一株耐热脂肪酶产生菌的筛选、产酶及催化条件研究

通过平板划线分离法,从15份土样中筛选到18株产耐热脂肪酶菌株。经复筛选取K2菌进行产酶条件研究,并通过盐析沉淀法分离脂肪酶,研究该酶最佳催化条件。实验结果表明,该菌株产脂肪酶的适宜发酵条件为培养温度55℃,初始pH5,摇床转速200 r/min,发酵时间48 h。采用硫酸铵分30%与75%两步盐析分离脂肪酶,经真空低温冷冻干燥浓缩酶液,用pH 6.0磷酸缓冲液溶解后,在50℃,pH=7条件下,对乳化橄榄油具有最高催化活性。     

扩展青霉脂肪酶的生产及其在外消旋烯丙醇酮拆分上的应用

试图应用脂肪酶催化拆分法代替化学法拆分外消旋烯丙醇酮(4-羟基-3-甲基-2-(2-烯丙基)-2-环戊烯-1-酮,allethrolone).以Rodamine B平板筛选法获得了一株脂肪酶高产菌Penicillium expansum PED-03,并对该菌液态发酵产脂肪酶的主要工艺参数进行了优化.确立了0.5%的淀粉和4% 的豆饼粉为该菌种的适宜碳源和氮源,最适C/N为0.5.Tween-80对产酶有明显的促进作用,添加0.05% Tween-80后所产酶活力可提高55%.发酵罐产酶试验结果表明,搅拌速度对脂肪酶的产生有明显影响,适宜的搅拌速度为500 r·min-1. 利用P. expansum PED-03脂肪酶在非水相中对外消旋烯丙醇酮进行手性拆分,反应36 h时转化率(C)可达理论值的96%,产物的对映体过量值(eeP)可达99%,显示了该酶在烯丙醇酮的酶法拆分方面具有良好的应用潜力.的淀粉和4% 的豆饼粉为该菌种的适宜碳源和氮源,最适C/N为0.5.Tween-80对产酶有明显的促进作用,添加0.05% Tween-80后所产酶活力可提高55%.发酵罐产酶试验结果表明,搅拌速度对脂肪酶的产生有明显影响,适宜的搅拌速度为500 r·min-1. 利用P. expansum PED-03脂肪酶在非水相中对外消旋烯丙醇酮进行手性拆分,反应36 h时转化率(C)可达理论值的96%,产物的对映体过量值(eeP)可达99%,显示了该酶在烯丙醇酮的酶法拆分方面具有良好的应用潜力.     

康宁木霉固态发酵秸秆生产纤维素酶的研究

采用康宁木霉(Trichodermakoningii)固体发酵生产纤维素酶,研究了秸杆粉和麦麸用量、料水比、起始pH值、温度和时间对该菌株产纤维素酶活力的影响。结果表明,康宁木霉的适宜发酵条件为:秸秆∶麦麸=3∶2,料水比1∶2,培养温度28～30℃,起始pH5.5～6.0时产酶活力最高。在适宜培养条件下,发酵周期为72h,发酵液中FPA酶活为172.3μmol/h.mL。     

凹凸棒土固定脂肪酶及其在催化菜籽油转酯反应中的应用

采用吸附法对来源于,Staphylococcus aureus JH的脂肪酶进行了固定化.以凹凸棒土作为载体系统研究了固定化条件对固定化效率及固定化酶转酯活力的影响.结果表明最适加酶量、缓冲液pH和吸附时间分别为0.35 g/g、8.0和3 h,在上述优化条件下固定化酶的转酯活力为465.5 U/g,而所用的游离酶只有较低转酯活性.利用该固定化酶催化菜籽油转酯反应生产生物柴油时,叔丁醇为适宜的反应介质,其最适添加昔为0.8 mL/g;适宜的酶鼍、加水晕和反应温度分别为40.0 U/g、油质量的的1.2%和40℃.按甲醇/油摩尔为3.5的比例在优化反应条件下,反应12 h后甲酯产率达96.0%;固定化脂肪酶具有较好的操作稳定性,反应160批次时,相对酶活力为78.4%.     

