丝素肽络合Ca~(2+)含量影响细胞生长的研究

研究丝素肽(SFP)络合Ca~(2+)含量对人正常肝细胞L02生长的影响。采用CaCl_2-乙醇-水三元体系制备丝素蛋白(SF),并获得不同Ca~(2+)含量的SFP后进行相对分子质量分级;采用EDTA滴定法测定SFP中Ca~(2+)含量,细胞增殖率评价其细胞毒性,圆二色谱(CD)检测二级结构。结果表明:随透析时间(12、24、36 h)增加,SFP中Ca~(2+)含量分别为16.00%、9.60%、0.40%,逐渐减小,对L02的生长作用由促进转变为抑制,其中在SFP相对分子质量大于8 kD时尤为明显,L02细胞增殖率从(118.68%±3.65%)减小到(59.78%±1.70%),对应SFP二级结构中3.43%的α螺旋和5.35%的无规则卷曲转变为β折叠。当SFP应用于组织工程支架领域时,络合较高Ca~(2+)含量的SFP更有利于细胞的增殖。     

丝素降解生成的低分子多肽对细胞生长性能的影响

分析丝素降解生成的低分子多肽(low-molecular-weight silk fibroin peptides,LMW-SF)对细胞生长的影响。LMW-SF通过中性蛋白酶酶解丝素蛋白(silk fibroin,SF)获得,分别采用过滤除菌和高压蒸汽灭菌处理后,在0.1~5.0 mg/m L体积浓度条件下,检测LMW-SF对人正常肝细胞(L02)、人肝癌细胞(HepG2)的生长影响,计算相对增殖率(relative growth rate,RGR)。结果显示:当LMW-SF体积浓度较低(0.1 mg/m L和0.5 mg/m L)时,LMW-SF对细胞生长影响较小;当其体积浓度较高(2.5 mg/m L和5.0 mg/m L)时,RGR值最低至8.3%,呈强抑制细胞生长作用;高压蒸汽灭菌处理后,RGR最高达227.4%,呈强促细胞生长作用。研究结果表明:高压蒸汽处理可以使LMW-SF变性失活,并实现强促细胞生长作用,可成为蛋白类物质应用于组织工程支架时的必需工艺环节。     

丝素蛋白水凝胶支架的制备及其性能

为探究丝素蛋白水凝胶材料的制备条件及其生物相容性,以二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)和脱胶丝素蛋白(SF)构成可控水凝胶体系,通过磷脂和SF链之间的静电和疏水作用,使SF链向β折叠结构转变获得SF水凝胶支架,分析了其细胞增殖率、细胞分化率、动物体内支架细胞肌肉生长速度和降解速度等。结果表明:DMPG浓度越高,SF水凝胶支架凝胶时间越短,添加15 mmol/L的DMPG使SF水凝胶支架的凝胶时间由原来的7 d缩短至10 min; DMPG诱导的SF水凝胶支架无细胞毒性,其中DMPG浓度为10 mmol/L时细胞增殖率最高,将该水凝胶注射入湖羊耳部皮下,其中载有湖羊肌肉卫星细胞的SF水凝胶支架在湖羊耳部生长出肌肉;SF水凝胶支架具有优异的生物相容性,随着其在动物体内时间的增加,支架逐渐降解消失,暴露出其中的肌肉组织。     

不同组分马尾藻岩藻聚糖硫酸酯对人肺癌细胞A549作用的研究

本研究采用不同组分马尾藻岩藻聚糖硫酸酯(SF)对人肺癌细胞A549细胞的抑制作用进行了研究。根据MTT比色法检测不同细胞铺板数量及不同质量浓度SF对该细胞生长曲线的影响;不同组分SF在不同时间对该细胞的增殖抑制率;倒置显微镜下观察SF对该细胞形态的影响。研究结果表明,当SF的浓度在1~25mg/mL范围、细胞铺板数量为5×103个/mL时,细胞生长曲线线性良好;各组分SF对人肺癌细胞A549均有抑制作用,其中SF2-R对细胞的抑制效果较强,抑制率为61.06%。     

有机醇处理对PLA／丝素复合纳米纤维的影响

以甲醇、乙醇分别处理静电纺PLA/丝素复合纳米纤维,采用SEM观察处理前后纤维的形貌;用IR测定其微细结构;并对其力学性能与溶解性能进行测试.在纤维膜上进行小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)培养实验.结果表明:有机醇处理后的纤维直径变粗;PLA/丝素复合纳米纤维中丝素分子构象向β折叠结构转变,结晶度提高;断裂功明显增大;在水中的溶失率显著减小;且甲醇处理优于乙醇.3T3细胞在纳米纤维膜上黏附、生长和增殖情况良好.     

