甜菜树贝壳杉烯合酶基因的克隆与原核表达

本文作者研究了赤霉素合成途径中的关键酶-贝壳杉烯合酶,对其功能的研究可以为以后优化品种提供基因层面的基础。首先通过RACE-PCR技术,从甜菜树叶片中克隆得到贝壳杉烯合酶基因(Ent-kaurene synthase gene,Yl KS)的全长c DNA,共2 512 bp(Gen Bank登录号为KP872698),其ORF长度为2 232 bp,共编码743个氨基酸,预测蛋白质相对分子质量大小为84 987,蛋白质等电点为5.264,表明该蛋白质呈酸性。将该基因构建到表达载体pET32a中,得到重组质粒pET-32a-Yl KS。通过将p GG/An2、p IRS和重组质粒pET-32a-Yl KS 3个质粒共转入菌株BL21(DE3)中,得到重组菌株,并进行发酵。通过SDS-PAGE分析发现,重组蛋白成功得到了表达。最后通过对发酵产物进行萃取,并使用GC-MS进行检测,确定了该基因所编码的酶确实是贝壳杉烯合酶。     

RP-HPLC法测定糙叶五加不同部位中五加酸和贝壳烯酸含量

为了建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定糙叶五加不同部位中五加酸和贝壳烯酸的定量分析方法,本研究采用RP-HPLC外标法测定了五加酸和贝壳烯酸含量。所用色谱柱:ODS-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(0～60min时乙腈含量为10%～100%,60～70min时乙腈含量为100%);检测波长207nm;柱温30℃;流速1.0mL/min。结果表明:在上述色谱条件下,五加酸和贝壳烯酸获得良好分离,线性范围分别为:0.1070～0.5351g/L(相关系数r=0.9999)和0.0930～0.4649g/L(r=0.9998),加样回收率分别为97.93%(标准偏差为1.33%)和98.12%(标准偏差为1.16%)。糙叶五加根、茎、叶中五加酸的平均含量(n=3)分别为:39.90、19.72、49.19μg/g;贝壳烯酸的平均含量(n=3)分别为:21.01、21.70、25.88μg/g。由此可知,该方法准确性高,重现性好,为糙叶五加的质量控制提供了可借鉴的定量分析方法。     

基于HPLC-MS/MS对枇杷叶水提组分分析及萜类物质的结构鉴定

利用高效液相色谱-质谱（HPLC-MS/MS）技术,对枇杷叶水提组分进行分析,并且对萜类物质进行解析。采用C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.8 μm）,以水+0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,使用ESI离子源,在正、负离子模式下采集质谱数据,共检测到120个化合物;包括18种萜类化合物,总相对含量1452.693 μg/mL;24种黄酮类化合物,总相对含量10378.081 μg/mL;18种酚类化合物、总相对含量36967.955 μg/mL;5种香豆素类化合物,总相对含量214.778 μg/mL;进一步鉴定出18种萜类化合物的结构,主要包括乌苏烷型6种、齐墩果烷型7种、3种倍半萜、1种二萜类物质和1种特殊的环烯醚萜苷类物质;其中栎瘿酸、银杏内酯B、Prespatane、山栀苷甲酯、Icariside B5、皂皮酸、积雪草酸、18β-甘草次酸在以往的枇杷叶活性物质中未见报道。本文为枇杷叶水提成分的研究提供参考。     

高效液相色谱法测定蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸

建立了外标法测定蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸的高效液相色谱检测方法。10-羟基-2-癸烯酸经乙醇超声提取后,以甲醇∶甲酸(0.1%)=55∶45为流动相,经C₁₈色谱柱分离,紫外检测器检测。结果显示,在50~500 μg/mL浓度范围内,线性关系良好,r=0.999 9,RSD<3%,加标回收率97%~105%。     

传统酸粥发酵过程中营养成分及风味的变化规律

该研究通过理化指标测定,电子舌和电子鼻分析对酸粥发酵过程进中的营养及风味行了考察,并对各指标和感官结果进行了相关分析。结果显示,发酵过程中pH和总糖含量随发酵的进行逐渐降低,总酸含量和蛋白质含量随发酵进行逐渐增加,脂肪含量基本保持不变,发酵过程中8种维生素含量随发酵的进行而增加,最高含量分别为烟酰胺23. 51μg/mL(24 h)、VB63.57μg/mL(24 h)、VB559.99μg/mL(18 h)、VB12190. 14μg/mL(30 h)、VC78. 15μg/mL(30 h)、叶酸546. 30μg/mL(18 h)、VB281.63μg/mL(30 h)和生物素1 132. 67μg/mL(24 h)。电子舌分析结果显示,随着发酵进行咸味(saltness)和鲜味(umami)值逐渐降低,酸味(sourness)和涩味(astringency)值逐渐加大。发酵过程中电子鼻的2号传感器W5S(氮氧化合物)值逐渐上升,6号传感器W1S(烷类)值逐渐下降。各成分间含量的相关性分析表明,发酵过程中pH、总酸与大部分营养成分及风味信号之间存在显著相关性(P<0. 05)...     