脂肪酶产生菌的筛选及其酶性质

从５６个土样中分离获得２５３株脂肪酶产生菌,其中ＮＱ２３菌株产酶活性最高,从其形态特征确定为根霉属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）。对该菌株进行紫外线和硫酸二乙酯诱变,酶活力提高５２％。对该菌株的产酶条件及部分酶性质进行了研究后发现该菌株所产脂肪酶具有良好的热稳定性,最适作用温度较高,为５０℃左右。     

培养条件对白腐菌合成脂肪酶的影响

以橄榄油为碳源用白腐菌QB1(Sarcodon asparatus QB1)合成脂肪酶，当碳源浓度为5mg／mL时，在培养基初始pH值为5．5，28℃条件下培养10d，脂肪酶活力为0．65U／mL，菌体干密度为3．05mg／mL，脂肪酶活力在培养基初始pH值为5．0～5．5时最高。当酶反应环境pH值分别为4．0～4．5和6．0～6．5时，脂肪酶相对酶活力分别下降为38％～60％和57％～63％。     

用于环保的耐热脂肪酶产生菌Wi-3的诱变及其酶学特性研究

从福州温泉澡堂排水道中分离筛选到一株可用于环保的耐热脂肪酶产生菌株Wi-3,经UV NTG复合诱变,选育出突变株Wi-3-3和Wi-3-5,其酶活比出发菌株分别提高了32.3%和11.8%.对Wi-3-3的产酶条件进行研究,结果表明在35℃、起始pH值7.0、250 mL摇瓶装量为35 mL、接种量为4 mL(菌浓1.5×108个·mL-1)、发酵周期为35 h的培养条件下产酶最高.用硫酸铵提取Wi-3-3发酵液中脂肪酶进行酶学特性的初步研究,结果表明其最适反应pH值为8.6、最适反应温度为55℃.     

一株产酯酶菌的分离鉴定及其酶学性质研究

从土壤中分离得到一株产酯酶菌,经16S rDNA序列测定,属于嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),命名为S.mal SF-H。对该菌株产酶的诱导效应及其酶学性质进行了研究。结果表明,培养基中加入5g·L~(-1)柠檬酸三正丁酯塑化剂,可以有效诱导该菌株产生酯酶,所产酯酶对短链脂肪酸酯的水解活性有明显底物特异性和差异性。以对硝基苯乙酸酯为底物时,酶液表现出良好的耐温性,最适温度为80℃,且70℃保温2h的相对酶活力为95%,最适pH值为9.0,在pH值为8.0时稳定性最好;以对硝基苯丁酸酯为底物时,酶的最适温度为70℃,70℃保温2h的相对酶活力为51%,最适pH值为8.0,在pH值为8.0~10.0时稳定性最好。所产酯酶的耐溶剂性表现基本一致,在66%丁醇和66%乙醇中相对酶活力均约为60%。     

高大毛霉制取果胶酶发酵条件实验

对高大毛霉(Mucor mucedo)制取果胶酶的发酵条件和酶的基本性质进行了研究. 发酵培养基组成为(g/L)：小麦麸皮50，葵盘粉30，(NH4)2SO4 30，KH2PO4 2.5，MgSO4×7H2O 0.5，NaNO3 0.2，FeSO4×7H2O 0.01. 在培养温度30℃、初始pH 5.7、转速240 r/min条件下摇瓶培养3 d，酶活力达到275 U/ml. 该酶最适pH为5.0，最适作用温度为40℃，在pH为3.0~7.0范围内稳定.     

产壳聚糖酶菌株的筛选及其发酵产酶条件的研究

从采集的土样中分离得到一株产壳聚糖酶的菌株,对该菌株发酵产酶条件进行了初步研究.确定其最适的产酶培养基为(%):壳聚糖1.0,葡萄糖0.1,酵母提取物0.5,(NH4)2SO4 1.0,K2HPO4 0.07,KH2PO4 0.03,NaCl 0.5,MgSO4·7H2O 0.05,起始pH值6.0;最适产酶培养条件为:装液量为70 mL/250 mL,接种量3%,30℃、150 r·min-1培养72 h.在最适产酶条件下,该菌株发酵液中壳聚糖酶活力最高达到1.96 U·mL-1.     

响应面法优化产低温脂肪酶工程菌Cl02的发酵条件

目的采用响应面法优化产低温脂肪酶工程菌Cl02的发酵条件。方法通过单因素试验考察培养基中酵母氮源含量、pH值、甘油含量和甲醇含量对酶活的影响,确定产酶的主要影响条件,在此基础上,根据Box-Benheken中心组合试验设计原理,采用三因素三水平的响应面分析法,综合考察各因子对低温脂肪酶酶活的影响,建立低温脂肪酶酶活的二次回归模型。结果培养基中酵母氮源含量、pH值和甲醇含量对酶活的影响显著。最适产低温脂肪酶条件为:酵母氮源含量7.3 g/L、pH 6.0、甲醇含量9.1 g/L,在此条件下,低温脂肪酶酶活可达42.25 IU/ml,比优化前(28.0 IU/ml)提高了50.9%。结论利用响应面法优化的发酵条件可显著提高工程菌的产酶能力,为规模化生产低温脂肪酶奠定了基础。     