钠盐与AT毒素对烟苗根生长的影响

为确定不同钠盐对烟草赤星病菌AT毒素毒性的影响,作者采用摩擦接种处理、浇根处理、种子根处理3种生物测定方法确定了以烟草种子根处理法作为烟草赤星病菌的毒性测定方法。用10种化合物分别以5种不同浓度与AT毒素混合接种烟苗,分别以单独接种毒素稀释液与无菌水作对照。根长测定数据经DPS软件统计分析,结果表明单独施用AT毒素明显抑制烟苗根的生长,差异极显著;氢氧化钠、硝酸钠、苯甲酸钠、酒石酸钠均不能改变毒素对根长的影响,碳酸钠(200mg/mL)、酒石酸钾钠(200mg/mL)、四硼酸钠(0.02~0.2mg/mL)、氟化钠(0.2~2mg/mL)、柠檬酸钠(0.2mg/mL-200mg/mL)、钼酸钠(0.02~2mg/mL)对烟草赤星病菌毒素有明显钝化作用,以钼酸钠0.02mg/mL浓度处理效果最好,其次为柠檬酸钠0.2mg/mL处理;钼酸钠20~200mg/mL处理可增加AT毒素的毒性,浓度越大效果越显著。      

低分子柑橘果胶抗前列腺癌细胞活性的评价

为研究低分子柑橘果胶的抗前列腺癌细胞活性,以商品化柑橘果胶为原料,121℃处理30min制得低分子柑橘果胶,测定了其分子质量、半乳糖醛酸含量、酯化度和体外抗人前列腺癌激素不依赖型PC3细胞活性。结果表明,制得的低分子柑橘果胶的平均分子质量为6685u、半乳糖醛酸含量为78%、酯化度为38%,柑橘果胶中对应的数值分别为55654u、64%、59%。低分子柑橘果胶对PC3细胞有很强的抑制作用,中剂量(2.5mg/mL)下抑制率可达38%,高剂量(5～10mg/mL)下抑制率达80%～90%,肿瘤细胞增殖(72h)的半数抑制浓度为(3.55±0.44)mg/mL,相对于天然的柑橘果胶,其抗前列腺癌细胞活性显著增强。     

N-月桂酰肌氨酸钠/丝素蛋白水凝胶的研究

为实现水凝胶在生物医用材料领域更高的应用价值,丝素蛋白水凝胶需要满足胶凝时间可控并且具有良好细胞相容性。文章采用N-月桂酰肌氨酸钠(SNS)与丝素蛋白(SF)水溶液共混制备水凝胶,讨论了所形成的水凝胶(SNS/SF)胶凝时间与温度、丝素浓度、SNS质量浓度之间的关系。采用傅里叶红外光谱图和X射线衍射曲线表征了其结构,采用扫描电镜观察其内部孔结构,在水凝胶表面接种L929细胞验证其细胞相容性。结果表明:SNS/SF水凝胶的胶凝时间与温度、SNS质量浓度成反比,水凝胶中的丝素蛋白分子形成β-折叠结构。L929成纤维细胞在凝胶上呈对数稳定增长,说明水凝胶具有良好的细胞相容性,具有用于组织修复的潜力。     

