大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

为制备免疫学特性良好的大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子(Kunitz trypsin inhibitor,KTI)单克隆抗体,以50μg/只的免疫剂量将KTI免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定多抗血清效价和敏感性,选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到稳定分泌KTI单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株,采用体内诱生腹水法制备mAb并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为157.33ng/mL,经细胞融合筛选得到4E6-E9阳性杂交瘤细胞株,所制备的抗体效价达到1:1 638 400,亚型为IgG1型,亲和常数为1.45×108 L/mol,IC50为28.39ng/mL,且特异性强。说明试验所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立灵敏、特异的KTI免疫学检测方法提供良好的抗体保障。     

大豆乳清蛋白的主要成分概述

综述了大豆乳清蛋白的组成成分及生理功能，重点论述了大豆胰蛋白酶抑制剂以及大豆血球凝集素的组成及生理活性，特别论及Bowman—Birk抑制剂的抗癌活性．     

甘薯块根中胰蛋白酶抑制剂研究进展

胰蛋白酶抑制剂(TI)是甘薯块根中一类特殊贮藏蛋白,该文从甘薯块根中TI组成分布、提取纯化、活性及影响因子、TI与蛋白含量相关性和TI功能性等方面对国内外有关TI研究进展进行综述。     

不同溶剂对香芋蛋白提取及活性的影响

对张溪香芋的水提物、盐提物、醇提物、Tris提取物、等电点沉淀物的蛋白质、氨基酸组成、总糖含量、总酚含量和包括抗氧化活性、凝血活性及胰蛋白酶抑制活性进行分析,以获得香芋蛋白活性较高的提取物。抗氧化性实验表明,各提取物具有一定的ABTS清除能力和羟基自由基清除能力,其中Tris提取物的ABTS清除能力(IC50=3.78 mg/m L)和羟基自由基清除能力均较高。香芋提取物均对羊血红细胞没有凝血活性,但均对兔血红细胞具有凝集活性,特异性凝集活力大小为盐提物(3.24×103 HU/mg)Tris提取物(2.88×103 HU/mg)等电点沉淀物(1.86×103 HU/mg)水提物(1.41×103 HU/mg)醇提物(0.98×103 HU/mg);五种提取物中,乙醇提取物没有胰蛋白酶抑制活性,盐提物、水提物、Tris提取物胰蛋白酶抑制活性较高,分别为134 TIU/mg、130.51 TIU/mg、113.30 TIU/mg。结果表明,Tris提取物含有较多具有高活性的蛋白质,且蛋白条带较最全。     

Proteins and trypsin inhibitor activity of guar (Cyamopsis tetragonoloba L. Taub) seed

Proteins soluble in tris-acetate buffer (pH9.0) were fractionated by DEAE-cellulose, DEAE-Sephadex A-50 and Sephadex G-200 column chromatography. The purified proteins which contained 5–6% carbohydrate, had molecular weights of 125 900 and 22 390 amu. The high molecular weight fraction was homogeneous by polyacrylamide gel electrophoresis. Proteins extracted in phosphate buffer (0.1M , pH7.6) when subjected to Sephadex G-200 gel chromatography were resolved into three fractions, all of which showed considerable trypsin inhibitor activity. Germination for 3 days reduced the trypsin inhibitor activity of the seed by about 30%.     