南极假丝酵母脂肪酶发酵条件优化及酶学性质

分别用摇瓶和15L发酵罐,对南极假丝酵母产胞外脂肪酶的培养基成分和操作条件进行了实验研究。得到最优的培养基组成为:豆粉40g／L,淀粉15g／L,豆油5mL／L,K2HPO4g／L,MgsO4·7H2O1g／L,Tween-800.1％,酵母膏5g／L;操作条件为:温度24℃,初始pH值为6.0,通气量为10.0L／min。在此培养条件下,发酵周期缩短至54h。由15L发酵罐生产的酶液酶活达到19.2U／mL。酶液在pH值为4.0～6.0和7.5～9.0范围内较稳定,其最适宜pH值范围为6～8.5;70℃时酶的催化活性最大.在40～70℃的温度范围内保持1h后残留酶活为60％。     

一株产低温脂肪酶酵母菌的鉴定及酶学性质

低温脂肪酶已成为工业低温工艺良好候选物,在生物质能源、食品、皮制品、废水处理等领域发挥重要作用。本文从实验室保藏的55株产低温脂肪酶酵母菌株中筛选出一株高产菌株NYNU 19160,通过形态学、生理生化以及ITS和26S rDNA序列分析,将该菌株鉴定为Papiliotrema fonsecae。经过硫酸铵分级沉淀、透析、浓缩将该脂肪酶纯化后,对酶学性质进行了研究。结果表明,该脂肪酶最适反应温度为20℃,最适作用pH为7.5,属于低温碱性脂肪酶;Cu²⁺显著促进该酶的水解活性,而Li⁺表现为显著抑制作用;有机溶剂乙腈、甲醇、乙酸对酶活性有较强的促进作用,而苯和正己烷则抑制了该酶的活性;该酶对对硝基苯酚丁酸脂(pNPC₄)底物表现出较强特异性。     

Immobilization and stabilization of <Emphasis Type="Italic">Pseudomonas aeruginosa</Emphasis> SRT9 lipase on tri(4-formyl phenoxy) cyanurate

Lipase was extracted and purified from Pseudomonas aeruginosa SRT9. Culture conditions were optimized and highest lipase production amounting to 147.36 U/ml was obtained after 20 h incubation. The extracellular lipase was purified on Mono QHR5/5 column, resulting in a purification factor of 98-fold with specific activity of 12307.81 U/mg. Lipase was immobilized on tri (4-formyl phenoxy) cyanurate to form Schiff’s base. An immobilization yield of 85% was obtained. The native and immobilized lipases were used for catalyzing the hydrolysis of olive oil in aqueous medium. Comparative study revealed that immobilized lipase exhibited a shift in optimal pH from 6.9 (free lipase) to 7.5 and shift in optimal temperature from 55 °C to 70 °C. The immobilized lipase showed 20–25% increase in thermal stability and retained 75% of its initial activity after 7 cycles. It showed good stability in organic solvents especially in 30% acetone and methanol. Enzyme activity was decreased by ∼60% when incubated with 30% butanol. The kinetic studies revealed increase in K _M value from 0.043 mM (native) to 0.10 mM for immobilized lipase. It showed decrease in the V _max of immobilized enzyme (142.8 μmol min⁻¹ mg⁻¹), suggesting enzyme activity decrease in the course of covalent binding. The immobilized lipase retained its initial activity for more than 30 days when stored at 4 °C in Tris-HCl buffer pH 7.0 without any significant loss in enzyme activity.     

普鲁兰酶产生菌的筛选鉴定及其发酵条件优化与酶学性质研究

从淀粉厂附近土壤中筛选得到5株产普鲁兰酶的菌株,与实验室已有保藏菌株做活性对比,结果筛选得到的S1117产酶活性较高,根据其形态特征及16S rRNA序列分析,初步鉴定为芽孢杆菌。对其产酶条件进行了优化,确定了该菌株的最适发酵培养条件,其发酵54 h时酶活达到最大2.5 U/mL。初步研究了其酶学性质,其所产普鲁兰酶反应最适温度与pH分别为40℃,5.2;在60℃仍保持有80%以上酶活。     

The Use of Boron Compounds for Stabilization of Lipase from Pseudomonas aeruginosa ES3 for the Detergent Industry

