燕麦麸ACE抑制肽酶解工艺优化及其稳定性研究

为了充分利用燕麦蛋白资源,增加燕麦加工产品附加值,本课题以燕麦加工副产物燕麦麸为实验原料,采用酶解技术制备燕麦麸ACE(Angiotensin Converting Enzyme)抑制肽。通过超微粉碎、有机溶剂萃取、酶解等处理技术,打破原料致密的结构,去除其中的淀粉、脂类等可能影响到肽的制备与纯化的物质。在酶的筛选试验中,以酶解产物ACE抑制率和水解度为指标选出最佳水解用酶为Alcalase 2.4L碱性蛋白酶。对最佳酶解工艺和肽的稳定性进行了研究。结果表明最佳酶解工艺参数为:加酶量4500u/g、pH 8.1、温度56℃、底物浓度7.5%,得到的ACE抑制率抑制率为70.67%。IC50为0.83mg/mL。最后,研究了燕麦麸ACE抑制肽的消化稳定性,结果显示模拟消化处理后肽的活性并无明显变化,稳定性良好。     

酶解猪血浆蛋白粉制备ACE抑制肽的工艺优化

选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解猪血浆蛋白粉,通过单因素和正交试验考察其水解产物对ACE的抑制活性,并优选酶解工艺条件。结果显示:胃蛋白酶适宜水解血浆蛋白粉,制备ACE抑制肽;影响胃蛋白酶水解的4个因素主次顺序为底物质量浓度>酶解时间>pH值>酶与底物质量比(m酶:m底物),其中底物质量浓度和酶解时间的影响显著(P<0.05),pH值和m酶:m底物的影响不显著(P>0.05);适宜胃蛋白酶水解的条件为pH2.3、水解时间1.5h、底物质量浓度1g/100mL、m酶:m底物1:6。     

大米ACE抑制肽制备工艺优化和生物活性研究

采用胰蛋白酶从大米蛋白中酶解制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,在单因素实验的基础上,采用响应面法(RSM)对工艺条件进行了优化.在最佳酶解条件下,大米蛋白水解液ACE抑制率可达75.17％.酶解产物经大孔树脂脱盐,97.99％的大米ACE抑制肽的分子质量主要分布在1000 U以下,大米ACE抑制肽的IC50值为1....     

酶解脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽

以实验室自制的脱脂蚕蛹蛋白为原料,利用酶工程技术,通过对中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶等的筛选及单因素和响应面优化试验,对ACE抑制肽的制备工艺条件进行较系统的研究。结果表明：选择碱性蛋白酶作为脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽的酶,制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为料液比11.88:100、温度50.22℃、pH 9.46、加酶量7.03%、酶解4h。在此条件下制备的ACE抑制肽的ACE抑制率达到41.98%。     

酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

为获取酶解蛋清蛋白制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺参数,研究4种蛋白酶酶解蛋清蛋白所得产物对ACE的抑制活性,筛选出胰蛋白酶作为制备蛋清蛋白ACE抑制肽的适宜用酶。运用响应曲面法研究酶解时间、底物浓度([S])和酶与底物质量比([E]/[S])对制备ACE抑制肽工艺的影响,建立以上3因素与ACE抑制率关系的数学模型。结果确定胰蛋白酶酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的适宜酶解条件为酶解时间4.87h、[S]3.06%、[E]/[S]2.91%、酶解温度45℃、pH7.4,此条件下制备的蛋清蛋白酶解产物ACE抑制率达到50.73%。     

球磨辅助酶解制备南瓜籽ACE抑制肽

以南瓜籽蛋白为原料,通过球磨预处理辅助酶解法制备血管紧张素转换酶（ACE）抑制肽。以ACE抑制率和水解度为评价指标,对蛋白酶进行筛选。采用单因素试验研究球磨时间、酶解时间、底物质量浓度、pH和酶解温度对酶解产物ACE抑制率和水解度的影响,在此基础上,以ACE抑制率为考察指标,采用响应面法对球磨辅助酶解工艺条件进行优化。结果表明：球磨预处理可显著提高南瓜籽蛋白的酶解效率;最佳球磨辅助酶解工艺条件为选用碱性蛋白酶、球磨时间6 min、酶解时间10 h、底物质量浓度0.08 g/mL、pH 8.5、酶解温度55 ℃,在此条件下所得ACE抑制肽的ACE抑制率可达(86.65±0.55)%。     