高效液相色谱法测定花生和玉米中的环匹阿尼酸

建立一种高效液相色谱法测定花生和玉米中环匹阿尼酸含量的方法。样品经液液萃取净化处理,采用反相C18色谱柱Gemini C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈:4%乙酸水溶液(三氟乙酸调pH值2.2)=55:45为流动相,流速1 mL/min,检测波长280 nm,对花生和玉米中的环匹阿尼酸进行检测。在50、100、200μg/kg添加量范围内,花生和玉米的平均回收率分别为83.9%~98.5%和86.3%~102.3%,方法的检出限为8μg/kg,线性范围为0.3~12.0μg/mL(R2=0.9998)。所建立的方法快速、简便、准确,可以作为花生和玉米中环匹阿尼酸的检测方法。     

LC-MS/MS法测定猪肉中泰妙菌素及8-α-羟基泰妙菌素

采用磷酸缓冲液-乙酸乙酯混合提取、正己烷除脂、MCX柱净化,采用液相色谱-质谱法(LC-MS/MS)建立了同时测定猪肉中泰妙菌素及8-α-羟基泰妙菌素残留量的分析方法。结果表明:在泰妙菌素和8-α-羟基泰妙菌素加标浓度5.0μg/kg~500.0μg/kg范围内,相关系数分别为0.999 8和0.999 7,线性关系良好;检测限(LOD)分别为1.5μg/kg和3.0μg/kg,定量限(LOQ)分别为5.0μg/kg和10.0μg/kg;平均回收率为83.4%~97.6%,相对标准偏差(RSD)为2.4%~5.3%。     

白皮杉醇的合成及抗氧化活性研究

研究了一种白皮杉醇的简便合成方法,以3,4-二甲氧基苄醇为原料,经溴代、Arbuzov重排、Wittig-Horn-er反应和脱甲基4步反应得到白皮杉醇,并对目标产物的结构采用IR,1H NMR及13 C NMR进行了表征。讨论了白皮杉醇的抗氧化活性,包括还原力、清除DPPH自由基和羟基自由基的能力,并与白藜芦醇、TBHQ、BHT和儿茶素作对比。结果表明:白皮杉醇具有较强的抗氧化性能,还原能力和清除羟基自由基的能力均高于白藜芦醇、TBHQ、BHT和儿茶素;其半抑制率IC50分别为DPPH自由基16.57μg/mL、羟基自由基270.00μg/mL。     

液相色谱法快速测定鸡肉中氧氟沙星手性对映体残留量

建立了鸡肉样品中氧氟沙星对映体液相色谱荧光检测(liquid chromatography fluorescence detector,LC-FLD)残留量快速分析方法。鸡肉样品经磷酸盐缓冲液提取后,用C18固相萃取小柱净化,洗脱液吹干后用流动相复溶即可进行液相色谱分析。分析时采用LeapsilTM C18色谱柱,以水相(含2 mmol/L硫酸铜和2.5 mmol/L异亮氨酸,pH3.5)和甲醇作为流动相进行梯度分析,荧光检测器检测,其中激发波长为297 nm,发射波长为487 nm,外标法定量。本方法在5.0、50、100μg/kg和150μg/kg 4个添加水平下,左氧氟沙星对映体平均添加回收率在75.5%～86.1%之间,批内变异系数在1.97%～4.42%之间,批间变异系数在3.02%～6.02%之间;右氧氟沙星对映体平均添加回收率在77.3%～84.9%之间,批内变异系数在2.15%～4.21%之间,批间变异系数在3.87%～5.84%之间。方法对两种对映体的检测限均为1.5μg/kg,定量限均为5.0μg/kg。     

HPLC法测定诺尼果汁中两种环烯醚萜类成分的含量

建立了一种高效液相色谱法同时测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量的方法。采用Shimpack VP-ODS-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-磷酸水溶液为流动相,流速为0.5 min/mL,检测波长为237 nm。在此条件下,车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸分离良好,浓度分别在5μg/mL~50μg/mL和25μg/mL~250μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.02%和102.15%,RSD值为1.58%和2.40%。西沙诺尼果汁车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸平均含量为0.204 mg/mL和1.640 mg/mL。     