This study aimed to characterize a lipase that is highly active and stable under typical washing conditions for use as a detergent ingredient by investigating the effects of various boron compounds on lipase stabilization under different conditions. In addition, the antimicrobial activity of the boron compounds used in enzyme stabilization was examined in order to obtain an effective antimicrobial detergent. A lipase‐producing bacterium was isolated from kitchen wastewater samples using Rhodamine‐B Agar medium and identified as Pseudomonas aeruginosa based on 16S rDNA sequence analysis. The ES3 lipase obtained from P. aeruginosa was purified, and the purified enzyme was found to have a molecular mass of 40 kDa. The enzyme showed optimal activity at pH 9.0–10.0 and 40 °C and remained stable in the presence of various metal ions, surfactants and oxidizing agents. Moreover, the pH stability and thermostability of the enzyme was improved by the addition of boron compounds, which, when used as stabilizers in the incubation media, also increased the stability of the enzyme towards commercial detergents. Furthermore, the enzyme displayed properties comparable with the commercial product Lipolase^®, which has shown excellent stability towards various commercial detergents. Finally, boron compounds used to stabilize the lipase were found to possess antimicrobial properties, suggesting that detergents incorporating these compounds will also exhibit antimicrobial activity when washing clothes and dishes.     

黑曲霉（Aspergillus niger）ZJB-09101菌株手性拆分环氧氯丙烷的培养条件优化

将筛选得到的黑曲霉（Aspergillus niger）ZJB-09101菌株应用于外消旋环氧氯丙烷的手性拆分,对菌种产环氧化物水解酶的发酵条件和外消旋环氧氯丙烷的手性催化过程进行了研究。结果表明,黑曲霉ZJB-09101产环氧化物水解酶的最佳培养基成分是：淀粉14．63g／L,豆饼粉6．45g／L,K2HPO4·3H2O0．8g／L,KH2PO4·3H2O0．4g／L,MaSO4·7H2O0．05g／L,pH7．0。ZJB-09101菌株在150r／min、30℃条件下,经过4d的培养,环氧化物水解酶的酶活达90．36U／1,,比优化前的39．27U／L提高了130％。在环己烷的反应体系中,底物外消旋环氧氯丙烷浓度为0．6%,在30℃下生物催化反应7h,（S）-环氧氯丙烷的e．e．值和产率分别为99．060／6：和17．14％。     

Study of a Lipase from Candida rugosa Diddens and Lodder

Lipasic system of Candida rugosa (CBS 613) strain was studied. The enzyme was purified in one step by hydrophobic chromatography. The properties of this lipase were determined. It is an oligomeric enzyme composed of five identical monomers of 46 kg · mol^?1. Its optimum reaction conditions are pH = 7 and temperature = 40°C. This enzyme presents a rapid thermal denaturation and then a more stable form. It is a cell-bound lipase which is induced by triacyl glycerols. This enzyme presents a high specificity for external positions on glycerol.     

Immobilization of lipase on magnetic porous microspheres

开发了以磁性多孔微粒作为载体固定化脂肪酶的方法,进行了载体的FTIR、XRD、SEM、TEM、BET、TGA和VSM等测定与分析,考察了固定化时间、酶载量和缓冲液pH值等因素对固定化酶在有机相中催化烯丙醇酮转酯化反应性能的影响。结果表明,制备的磁性微粒是以Fe₃O₄为磁核,呈现多孔,比表面积12.16 m²/g,平均孔径为171.7 nm,磁铁含量38%并为超顺磁性;在酶与载体质量比为1∶1、pH值8.0及固定化时间6 h制得固定化酶的效果最佳,固定化酶的活力回收率可达240%。以其作为载体制备获得固定化酶操作稳定性得到显著提高,重复利用30批次后残余活力为74.5%,而游离酶7批次后仅为37.1%。     

黏土吸附法固定化脂肪酶的初步研究

为研究天然黏土为载体固定化脂肪酶的可行性,采用羟基化、硅烷化处理,对黏土进行改性,并以此为载体吸附固定化脂肪酶,探讨黏土固定化脂肪酶的条件对酶活及蛋白吸附量的影响,优化固定化脂肪酶条件。研究结果表明:黏土经羟基化、硅烷化改性处理后能显著提高固定化酶活和蛋白固定量,其中硅烷化改性最优;载体固定脂肪酶最优条件为:加酶量50 mg/g,载体粒径180—250μm,pH值为4.0,固定化温度25℃,固定化时间2.0 h;与游离酶相比,固定化酶显示出更广的pH值适应性。黏土固定化脂肪酶重复使用10批次后,仍能保留76.85%的初始活力。以天然黏土为载体固定化脂肪酶,具有较好的实际可应用性及操作稳定性,在较低pH值条件下应用具有一定优势。