响应面法优化猪血红蛋白制备ACE抑制肽的酶解工艺条件

以猪血红蛋白为原料,采用胃蛋白酶水解猪血红蛋白制备ACE抑制肽。以体外ACE抑制率和水解度为指标,通过单因素试验对酶解温度、酶解pH值、底物质量浓度、加酶量、酶解时间等酶解工艺参数进行研究,并用响应面法优化酶解工艺,建立二次多项数学模型。结果表明,胃蛋白酶水解猪血红蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺参数为酶解温度37.60℃、酶解pH 1.98、底物质量浓度4.98g/100mL、加酶量3.04%、酶解时间4h,酶解产物的最大ACE抑制率为70.09%。     

超声波协同双酶复合酶解米渣蛋白制备ACE抑制肽工艺研究

运用超声波协同双酶复合酶法水解米渣蛋白制备ACE抑制肽。超声波预处理后米渣蛋白水解物ACE抑制活性显著上升,碱性蛋白酶水解产物ACE抑制活性最强。通过单因素分析和响应面优化,得出最优水解条件为:超声功率1 000W,超声时间25min,酶解时间2.5h,料液比1∶8,加酶量3 000U/g。在此基础上复合中性蛋白酶水解,水解时间缩减至2.0h。水解产物通过超滤以及Sephadex G-25凝胶层析后,得到一分子量为338u,最强ACE抑制活性IC_(50)为116μg/ml组分P2。     

分步酶解制备乳清蛋白源ACE抑制肽的工艺研究

以云南乳饼加工副产物—乳清水中获得的乳清蛋白粉为原料,采用分步酶解技术获得ACE抑制肽。通过酶的选择、单因素和响应面优化实验,选取了碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶为适宜用酶,确定了最佳酶解工艺条件为酶解温度50℃,酶解时间3 h:2 h,料液比1:35(g/mL),此时酶解产物的ACE率达到88%。本研究可为后续相关功能性食品开发提供借鉴。     

南极磷虾肽制备工艺优化及抗氧化测定

目的:优化南极磷虾肽的提取工艺。方法:选取料液比、加酶量、温度、pH以及时间5因素,在单因素实验的基础上采用L9(34)正交实验,计算各组酶解液的水解度。结果:正交分析软件得到木瓜蛋白酶对磷虾最佳的酶解条件为:料液比1:2,加酶量3000U/g,酶解温度55℃,酶解pH7.0,酶解时间3h,验证实验测得最优条件下水解度达24.73%。结论:酶解液经浓缩、喷雾干燥后,得到淡黄色具虾香味的粉末,得率6.48%,多肽含量达87.32%,通过与维生素E的比较,表明其在抗氧化方面具有良好的清除自由基的能力,说明该方法制备得到的南极磷虾肽在实际生产中有较为广阔的应用前景。      

南极磷虾肽制备工艺优化及抗氧化测定

目的:优化南极磷虾肽的提取工艺。方法:选取料液比、加酶量、温度、pH以及时间5因素,在单因素实验的基础上采用L9(34)正交实验,计算各组酶解液的水解度。结果:正交分析软件得到木瓜蛋白酶对磷虾最佳的酶解条件为:料液比1:2,加酶量3000U/g,酶解温度55℃,酶解pH7.0,酶解时间3h,验证实验测得最优条件下水解度达24.73%。结论:酶解液经浓缩、喷雾干燥后,得到淡黄色具虾香味的粉末,得率6.48%,多肽含量达87.32%,通过与维生素E的比较,表明其在抗氧化方面具有良好的清除自由基的能力,说明该方法制备得到的南极磷虾肽在实际生产中有较为广阔的应用前景。     