玉米须提取物的分析及在卷烟中的应用

为开发新的天然烟用香料,采用同时蒸馏萃取法-GC/MS法分析了玉米须提取物的挥发性成分,并进行了卷烟加料试验.结果表明:①玉米须提取物中共鉴定出70种成分(表1).其中,除了常见的脂肪酸和脂肪醛、酮外,还有菠萝呋喃酮、愈创木酚、麦芽酚、对乙烯基愈创木酚、香兰素、Υ-壬内酯、六氢法尼酮、去氢香树烯、异贝壳杉烯等;②玉米须提取物可增加卷烟香气,掩盖枯焦杂气,提高烟气的甜润性,用量为0.04%-0.06%比较适宜.     

超高效液相色谱-串联质谱法检测小米及面粉中4种镰刀菌毒素

目的建立小米及面粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-acetyl deoxidized snow-scylienol,3-AC-DON)、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-acetyl deoxidized snow-scyloxanol,15-AC-DON)和玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)的超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱测定方法。方法经乙腈-水(84:16,V:V)提取样品,通过多功能净化柱净化,以BEH C_(18)柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm)分离,流动相为0.2%氨水:乙腈梯度洗脱,电喷雾离子(multiple reaction monitoring,MRM)模式检测。结果玉米赤霉烯酮检出限为0.1μg/kg,定量限为0.3μg/kg,线性范围为2.0～30.0μg/L;脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物的检出限为0.2μg/kg,定量限为0.6μg/kg,线性范围为10.0～150.0μg/L。加标回收率88.9%～106.0%。结论本方法快速、准确、灵敏度高,能满足4种镰刀菌毒素的同时检测。     

反相高效液相色谱法测定蜂王浆中的10-羟基-2-癸烯酸

采用反相高效液相色谱法测定蜂王浆中的10-羟基-2-癸烯酸.采用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱,以甲醇:磷酸1%溶液(50:50, v/v)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长210 nm.该法简便、快速、重现性好、回收率高.     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定酒中6种对羟基苯甲酸酯类防腐剂

建立高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)同时测定酒中6种对羟基苯甲酸酯类防腐剂的分析方法。试样用乙酸乙酯提取,经Poroshell 120 EC-C18色谱柱(2.1 mm×75 mm,2.7μm)进行分离,在电喷雾电离(electrospray ionization source,ESI)源负离子模式下,进行多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)。6种对羟基苯甲酸酯在5 ng/mL～2 000 ng/mL的浓度范围内线性关系良好,相关系数r20.999,在低、中、高3个加标浓度水平下的平均回收率为79.1%～107.5%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1.1%～9.1%(n=7)。方法检出限(limit of detection,LOD)为0.8μg/kg～1.0μg/kg,定量限(limits of quantitation,LOQ)为3.1μg/kg～3.6μg/kg。     

气相色谱-串联质谱检测新鲜烟叶中的萜类成分

为研究烟叶中的萜类成分含量(质量分数),采用选择反应监测模式,建立了同时测定新鲜烟叶中反,反-金合欢醇、α-植醇、顺冷杉醇、β-植醇、(1S,2E,4S,6R,7E,11E)-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇(α-CBD)、(1S,2E,4R,6R,7E,11E)-2,7,11-西柏烷三烯-4,6-二醇(β-CBD)、香紫苏醇、赖百当-13-烯-8,15-二醇、角鲨烯、2,3-环氧化鲨烯、双氢速甾醇、胆固醇、菜籽甾醇、麦角甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、羊毛甾醇、β-谷甾醇、β-香树脂醇、α-香树脂醇、鹅去氧胆酸等21种萜类成分的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)方法;并采用该方法对云南、河南、贵州等3个产区的成熟期新鲜烟叶样品进行了分析。结果表明:在线性范围内21种萜类成分的R2为0.999 0～0.999 8;方法检测限为12.7～308.7 ng·g~(-1),定量限为35.8～984.6 ng·g~(-1);日内、日间精密度(RSD)分别为0.19%～8.28%、1.02%～9.35%。不同产区烟叶中主要萜类成分α-CBD的含量高低顺序为云南(98.83μg·g~(-1))河南(57.04μg·g~(-1))贵州(38.61μg·g~(-1)),且3个产区之间存在显著性差异。贵州产区烟叶中萜类成分含量的分布较云南和河南产区烟叶差异更大,遵义种植的南江3号品种烟叶中萜类含量与其他3个品种差异明显。该方法前处理简单,分析的萜类物质覆盖面广,可用于批量烟叶样品的检测。     