胰蛋白酶抑制剂及其抗肿瘤活性研究进展

简要综述近年来胰蛋白酶抑制剂特别是水生生物胰蛋白酶抑制剂的制备及其抗肿瘤活性方面的研究进展，并对今后的研究方向作了展望。     

商品大豆饮料胰蛋白酶抑制剂活性的研究

本研究详细测定了未经热处理的生豆奶、各种经现代技术加工的大豆饮料产品、东方传统大豆食品豆腐等样品的胰蛋白酶抑制剂活性（ＴＩＡ）。其中生豆奶的ＴＩＡ（以每克蛋白质所抑制的纯胰蛋白酶毫克数表示）是６６．４ｍｇ／ｇ蛋白质，经巴氏杀菌的商品大豆饮料ＴＩＡ是２３．７ｍｇ／ｇ蛋白质。检验了经超高温灭菌处理的７种不同商标大豆饮品，结果表明这些饮品的ＴＩＡ在１３．３～３１．６ｍｇ／ｇ蛋白质之间。另有两种已知是经灭菌的大豆饮料，其ＴＩＡ最低，分别为４．１ｍｇ／ｇ蛋白质和７．７ｍｇ／ｇ蛋白质。又分析了一种采用东方传统加工方法生产的豆腐，其ＴＩＡ仅为６．４ｍｇ／ｇ蛋白质。上述这些分析结果反映了某些经现代加工方法生产的商品大豆饮料，在消除抗营养因子的处理上是不够充分的。     

基于Exo III信号放大的荧光适配体传感器检测Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制因子

Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制因子（Kunitz Soybean Trypsin Inhibitor,KTI）是一种很关键的抗营养因子,不仅对动物消化系统和生长发育有不良影响,还制约各个行业对大豆的利用率,因此快速有效的检测方法是非常必要的。该研究建立一种基于核酸外切酶III（Exonuclease III,Exo III）和碳纳米颗粒（Carbon Nanoparticles,CNPs）的信号辅助放大荧光传感体系用于KTI的检测。具体体系包括KTI适配体（Aptamer,APT）、互补链（Complementary DNA,cDNA）、信号探针（Signal Probe,SP）、Exo III和CNPs共5个部分。通过可行性分析和CNPs浓度优化试验,测得KTI在100~600 ng/mL范围内呈线性相关,检测限为12.59 ng/mL。以豆浆作为样品,采用加标回收测得回收率为97.42%~102.85%,RSD在0.61%~2.36%之间,该方法可对实际样品中的KTI进行测定。     

Alcalase蛋白酶降解大豆胰蛋白酶抑制剂的研究

研究了不同酶解条件下 (pH值、温度、时间、加酶量和添加巯基还原剂 ) ,碱性内切蛋白酶Alcalase对大豆蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂的降解作用。研究结果表明 ,Alcalase可同时降解大豆蛋白和胰蛋白酶抑制剂。该酶解反应的最适条件为 :pH 8 0、温度 6 0℃、最适加酶量 10 μL/g蛋白 (约 0 0 2 832AU/ g蛋白 ) ,添加Na2 SO3为ω(Na2 SO3) =0 3% ,水解时间 4h。在此条件下 ,残留胰蛋白酶抑制活性为对照的 2 0 % ,可溶性蛋白含量可达 2 7mg/mL ,游离氨基酸含量为 7 1mg/mL ,大豆蛋白的水解度为 8 9%。还讨论了Alcalase蛋白酶降解大豆蛋白生成小肽的最佳反应条件     

黑豆花青素提取及抗氧化活性研究

以黑豆为原料,利用单因素试验和响应面试验优化黑豆花青素提取工艺条件并评价其体外抗氧化活性。试验结果表明,黑豆花青素的最佳提取条件为:乙醇浓度60%、温度60℃、提取3 h、料液比1∶15(g/mL),黑豆花青素得率为(1.101±0.101)mg/g,黑豆花青素对DPPH自由基、羟基自由基和铁离子螯合剂的清除率分别为61.96%、84.82%和93.09%。黑豆花青素具有较强的抗氧化活性,可以作为天然抗氧化剂进行开发。     

加热处理对大豆乳清中胰蛋白酶抑制剂活性以及大豆乳清蛋白体外消化率的影响

采用胃蛋白酶-胰蛋白酶两步体外消化法测定了加热对大豆乳清蛋白的体外消化率的影响。与没有经过加热的对照蛋白相比,适当的加热处理可以提高蛋白的体外消化率,80℃,10min处理的体外消化率达到最高。加热对抑制剂的破坏是正相关,加热处理的程度越高,胰蛋白酶抑制剂活性降低的百分比就越大。1000℃,50min处理以及120℃,8min处理可以将其活性降低到90％以下,达到充分消除豆制品中抗营养因子的目的。     

