.7分泌TNF-α的效果优于其组成多糖单独作用,在浓度为160 μg/mL时对细胞吞噬功能的增强效果优于其组成多糖。银耳、茯苓、香菇、猴头菇、竹荪来源的多糖单独作用及其两两复配得到的复配多糖对RAW264.7细胞均具有免疫调节活性。不同多糖间可能存在相互作用,复配后免疫调节活性优于单独作用时免疫调节活性,例如茯苓多糖和香菇多糖,银耳多糖和竹荪多糖。     

龙须菜多糖的提取及其免疫调节活性研究

本文采用水提法、酸提法和酶提法提取龙须菜多糖,比较了不同方法对提取率的影响,并测定了酸提法制备的龙须菜多糖的化学组成及免疫活性。结果发现:采用柠檬酸提取龙须菜多糖的提取率最高,为27.66±0.49%,为水提法的1.86倍;其产物多糖的总糖含量、蛋白质含量、糖醛酸含量以及硫酸基含量分别为62.24±1.09%、1.54±0.15%、6.25±0.72%和16.74±0.11%,未检出多酚类物质。此外,龙须菜多糖对RAW 264.7细胞具有显著的促增殖作用,并且能够显著地提高RAW 264.7细胞吞噬中性红的能力;且龙须菜多糖不仅能够提高光老化小鼠的胸腺指数和脾脏指数,还能降低小鼠血清白介素-10的含量,提高小鼠血清肿瘤坏死因子-α的含量,这些研究表明龙须菜多糖具有较强的提高小鼠免疫功能的能力,能够缓解光老化过程中的免疫抑制现象。     

血耳多糖的提取工艺、微观结构及其抗炎症作用

采用单因素法和响应曲面法优化热水提取法提取血耳总糖的工艺条件,得到最佳提取条件:液料比124∶1、提取时间120 min和提取温度100℃,其总糖提取率可达到35.347%±0.551%。利用Sevage法、冻融法、透析和DEAE-Sepharose CL-6B柱层析等方法对血耳粗多糖进行分离纯化,得到均一组分(命名为TSP-Ⅱ)。TSP-Ⅱ的回收率为31.56%,相对分子质量是350 ku,糖含量和蛋白质含量分别为97.3%和1.05%。红外光谱显示TSP-II具有糖类物质的特征吸收峰。透射电子显微镜观察TSP-II的微观结构,显示TSP-II是无分支结构的多糖,糖链之间相互缠绕。通过1μg/mL脂多糖诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7产生炎症因子(TNF-α、IL-6和COX-2)。经脂多糖诱导的细胞添加TSP-II(75,150μg/mL)后,3种炎症因子的m RNA表达量均明显降低,说明血耳多糖TSP-II具有良好的抗炎症作用。     

响应面优化金丝小枣碱提多糖工艺及其抗氧化活性研究

以金丝小枣为原料,通过单因素考察提取温度、时间、料液比和NaOH浓度对多糖得率的影响,在此基础上进行Box-Behnken试验来优化碱提多糖的提取工艺,并对其进行总糖含量、扫描电镜、红外光谱及抗氧化活性测定。结果表明,碱提多糖最佳工艺为:料液比1:35(g/mL),提取温度80℃,提取时间120 min,NaOH浓度为0.2 mol/L,在此条件下多糖的得率为11.44%,总糖含量为69.39%。扫描电镜表明其具有不规则块状结构,内部紧实;红外光谱表明枣碱提多糖具有C=O和C-H等酸性多糖的特征吸收峰。抗氧化活性实验表明,碱提多糖具有一定清除自由基的能力,对DPPH和超氧阴离子自由基的IC₅₀分别为1.201 mg/mL和1.176 mg/mL。此研究为进一步开发枣多糖功能性食品及研究碱提多糖的构效关系提供参考。     

绿茶多糖提取工艺优化及其抗氧化活性分析

目的:优化绿茶粗多糖的提取工艺,纯化多糖并分析其结构和抗氧化活性。方法:通过单因素实验结合响应面分析的方法,优化提取工艺,采用液相色谱、气相色谱和红外光谱分析多糖结构,并通过体外抗氧化实验研究其抗氧化活性。结果:多糖最佳提取条件为:液料比30:1 mL/g,提取温度60 ℃,提取时间70 min。此条件下,绿茶多糖的得率可达10.56%。多糖结构分析结果表明,其总糖、蛋白质和糖醛酸的比例分别为90.75%±3.69%、0.92%±0.09%和0.82%±0.07%,分子量约为7.3 kDa,主要由葡萄糖和半乳糖组成（摩尔比1.00:0.13）。体外抗氧化实验结果表明,在2 mg/mL浓度下,GTP对ABTS+自由基、DPPH自由基和羟基自由基（OH·）清除率分别为39.8%、72.2%和32.5%。结论:本工艺中,绿茶多糖得率高,分子量低,且具有较高的抗氧化活性。     