酶解鲢肉制取ACE抑制肽工艺条件的优化

采用复合风味酶水解鲢(Hypophthalmichthys molitrix)肉制取血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,通过正交试验对水解工艺进行优化,并用SephadexG-15凝胶柱对酶解产物进行分离。结果表明:复合风味酶在温度50℃、pH8.0、料液比1:6、加酶量5000U/g.pr、水解12h的条件下,酶解产物的水解程度及对ACE的抑制率最高,其水解度为34.40%,氮利用率为92.01%,抑制率为66.52%;该酶解产物中相对分子质量较大和较小部分的ACE抑制活性偏低,只有相对分子量在一定范围内的短肽才对ACE具有较好的抑制作用,其中在第3洗脱峰处得到的ACE抑制肽活性最高,其ACE抑制率为63.04%。     

酶解鳙鱼鱼肉蛋白制备ACE抑制肽工艺参数优化

采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4L对鳙鱼鱼肉蛋白进行水解,制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽。以酶解物ACE抑制率为指标,先进行单因素实验,确定底物浓度([S])、温度、pH、酶用量及水解时间5个因素的最适水平范围,再通过响应面分析法(RSM)对加酶量、温度和水解时间3个酶解工艺参数进行优化。结果表明:Alcalase水解鳙鱼鱼肉蛋白制备ACE抑制肽的最佳酶解条件为:[S]6%、加酶量2.2%、温度57℃,pH9.0及水解时间6.4h,此条件下酶解物ACE抑制率理论值为81.77%,验证实验结果ACE抑制率为81.52%,与理论值相符合。     

酶解鸭骨制取ACE抑制肽工艺条件的优化

采用木瓜蛋白酶水解鸭骨制取血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,通过四元二次通用旋转设计优化水解工艺,建立数学模型,分析水解度与ACE抑制率的相关性,并通过不同规格的超滤离心管对酶解产物进行分离.结果表明,木瓜蛋白酶在底物浓度11.5g/100mL,酶底比8000U/g,水解温度60℃,水解时间5.5h,pH值为5.5的条件下,酶解产物的ACE抑制率最高,达到85.71％,水解度为20.81％,且水解度与ACE抑制率显著相关,曲线拟合方程为Y=- 157.572+21.215X-0.491X2.超滤后分子量为2ku～3ku的肽段ACE抑制率最高,达到91.67％,半抑制浓度(IC50)为0.927mg/mL,ACE抑制肽回收率为1.99％.     

酶解法制备榛子粕ACE抑制肽工艺研究

以榛子粕为原料,利用中性蛋白酶酶解制备ACE抑制肽。以酶解产物的ACE抑制率为指标,采用单因素试验分别考察底物质量分数、酶用量、酶解温度、pH和酶解时间的影响。在单因素试验基础上设计响应面Box-Behnken中心组合试验对酶解条件进行优化。结果表明:榛子粕最佳酶解工艺条件为底物质量分数5%、酶用量0.3%、酶解温度40℃、pH7.5、酶解时间1.5h,在此条件下榛子粕酶解产物的ACE抑制率达到91.76%。     

响应面法优化酶解制备绿豆蛋白ACE抑制肽的研究

以绿豆蛋白粉为原料制备绿豆ACE抑制肽,研究酶解时间、酶解温度、酶解pH、底物浓度、加酶量对ACE抑制率和水解度的影响,通过单因素实验得到最佳条件为:酶解温度55℃,酶解pH8,底物浓度2%,加酶量6000u/g。随后选取对ACE抑制率有显著影响的四个因素:酶解温度(X1)、加酶量(X2)、酶解pH(X3)和酶解时间(X4)进行四因素三水平的响应面分析实验,经过优化得到最优条件为:酶解温度55℃,酶解pH8.25,底物浓度1.75%,加酶量6200u/g。在此条件下,绿豆ACE抑制肽的抑制率为84.83%。     