蚕蛹蛋白挥发性成分分析及体外消化特性研究

本文以碱溶酸沉提取的蚕蛹蛋白为原材料,采用GC-MS比较了烘干与冻干两种蚕蛹蛋白挥发性成分,同时研究了热处理温度及时间,不同处理方式对蚕蛹蛋白体外消化率的影响。试验结果表明:从烘干蚕蛹蛋白和冻干蚕蛹蛋白中分别鉴定出26种和35种挥发性化合物,蚕蛹蛋白中挥发性物质主要为醛类化合物,而其臭味主要来源于醇类化合物和硫化物,且含量较少,亦与部分醛类化合物有关;热处理可显著提高蚕蛹蛋白体外消化率(p0.05),不同处理方式下蚕蛹蛋白体外消化率高低依次为辐照(10 k Gy)蒸煮(100℃,1 h)微波(700 W,3 min)蒸煮(100℃,20 min)干热(130℃,1 h)未处理,热处理60 min后,蚕蛹蛋白胰蛋白酶抑制因子活性值(TIA)仅为14.52%,胰蛋白酶被抑制百分比下降到38.37%。     

Effects of Water,Steam and Shear Conditioning on the Protein Quality of Soy Grits

The effect of adding steam (at 0·6 and 1·2 bar) and water (1·9% and 64% of the flux of soy grits) in a conventional barrel type conditioner and its effects on protein dispersibility index (PDI), nitrogen solubility in 0·2% KOH and trypsin inhibitor activity (TIA) of commercial soy grits was studied. In addition, conditioned soy grits were subjected to expander treatment at two different screw speeds (2 and 3 rps) and PDI, NSI and TIA were measured. Analysis of variance was used to determine the effects of steam pressure, water addition and screw speed on the mentioned protein quality parameters. In addition, resultant temperature from steam addition was used in an analysis of covariance to determine the effects of temperature as a covariate, water addition and screw speed on protein quality parameters. A significant interaction for steam pressure and water addition was found on all parameters. The highest denaturation or inactivation of the protein was found at the combination incorporating high steam and high water addition. Screw speed during expander treatment did not significantly affect protein quality parameters. It was concluded both from this study and from literature that PDI is a better parameter to evaluate technological treatments when low amounts of motor power are dissipated (<110 kJ kg^-1) and that NSI in 0·2% KOH is a better parameter to discriminate between technological treatments when moderate to high amounts of motor power are dissipated in soy grits. TIA decreased with increasing water or steam content. The effect of trypsine inhibitor inactivation in soy grits was highest at higher temperatures and was not affected by screw speed of the expander. © 1997 SCI     

绿豆中胰蛋白酶抑制子的纯化及部分性质的研究

本文研究将绿豆经过粉碎、过筛和正己烷脱脂后,采用（NH4）2SO4分级沉淀、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换、Sephacryl S-200凝胶过滤等方法,对其中的胰蛋白酶抑制因子进行了分离纯化。然后研究了所纯化出的胰蛋白酶抑制子的pH和温度稳定性,实验结果表明：在20～100℃的范围和pH 2.2～10.2范围内,胰蛋白酶抑制因子性质较稳定。     

豆浆中胰蛋白酶抑制剂活性测定方法的研究

目的在GB/T 21498-2008《大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性的测定》方法的基础上,对影响豆浆中胰蛋白酶抑制剂活性测定的一些关键因素进行研究和改进。方法豆浆样品加水提取并稀释至一定体积后,加入L-BAPA试剂和胰蛋白酶使用液,(37±0.25)℃水浴中保温10 min±5 s后,加入乙酸溶液终止酶反应,并采用分光光度计在410 nm波长下测定其吸光度值,代入公式计算胰蛋白酶抑制剂的活性。结果改进后的方法添加高、中、低3个浓度水平胰蛋白酶抑制剂的回收率分别为113.1%、114.6%、134.9%,平行测定的RSD分别为1.4%、3.6%、7.2%,方法的准确性和重复性能满足实验的需求。结论改进后的方法快速简便,节约了时间和实验成本,方法的准确性和重复性能满足实验的需求。