金柚幼果多糖的结构鉴定与免疫调节作用

为充分开发柚子产业,进一步提高金柚幼果的利用率,本文以金柚幼果为原料,采用超声辅助酶法提取出金柚幼果多糖（PFCP）,得率为9.12%。通过扫描电镜、粒径仪、气相色谱、红外光谱等对PFCP的结构进行表征,结果表明PFCP表面为光滑的多孔网状结构,粒径为101 μm,分子量为3.31 ku,由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖醛酸组成的,摩尔比例为0.056:0.138:0.463:0.059:0.186:0.285,是一种酸性杂多糖,主要由-OH、C=O、C-O、C=C和N-H结构构成,其糖链含有苯环和吡喃环。本研究借助小鼠RAW 264.7巨噬细胞模型,发现PFCP在62.5~1000 μg/mL的浓度范围内对小鼠巨噬细胞无明显毒副作用,能显著提高RAW 264.7巨噬细胞表达NO、TNF-α及IL-6细胞因子的分泌量,在1000 μg/mL浓度时细胞因子的表达量最高,NO为42.87 μM,TNF-α为14759.47 pg/mL,IL-6为62.20 pg/mL,表明PFCP具有较强的免疫活性。该研究可为金柚幼果的开发利用提供一定的研究基础。     

黄精茶饮的制备工艺及其免疫调节作用研究

目的 优化祁门红茶和多花黄精的提取工艺, 并评估黄精茶饮的免疫调节作用。方法 选用多花黄精和祁门红茶为原料, 以茶多酚和黄精多糖含量为指标, 通过单因素实验和正交实验分别对多花黄精和祁门红茶提取的工艺参数进行优化; 通过感官评分确定多花黄精与祁门红茶的配比。在此基础上, 通过体外细胞实验和动物实验评估黄精茶饮的免疫调节能力。结果 祁门红茶的最佳提取工艺参数为: 茶水比1:80 (g/mL)、浸提时间30 min、浸提温度100℃, 茶多酚提取率为(6.79±0.10)%。多花黄精的最佳提取工艺参数为: 料液比1:20 (g/mL)、浸提时间120 min、浸提温度90℃, 黄精多糖提取率为(56.94±1.56)%。黄精茶饮的最佳配比为: 祁门红茶与多花黄精的体积比为1:3, 黄精茶饮中多酚含量为(1.59±0.04)%, 多糖含量为(46.07±2.91)%。体外细胞实验表明, 黄精茶饮(500 μg/mL)能显著促进RAW264.7巨噬细胞的增殖(P<0.01), 并能刺激RAW264.7巨噬细胞吞噬中性红(P<0.01)。动物实验发现, 与模型组相比, 黄精茶饮能够显著促进免疫抑制小鼠脾脏和胸腺指数的恢复(P<0.05或P<0.01)。结论 黄精茶饮口感香甜清冽, 颜色澄清透亮, 在体内外具有一定的免疫增强作用, 研究结果可为茶和药食同源产品的开发提供新思路。     

坦洋工夫红茶多糖提取工艺优化及其抑制肿瘤活性分析

以坦洋工夫红茶为原料,以多糖得率为考察指标,在单因素试验的基础上,采用响应面分析法优化红茶多糖提取工艺,其最佳工艺条件为液料比30∶1（mL/g）、提取温度60℃、提取时间70min,多糖得率达10.52%。经纯化后多糖质量分数达76%,含有糖醛酸和吡喃环结构,主要由阿拉伯糖（34%）、半乳糖醛酸（30%）、葡萄糖（14%）、半乳糖（13%）、岩藻糖（5%）和鼠李糖（4%）组成。BALB/c小鼠体内抑制肿瘤实验表明,红茶多糖可显著抑制荷瘤小鼠体内实体肿瘤的生长,并有效保护其脾脏和胸腺。该实验结果为红茶多糖的提取及其抗肿瘤活性研究提供一定理论依据。     

太子参多糖的纯化、组成及对LPS损伤Raw264.7巨噬细胞的保护作用

太子参是我国传统中药材,为明确其多糖的组成与对Raw 264.7巨噬细胞的保护作用,本研究采用水提醇沉法提取其主要活性成分多糖,并通过阴离子交换柱层析纯化得太子参多糖（Pseudostellaria heterophylla polysaccharide,PHP）;利用凝胶渗透色谱（GPC）法、高效液相色谱（HPLC）法测定其分子量、单糖组成,紫外光谱扫描、傅里叶红外光谱扫描初步解析其结构特征。进一步通过小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（Raw 264.7）模型探究了PHP对LPS诱导损伤的保护作用。结果表明,太子参粗多糖的得率为8.23%,纯度为51.47%,而经DEAE-52柱层析分离纯化后得的PHP纯度达到了80.52%;PHP的分子量在500~92×103 Da之间,单糖组成为葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖及葡萄糖醛酸。细胞实验确定80~640 μg/mL为PHP的安全剂量,此浓度下可以提高脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导损伤下的细胞存活率,640 μg/mL的PHP剂量下存活率最大提升了7.21%,并且PHP可改善Raw 264.7巨噬细胞形态。综上,本研究提纯了太子参中多糖,对PHP进行了结构表征,并初步证实了PHP对LPS诱导损伤的Raw 264.7巨噬细胞有保护作用,这为太子参多糖的功能活性探索及构效、量效等深入研究奠定了基础。