金黄色葡萄球菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

为建立检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的快速检测方法,以SA Sa442基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针,建立了实时荧光PCR快速检测SA的方法。结果显示,对16株试验菌株进行荧光PCR检测,只有SA检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为7.5 CFU/m L,利用该检测方法对采集的175份样品进行检测,共计检出5份SA阳性样品,与国标法(GB 4789.10—2010)检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。     

TaqMan探针荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素D

建立了检测乳中产肠毒素D的金黄色葡萄球菌的荧光定量PCR方法,以SED基因为肠毒素D的检测靶序列,设计荧光定量PCR引物和Taq Man探针,将构建的重组质粒作为阳性对照,建立了对产肠毒素D金黄色葡萄球菌快速检测的Taq Man探针荧光定量PCR方法,并评价该方法的特异性、灵敏性和重复性。结果显示,Taq Man探针实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素D的方法具有极强的特异性,标准曲线的相关系数为0.999,最低可检测到40copies/m L的阳性质粒,检测乳中产肠毒素D金黄色葡萄球菌的灵敏度为1.0×102CFU/m L。该检测方法具有较好的特异性和灵敏性,在产肠毒素D金黄色葡萄球菌快速筛查方面具有良好的应用前景。     

实时荧光定量PCR技术在金黄色葡萄球菌检测中的应用

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是主要的食源性致病菌之一.实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术是近年来广泛应用于食源性致病菌的快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高等特点.本文综述了Real-time PCR 技术原理、分类及其在检测食品中金黄色葡萄球菌的应用,并对其应用前景进行了展望.     

实时荧光定量PCR技术在金黄色葡萄球菌检测中的应用

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是主要的食源性致病菌之一。实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术是近年来广泛应用于食源性致病菌的快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高等特点。本文综述了Real-time PCR技术原理、分类及其在检测食品中金黄色葡萄球菌的应用,并对其应用前景进行了展望。      

PCR技术检测金黄色葡萄球菌进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,S.aureus)是引起食物中毒的主要致病菌之一,其传统方法包括选择性培养、生化鉴定等步骤,耗时长、灵敏性差,很难满足食品安全快速检测要求。PCR技术是近年来广泛应用于食品中致病微生物快速检测的现代方法之一,其目的基因多种多样,主要包括耐药性相关基因、毒素基因、酶基因及多种特异性鉴别基因。本文综述了PCR技术应用于金黄色葡萄球菌检测的各种目的基因,并简要介绍了多重PCR及实时定量PCR等新技术的应用。     

食品中金黄色葡萄球菌多重PCR检测方法的研究

以耐热核酸酶基因nuc、纤维蛋白原结合蛋白基因clfA和SmaI限制性酶切片段特异序列为靶基因,设计筛选引物,建立并优化了检测金黄色葡萄球菌(Staphylococus aureus,SA)的多重PCR体系。采用10株SA和46株非SA验证了该多重PCR具有很好的特异性。PCR检测的灵敏度在DNA水平上达到1.197 3 ng。人工污染样品,当起始污染量为1.2个/g时,37℃增菌培养6 h即可检出。一共检测了43份样品,检出3份阳性样品,其中有2份阳性样品与传统方法一致,另外一份阳性样品用测序验证。作者建立的多重PCR方法可特异、快速地实现对SA的检测。     

PCR技术在金黄色葡萄球菌中的研究进展

金黄色葡萄球菌是造成人类食物中毒的常见致病茵之一,对其进行检测与鉴定显得尤为重要.随着PCR技术的发展,金葡菌也得以深入研究.本文主要就应用于金黄色葡萄球菌的PCR技术进行简要综述.     