酪蛋白水解物分别与维生素A、维生素C和维生素E协同保护乙醇氧化损伤的肝细胞

酪蛋白水解物可以治疗和修复乙醇氧化损伤的肝细胞。本文的研究目的在于评价维生素A、维生素C和维生素E分别与酪蛋白水解物(Casein Hydrolysate,CH)协同保护乙醇氧化损伤的肝细胞。已有研究表明,酪蛋白水解物对肝细胞HHL-5没有明显的毒性,甚至有着良好的促进增殖的结果。结果表明,300 mmo L/L的乙醇对细胞有着明显的损伤作用;酪蛋白水解物显著提高了乙醇损伤肝细胞HHL-5的细胞存活率。分别在维生素A(0.0344 mg/m L)、维生素C(0.0881 mg/m L)和维生素E(0.1077 mg/m L)的浓度下与酪蛋白水解物协同作用显著提高了乙醇损伤细胞的细胞存活率。通过CCK-8法和培养基内LDH含量的测定,选取最佳CH的协同浓度。通过胞内丙二醛含量的测定和胞内ROS含量的测定进行再次验证。2 mg/m L的酪蛋白水解物单独作用乙醇氧化损伤的细胞有着一定的修复作用,且该浓度下分别与维生素A、维生素C和维生素E协同保护作用显著增强(p0.05)。     

2 类表面活性剂对细胞增殖抑制的对比研究

通过噻唑蓝(MTT)比色法检测了两种N,N-二烷基脲化合物和四种烷基酚聚氧乙烯醚系列表面活性剂对人宫颈癌细胞(HeLa) 及中华仓鼠卵巢细胞(CHO)的细胞毒性,探讨两类物质对细胞毒性的大小。结果表明： N,N-二烷基脲及烷基酚聚氧乙烯醚对细胞的增殖抑制率均随其浓度的增大而增大。 N,N-二乙基脲和N,N-二丙基脲浓度达到10mg/ml时,对两种细胞有较强的抑制增殖作用,抑制率均大于80%。烷基酚聚氧乙烯醚OP-7、OP-9、NP-10和NP-25的浓度分别达到0.1mg/ml、0.1mg/ml、0.1mg/ml和0.5mg/ml时,对细胞有较强的抑制增殖作用,抑制率均大于80%。因此可知,这六种物质达到一定浓度后,对HeLa细胞及CHO细胞的生长有明显的抑制作用,并呈现浓度依赖性。N,N-二烷基脲对两种细胞的毒性远小于烷基酚聚氧乙烯醚。     

亚硒酸钠和硒代蛋氨酸对人结肠腺癌细胞的毒性作用

探讨两种硒化物对人结肠腺癌Caco-2细胞的毒性作用。将Caco-2细胞暴露在不同浓度的亚硒酸钠(SeIV)和硒代蛋氨酸(SeMet)中培养24 h,用Annexin V-FITC/PI双染色法检测在同样浓度的SeIV和SeMet培养下细胞的凋亡率,并设置不做硒处理的空白对照。用MTT法检测细胞存活率;检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率、细胞内的超氧化物歧化酶SOD活力和谷胱甘肽GSH的含量。相同浓度时(0.8μg Se/mL),与对照相比,SeIV诱导细胞凋亡显著率上升(p0.05),SeMet变化不显著。一定浓度的SeIV(≥0.4μg Se/mL)和SeMet(≥40μg Se/mL)与对照组相比均显著降低细胞的存活率(p0.05);随着Se含量的升高细胞的存活率呈下降趋势,SeIV、SeMet的IC_(50)分别为2.56、215.55μg Se/mL。当SeIV浓度为≥0.8μg Se/mL,SeMet浓度为≥40μg Se/mL时,细胞的LDH释放率均显著高于对照组(14.80%)(p0.05)。当SeIV浓度≥4μg Se/mL,SeMet≥4μg Se/mL时,细胞的SOD活性均显著低于对照组(56.76 U/mg prot)(p0.05)。当SeIV浓度≥4μg Se/mL,SeMet浓度为160μg Se/mL时,细胞的GSH含量均显著低于对照组(61.67μg/mg prot)(p0.05)。一定浓度的SeIV和SeMet会使Caco-2细胞产生氧化应激而导致细胞毒性,诱导细胞凋亡。     

丝素蛋白/磷酸八钙复合材料生物界面的蛋白质吸附和细胞响应

为进一步了解仿生材料结构与功能的关系,为体内骨整合设计一个有利的种植微环境,通过电化学沉积技术调控电解液中丝素蛋白(SF)的质量浓度,制备了具有纳微米多级结构的丝素蛋白/磷酸八钙(SF/OCP)复合涂层.研究了丝素蛋白质量浓度对SF/OCP复合涂层的表面形貌、力学性能、蛋白质吸附以及细胞增殖行为的影响.结果表明:随电解...     