高效液相色谱法测定啤酒中异α-酸含量

高效液相色谱法测定了7种啤酒样品中异α-酸的含量,实验研究了色谱流动相组成、比例及进样量、流速、柱温的色谱条件,得出高效液相色谱测定啤酒中异α-酸的最佳优化条件:流动相为A(1%H_3PO_4)∶B(ACN∶H_2O∶H_3PO_4=80∶19∶1)=10∶90;检测波长:249nm;流速:1.0mL/min;柱温:30℃:进样量:10μL,测定7种啤酒样品中的异α-酸含量,分别为:青岛啤酒(4.46μg/mL)、燕京啤酒(2.92μg/mL)、蓝带啤酒(1.34μg/mL)、雪花啤酒(0.8μg/mL)、哈尔滨啤酒(1.12μg/mL)、百威啤酒(1.06μg/mL)、崂山啤酒(6.39μg/mL)。本实验为啤酒行业评价不同品牌啤酒质量、人们选择喜爱的啤酒风味提供了一种简便快速的检测方法。     

单核细胞增生李斯特菌复合抑菌剂的研究

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)在0～4℃也能生长,为确保冷却肉卫生安全,必须阻止肉中污染的LM的生长繁殖。本实验通过研究不同抑菌剂对3株LM的最小抑菌浓度(MIC),选取了ε-聚赖氨酸、Nisin、曲酸三种抑菌剂,利用响应面法找出最佳组合。结果表明:ε-聚赖氨酸、Nisin、曲酸对单核细胞增生李斯特菌的最小抑菌浓度分别为50μg/mL、200μg/mL、6.4mg/mL。当ε-聚赖氨酸、Nisin、曲酸的浓度分别为20.5μg/mL、184.6μg/mL、4.37mg/mL时对单核细胞增生李斯特菌的抑制作用最佳。     

灵芝菌丝体中灵芝酸T、R和S的HPLC测定方法的建立和应用

采用YMC C18柱(250mm×4.6mm,5μm),以0.5%冰醋酸溶液(A)-甲醇(B)为流动相梯度洗脱(0~20min,85%B→100%B;20~30min,100%B),检测波长在245nm,流速1mL/min,柱温为30℃的条件下,用HPLC考察灵芝酸T、灵芝酸S、灵芝酸R在不同灵芝菌丝体中的含量差异。结果表明,不同种类的灵芝菌丝体中三种灵芝酸成分的含量存在显著的差异,p=0.0003,而且此方法操作简便,稳定性和重复性良好,适用于同时快速检测灵芝菌丝体中三种灵芝酸含量。     

山桃花挥发油的化学成分分析

采用气质联用法初步探索山桃花挥发油的化学成分和相对含量。优化条件为:气相进样口温度250℃,进样量1μL,分流比10∶1,流速1m L/min,程序升温,起始温度50℃,以10℃/min升温至150℃,以1.5℃/min升温至200℃,以3℃/min升温至280℃,辅助加热器温度280℃。首次得到15种主要成分。肉豆蔻酸(1.06%)、棕榈酸甲酯(2.29%)、棕榈酸(35.83%)、3,5,11,15-四甲基-3-羟基-1-十六烯(1.87%)、正二十四烷(20.75%)、正二十一烷(13.81%)等是山桃花挥发油的主要成分。     

超高效液相色谱—串联质谱法测定蜂蜜中10-羟基-2-癸烯酸

目的：为蜂蜜的真假鉴别提供一种内源性成分分析方法。方法：采用超高效液相色谱—串联质谱（UHPLC-MS/MS）检测方法,样品用甲醇—水溶液提取,经PLS固相萃取柱净化,用Agilent ZORBAX SB C₁₈色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.8 μm） 分离,以甲醇—5 mmol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾负离子扫描,多反应监测模式检测,外标法定量。结果：10-羟基-2-癸烯酸在质量浓度为0.05~0.80 μg/mL内呈良好的线性关系,相关系数为0.995;方法检出限为 0.03 mg/kg,定量限为 0.10 mg/kg。在0.10,0.20,1.00 mg/kg添加浓度下,10-羟基-2-癸烯酸平均回收率为96.9%~108.3%,相对标准偏差为4.5%~10.7%;日内精密度和日间精密度分别为5.9%~9.2%和3.5%~14.3%。结论：该方法适用于蜂蜜中10-羟基-2-癸烯酸的检测,实际样品测定结果表明10-羟基-2-癸烯酸作为内源性成分在蜂蜜中是普遍存在的。