食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测思路构建

本文对金黄色葡萄球菌的相关内容展开论述,并阐释了PCR技术检测原理与应用特点,通过研究细菌培养与DNA提取、合理设计引物、多重PCR反应条件优化、PCR反应检测等内容,以期提高食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测结果的准确性,确保市场中流通食品的安全性。     

多重PCR检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的研究

目的:为了建立一种简单、快速检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法。方法:根据相关文献和Genebank报道的编码金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E、H的基因序列,选择合成了6对特异性引物,建立多重PCR体系,并对反应条件进行了优化。结果:6对引物能同时特异地扩增出120、478、257、319、170、375bp的目的片段,表明6对引物具有良好的特异性。结论:成功地建立了一种同时检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法,在金黄色葡萄球菌肠毒素快速筛查方面具有良好的应用前景。     

金黄色葡萄球菌致病因子检测的PCR方法

介绍了金黄色葡萄球菌致病因子检测的聚合酶链式反应(PCR）方法，已取得的成果和存在的问题，这些方法也同样适用于其它致病菌的检测。     

SYBR Green I荧光定量PCR检测乳中携带sea基因金黄色葡萄球菌的研究

金黄色葡萄球菌是引起食物中毒的一种常见的致病菌,而其产生的肠毒素A是乳及乳制品食物中毒事件的主要原因.本研究建立了SYBR Green I荧光定量PCR方法对乳中携带sea基因的金黄色葡萄球菌进行检测.该方法能快速、稳定地在8h内完成对乳中金黄色葡萄球菌的检测,对人工污染乳中金黄色葡萄球菌检测的最低检出限为83CFU/ml.     

三重荧光PCR检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157:H7

目的 建立一种检验沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157:H7的TaqMan探针三重荧光PCR方法.方法 针对沙门氏菌属特异性invA基因、金黄色葡萄球菌rpoB基因、大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因设计引物与探针,建立三重荧光PCR体系,对引物与探针浓度及退火温度优化,并进行特异性和敏感性研究.结果 ...     

多重实时荧光定量PCR快速检测婴幼儿奶粉中沙门氏菌、克罗诺杆菌和金黄色葡萄球菌

目的建立多重实时荧光定量PCR(multiplex quantitative real-time PCR,multiplex qPCR)快速检测奶粉中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和克罗诺杆菌3种常见致病菌的方法。方法筛选目标菌株的特异性引物与探针,优化反应体系,建立稳定的多重q PCR反应体系。通过阳性菌株加标的方式验证体系的特异性,并确定人工污染奶粉的检出限。结果各对引物探针对目标菌株均能扩增,多重实时荧光PCR未发现交叉反应,对17株非目标菌进行检测均未检出,人工污染奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌的检出限均为10~3 CFU/mL,金黄色葡萄球菌的检出限为10~4 CFU/mL。结论本研究方法可实现婴幼儿奶粉样品中3种致病菌qPCR高效率检测。     

原料乳中金黄色葡萄球菌生长预测模型的建立

研究冬季、春季和夏季原料乳中金黄色葡萄球菌在15、25、37℃条件下的生长情况,并利用Logistic模型和Gompertz模型对生长数据进行建模。3个季节的原料乳中,金黄色葡萄球菌的Gompertz模型方根误差(RMSE)分别为0.0936(冬)、0.1057(春)和0.1032(夏),而Logistic模型相应的参数值为0.1498(冬)、0.1926(春)和0.1857(夏)。通过模型参数比较表明,Gompertz模型比Logistic模型更能准确的描述原料乳中金黄色葡萄球菌的生长情况;同时,建立以温度为自变量的平方根模型,以此来预测原料乳中金黄色葡萄球菌的生长速率。     

鉴定金黄色葡萄球菌的多重PCR方法

建立了一种快速鉴定和鉴别金黄色葡萄球菌的多重PCR方法。利用金黄色葡萄球菌的特异基因、耐甲氧西林基因和4种肠毒素基因nuc、mecA和sea、sec、sed、see建立6重PCR反应体系,并对PCR体系,引物浓度进行优化。6对PCR引物均能特异地扩出相应的目的基因。对47株金黄色葡萄球菌的检测结果与应用单重PCR鉴定结果完全一致。实验所建立的多重PCR方法能在一个反应体系中鉴定和鉴别金黄色葡萄球菌,为食品中金黄色葡萄球菌的快速检测提供了一种有效的检测手段。     