纳米氧化锌对金黄色葡萄球菌的抑制及其作用机制研究

目的 研究纳米氧化锌对金黄色葡萄球菌的抑制及其作用机制。方法 统计金黄色葡萄球菌在含有0.5、1.0、1.5、2.0和4.0 mg/mL纳米氧化锌的胰蛋白胨大豆肉汤中的活细胞数目, 不同质量浓度纳米氧化锌处理金黄色葡萄球菌后, 分别采用扫描电镜和透射电镜观察细胞形态和超微结构的变化, 并分析细胞中活性氧(O2-)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性的变化。结果 纳米氧化锌可显著抑制金黄色葡萄球菌的生长(P<0.05), 当纳米氧化锌的质量浓度为2.0 mg/mL时, 培养24 h后金黄色葡萄球菌的数目比不加纳米氧化锌的对照组低5.2 logCFU/mL (P<0.05)。经纳米材料处理后, 金黄色葡萄球菌的菌体外形虽然未发生明显改变, 但细胞内部的组织结构遭受严重损伤, 细胞膜结构模糊, 胞内的O2-含量显著升高(P<0.05), SOD酶活性在处理后期显著降低(P<0.05)。结论 纳米氧化锌的处理可使金黄色葡萄球菌菌体细胞组织结构和细胞膜发生损伤, 并导致细胞产生了氧化应激反应, 从而抑制其增殖。     

韭花精油主成分对单增李斯特氏菌的抑菌活性和抑菌机理

以韭花精油两种主成分(烯丙基甲基二硫醚和二甲基三硫醚)为研究对象,通过最小抑菌质量浓度(MIC)、最小杀菌质量浓度(MBC)、细菌细胞形态等研究其对单增李斯特氏菌的抑菌活性和抑菌机理。结果表明：两种主成分的MIC均为1.0 mg/mL,MBC均为2.0 mg/mL,且当其质量浓度为2.0 mg/mL时均会严重损坏单增李斯特氏菌的细胞形态和细胞膜结构;用质量浓度为4.0 mg/mL的烯丙基甲基二硫醚和二甲基三硫醚分别处理单增李斯特氏菌细胞,其β-半乳糖苷酶和蛋白质泄露量均显著上升,ATP酶活性(0.52 U/mg prot和0.55 U/mg prot)均明显低于对照组(3.05 U/mg prot,P<0.05);经两种主成分处理后,单增李斯特氏菌的DNA质量浓度均明显下降。由此可知,两种主成分主要通过破坏细胞膜结构、抑制ATP酶活性、降低DNA质量浓度等实现对单增李斯特氏菌活性的抑制。     

丁香醛对酿酒酵母乙醇发酵过程和理化特性的影响

为探究甘蔗糖蜜中丁香醛对酿酒酵母细胞的毒性机理,该研究以蔗糖模拟糖蜜中的可发酵性糖(250 g/L)作为发酵体系,采用摇瓶发酵法,外源添加不同质量浓度的丁香醛(0、0.5、1、1.2、1.4、1.6、1.8、2 g/L),探究其对酿酒酵母细胞生长的影响;进一步系统的研究1.4 g/L丁香醛对酵母细胞生长和产乙醇发酵能力的影响,并结合扫描电镜、傅里叶红外光谱和细胞膜通透性、细胞氧化损伤实验分析发酵过程中丁香醛对酵母细胞的毒性机理。结果表明,随着丁香醛浓度的增加,酿酒酵母细胞生长受抑制程度逐渐增加;其中1.4 g/L丁香醛会抑制酿酒酵母细胞的生长与代谢,使乙醇生成浓度与总糖发酵效率分别降低18.65%、17.64%;酵母细胞壁与细胞膜受到损伤,能明显看到细胞产生空洞、胞间粘连现象;细胞膜成分脂肪酸、多糖和蛋白质部分基团发生变化;与对照组相比,胞内核酸与蛋白质外泄量分别增加56.39%、58.29%,胞内丙二醛含量显著增加75.79%。综上,丁香醛会通过破坏细胞膜的完整性使部分酵母菌体受损伤甚至死亡,从而导致糖和乙醇的代谢缓慢,该文为揭示丁香醛对酿酒酵母细胞的毒性机理,实现甘蔗糖蜜高浓度乙醇...     