复配酶法制备南极磷虾鲜味酶解液的工艺优化

以脱脂南极磷虾粉为原料,采用复配酶法制备鲜味酶解液。以感官评价、多肽得率、水解度等评价手段,进行外源酶的筛选及单因素实验。为进一步优化酶解液滋味,以呈鲜味的氨基酸总量为指标进行酶解工艺优化。结果表明:最佳酶解条件为:胰蛋白酶和胃蛋白酶复配比1:100,总加酶量为2800 U/g,料液比1:4 g·mL?1,酶解pH7.0,酶解温度40 ℃,酶解时间3 h,该条件下获得的酶解产物中鲜味游离氨基酸含量为331.79 mg/100 mL。除色氨酸外,其余八种必需氨基酸含量占总氨基酸的63.66%,游离苦味氨基酸占总氨基酸的27.83%,游离鲜甜味氨基酸占总氨基酸26.22%,与鲜味形成具有关键作用的游离谷氨酸和游离天冬氨酸共占总游离氨基酸的10.26%。本研究可为南极磷虾鲜味调味料等产品的开发提供理论基础和技术指导。     

酶解燕麦蛋白制备ACE抑制肽的研究

本研究以燕麦蛋白为原料,分别选用Alcalase、Neutrase 和Protamex 进行单独或联合水解,经活性炭YD-303脱色、大孔吸附树脂DA-201C Ⅱ脱盐及分级纯化、Sephadex G-25 凝胶色谱柱进一步分离,以获得高纯度、高活性的血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。结果表明：单酶反应时,Alcalase 水解2h所获得的产物对ACE 的抑制率可达85.40%;YD-303 处理燕麦蛋白酶解液脱色最优工艺为添加量1.5%(W/V)、pH3.5、温度40℃、脱色时间75min。利用75% 乙醇洗脱大孔吸附树脂DA-201C Ⅱ所获得的组分ACE 抑制活性最高,其经Sephadex G-25 进一步分离纯化,得到四个分离组分,第四组分的ACE 抑制活性最高,抑制率为95.6%。     

响应面法优化酶解制备绿豆蛋白ACE抑制肽的研究

以绿豆蛋白粉为原料制备绿豆ACE抑制肽,研究酶解时间、酶解温度、酶解pH、底物浓度、加酶量对ACE抑制率和水解度的影响,通过单因素实验得到最佳条件为:酶解温度55℃,酶解pH8,底物浓度2%,加酶量6000u/g。随后选取对ACE抑制率有显著影响的四个因素:酶解温度(X1)、加酶量(X2)、酶解pH(X3)和酶解时间(X4)进行四因素三水平的响应面分析实验,经过优化得到最优条件为:酶解温度55℃,酶解pH8.25,底物浓度1.75%,加酶量6200u/g。在此条件下,绿豆ACE抑制肽的抑制率为84.83%。      

酶解条浒苔蛋白制备ACE 抑制肽

为了开发利用绿潮藻类条浒苔中含量丰富的蛋白质,采用可见分光光度法测定酶解物对ACE的抑制作用,考察碱性蛋白酶、Alcalase和胰蛋白酶对条浒苔蛋白的水解作用及其水解产物的ACE抑制活性,筛选出Alcalase作为酶解条浒苔蛋白制备具有降血压活性酶解物的适宜水解酶。在单因素试验的基础上,采用响应面分析法对该酶的酶解条件进行优化。结果表明,最佳酶解条件为：料液比1:50、加酶量2982U/g pro、温度47.9℃、pH7.53、酶解时间90min,在该条件下,酶解物的ACE抑制率IC50值为0.66mg/mL。不同截留分子质量的组分中,分子质量范围在1～5kD,平均肽链长度为16的组分ACE抑制活性最强,模拟体外消化实验结果表明,分子质量小于10kD的组分具有一定的对消化酶的抗性。