食源性MRSA双色荧光PCR检测方法建立

目的建立快速检测食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)Taqman探针双色荧光PCR方法。方法根据金黄色葡萄球菌种属鉴定nuc基因和MRSA决定因子mec A基因,设计合成引物探针,建立双色荧光PCR扩增体系。利用所建立的方法检测特异性及灵敏度。将金黄色葡萄球菌依次传代培养,检测不同代次的菌株验证方法的稳定性,并对实际样品分离株进行检测验证方法的可行性与实用性。结果该方法可准确并特异性检测出MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus,MSSA),检测MRSA的nuc基因和mec A基因的灵敏度可达2.7×103 CFU/m L,不同代次的菌株的检测结果一致。结论本实验所建立的双色荧光PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度及稳定性,可用于快速检测食源性MRSA。     

津沪地区原料奶中金黄色葡萄球菌的污染情况研究

金黄色葡萄球菌是影响原料奶质量的微生物之一,它能产生高温灭菌被破坏的肠毒素。近年来,由金黄色葡萄球菌肠毒素引发的食物中毒事件屡见不鲜,严重影响到消费者的身体健康。本研究是利用黄色葡萄球菌金标特异性单克隆检测试板和金黄色葡萄球菌快速检验测试片对天津周边地区及上海共84个原料奶样品进行检测和调查。结果表明,原料奶市场的微生物污染状况不容乐观。通过本研究确定金黄色葡萄球菌金标特异性单克隆抗体快速检测试板是一种快速、简便、准确的检测产品,值得在原料奶市场大力推广。     

Taqman MGB PCR定量检测水产品中沙门氏菌的方法建立

建立采用Taqman MGB实时荧光PCR法快速定量检测水产品中沙门氏菌。根据沙门氏菌fimY基因保守序列,设计引物和Taqman MGB探针,建立Taqman MGB实时PCR定量检测体系。采用本方法对24株共14种血清型沙门氏菌和17株与沙门氏菌亲缘关系比较近,以及在样品中能同时存在的常见食源性致病菌菌株进行PCR扩增。结果显示：所有的沙门氏菌菌株结果均为阳性,而非沙门氏菌菌株检测结果均为阴性,反应特异性为100%。本方法的纯菌最低检测低限为13CFU/ml,样品江瑶贝和蚬子肉中添加肠炎沙门氏菌的最低检测低限为130CFU/ml;香螺肉中添加肠炎沙门氏菌的最低检测低限为1300CFU/ml。定量关系式为y=－3.381418lnx+45.115715,R2= 0.964878。整个实验2h即可完成,可应用于水产品中沙门氏菌污染状况调查及快速检测。     

Detection of Enterotoxigenic Staphylococcus aureus in Raw Milk and Dairy Products by Multiplex PCR

Abstract: The aim of this study was to investigate the prevalence of enterotoxigenic Staphylococcus aureus in 122 samples, including 60 raw milk, 32 white cheese, 10 kashar cheese, 10 butter, and 10 ice cream samples obtained from Samsun province, Turkey. In this study, S. aureus was detected in 64 samples, including raw milk (45/60; 75%), white cheese (12/32; 37.5%), kashar cheese (3/10; 30%), butter (3/10; 30%), and ice cream (1/10; 10%) samples. A total of 81 isolates were identified as S. aureus by PCR with the presence of 16S rRNA and nuc genes. The presence of genes encoding the staphylococcal enterotoxins (SEs) SEA, SEB, SEC, and SED was detected by multiplex PCR. According to the analysis, seven isolates from the raw milk samples (7/51; 13.7%) were enterotoxigenic; five of them produced SEA (5/7; 71.4%), one produced SEB (1/7; 14.2%), and one produced SEA+SEB (1/7; 14.2%). Four isolates from the white cheese samples (4/21; 19%) produced the SEA (1/4; 25%), SEC (1/4; 25%), SED (1/4; 25%), and SEA+SED (1/4; 25%) toxins. Two isolates from the kashar cheese samples (2/4; 50%) were found to be enterotoxigenic; one produced SEA (1/2; 50%) and the other produced SED (1/2; 50%). One isolate from the butter samples (1/4; 25%) showed enterotoxigenic character (SEB, 1/1; 100%). The products were found to be potentially hazardous to public health because of the fact that levels of contamination were higher than 105–106 cfu/g ml in 39% (25/64, 17 raw milk, 7 white cheese, and 1 butter) of the analyzed samples.