丝素蛋白负电性增强改性及其对降钙素基因相关肽的加载能力

为提高丝素蛋白(SF)材料的快速内皮化能力,解决血管组织工程面临的血栓和内膜增生难题,将具有双向调控血管细胞生长功能的降钙素基因相关肽(CGRP)通过静电相互作用引入丝素蛋白材料表面。首先选用含有2个羧基的己二酸(AA)与丝素蛋白分子进行反应,采用流延法制备AA改性SF膜,研究了改性SF膜的结构和膜表面对CGRP分子的加载能力。结果表明:随着AA质量占比的增加,SF的Zeta电位逐渐减小,当SF与AA的质量比由100:0变化为100:2.5时,SF的Zeta电位由-2.66 mV 下降至-5.4 mV;AA改性SF材料中引入了新的羧基和酰胺键,形成了以β-折叠结构为主的分子构象和Silk Ⅱ结晶结构;当SF与AA的质量比为100:2.5时,AA改性SF膜表面静电作用加载的CGRP含量比未改性SF膜提高了9倍。     

两种酶水解制备丝素肽的抗菌性及对人胚肾细胞的毒性分析

以废蚕茧为原料,通过Na2CO3脱胶、溶解、透析、冷冻干燥后得到丝素蛋白粉末。用蒸馏水溶解后,分别采用碱性蛋白酶(alcalase)、木瓜蛋白酶(papain)水解丝素蛋白,85℃将酶灭活,得到丝素肽溶液。采用反相高效液相色谱仪对10种丝素肽组分进行分析,并研究丝素肽对大肠杆菌(Escherichia coli)及金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抗菌效果,以及对人胚肾细胞(HEK293)的毒性。发现P1、A2、A4、A1丝素肽对大肠杆菌生长有抑制作用,P1、P2、P3丝素肽对金黄色葡萄球菌生长有抑制作用,具有抑菌作用的这6种丝素肽对HEK293细胞增殖没有毒性,且A1、A2、A4、P2丝素肽对HEK293细胞存活具有促进作用,为今后丝素肽的产品开发、生产及应用奠定一定的理论基础。     

Alcalase水解丝素蛋白的特性

研究了Alcalase水解丝素蛋白的特性。结果表明,Alcalase水解丝素蛋白的最佳条件是:丝素蛋白质量浓度50 mg/mL,pH值9.0,温度60℃;丝素肽中主要氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸和酪氨酸)的含量之和占其氨基酸总量的85%左右;水解度为17%的丝素蛋白水解产物中主要组分的相对分子质量分别为249 Da和762 Da,含量分别约占72.9%和15.5%,水解度为21%的丝素蛋白水解产物中主要组分的相对分子质量分别为209 Da和668 Da,含量分别约占84.4%和7.2%。     

电沉积法制备丝素蛋白基水凝胶及其释药性能研究

为开发一种无毒无污染且缓释时间长的丝素蛋白(SF)基药物缓释载体,本文采用电沉积法在低电压下制备SF基水凝胶,分析了不同制备电压、溶液中不同SF质量比下制得水凝胶的宏观形貌、微观形貌、力学性能、细胞毒性、降解性能和药物缓释性能。结果表明：制备的SF基水凝胶呈乳白色,表面光滑,具有丰富致密的网络结构,抗压缩性能可随制备参数实现可控调节,不具备细胞毒性。在模拟胃液、模拟伤口渗出液和模拟体液中,SF基水凝胶的稳定性随着制备电压的增加而增强。以盐酸小檗碱为模型药物,研究发现制备得到的SF基水凝胶的释药规律符合一级动力学方程。     

乙醇后处理对桑蚕丝素蛋白膜结构的影响

乙醇被广泛地应用于丝素蛋白材料的后处理,以诱导丝素蛋白二级结构的转变,改善丝素蛋白材料的稳定性。文章采用不同浓度的乙醇分别处理桑蚕丝素蛋白膜,利用傅里叶变换红外光谱（FTIR）、X射线衍射（XRD）以及热失重分析等手段,研究了不同浓度乙醇对桑蚕丝素蛋白膜二级结构的影响。结果表明,低浓度乙醇有利于桑蚕丝素蛋白膜向β-折叠结构转变,随着乙醇浓度的增加,桑蚕丝素蛋白膜中β-转角结构的含量逐渐提高,乙醇处理对桑蚕丝素蛋白膜的结晶结构影响并不明显。