莪术油对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响

研究莪术油影响人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的机制。采用台盼蓝拒染法检测不同剂量莪术油对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制率;光学显微镜观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA片段化情况;流式细胞术检测细胞线粒体膜电位的改变、细胞凋亡率以及细胞周期分布。实验结果表明：作用48h时,最佳浓度为110μg／mL,IC50值为104．958μg／mL。DNA电泳可见有梯状条带出现,流式细胞术法显示有凋亡峰出现。莪术油可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导KG-1细胞凋亡的机制研究

研究蛋白酶体抑制剂MG132对人急性髓性白血病细胞株KG-1的致凋亡作用及其对细胞内信号传导因子NF-kB与凋亡蛋白PARP表达的影响.采用（CK-8法检测MG132对KG-1细胞增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色法,从形态学上观察凋亡的KG-1细胞;Western blot检测NF-kB活性及与凋亡相关的蛋白变化情况.CCK-8法检测结果表明,MG132能明显抑制KG-1细胞生长,并呈现时间依赖性和浓度依赖性;Hoechst染色和Western blot检测实验证明,MG132诱导KG-1细胞发生凋亡的同时,NF-kB活性明显降低,细胞凋亡蛋白PARP降解为P89蛋白.以上结果显示,MG132能诱导KG-1细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制NF-kB信号转导通路,下调NF-kB表达继而增加凋亡蛋白PARP剪切有关.     

胡桃醌通过线粒体途径抑制宫颈癌Hela细胞生长的研究

胡桃醌的化学成分为5-羟基-1,4-萘二酮,是从核桃楸中分离出的重要化合物,对多种恶性肿瘤的生长具有抑制活性。研究中,子宫颈癌Hela细胞接受不同剂量的胡桃醌处理,利用MTT实验检测胡桃醌对Hela细胞的增殖抑制作用、流式细胞术检测胡桃醌对Hela细胞周期和凋亡的影响以及Western blot检测CytC、Bcl-2、Bax和caspases蛋白水平的表达。结果表明,胡桃醌可以呈剂量依赖性的方式显著抑制Hela细胞的活性。此外,膜联蛋白Annexin V-FITC在50μM和100μM浓度的早期凋亡率分别为16. 79%和30. 03%,而对照组为10. 73%。不同剂量胡桃醌处理Hela细胞后,Cytc水平和Bax/Bcl-2比值较对照组明显增高,同时caspase-3、-9的活性也明显变化。结果表明,胡桃醌可能通过线粒体途径诱导细胞凋亡有效抑制Hela细胞的生长。     

氯化钴诱导hiPSC-CMs体外缺氧模型的建立

为进一步了解缺氧性心血管疾病的发病机制,通过使用CHIR99021和IWP2抑制剂的组合诱导和单层诱导分化方法获得人诱导性多能干细胞来源心肌细胞(Human induced pluripotent stem cells-derived cardiomyocytes,hiPSC-CMs),并在hiPSC-CMs的培养系统中加入氯化钴进行处理,通过CCK-8检测、Hoechst荧光染色分析、台盼蓝染色分析、qRT-PCR检测和Western blot检测确定最佳处理浓度和时间。CCK-8检测结果显示,低浓度CoCl_2(100、300μmol/L)处理显著提高hiPSC-CMs细胞活力(p0.01),高浓度CoCl_2(900、1200μmol/L)处理显著抑制hiPSC-CMs细胞活力(p0.001),并且作用趋势呈剂量和时间依赖性,600μmol/L CoCl_2处理对于hiPSC-CMs的细胞活力影响不明显(p0.05);Hoechst荧光染色结果显示,CoCl_2处理24 h和48 h后,低浓度CoCl_2处理对细胞无影响,Hoechst染色阳性细胞数量少(p0.05),高浓度CoCl_2处理剂量依赖性增加阳性细胞数量(p0.0001),且48 h处理组的结果与24 h处理组无显著差异;台盼蓝染色结果表明,CoCl_2处理可剂量依赖性促进细胞凋亡;CoCl_2处理后,促凋亡相关基因Bax和蛋白Bax表达呈剂量依赖性上调(p0.001),抗凋亡相关基因Bcl-2和蛋白Bcl-2表达呈剂量依赖性下调(p0.001);CoCl_2处理可剂量依赖性促进hiPSC-CMs细胞的凋亡。通过qRT-PCR检测和Western blot检测确定600μmol/L为最佳处理浓度,24 h为最佳处理时间,证明了该处理条件既不影响hiPSC-CMs细胞活力又可致其缺氧凋亡,建立了氯化钴诱导的hiPSC-CMs体外缺氧模型。论文结果为体外探索缺氧引起的心血管疾病的发病机理和寻找新的治疗靶点与药物提供了可靠的工具。     

石榴酸对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

利用MTT法检测石榴酸对T24细胞增殖的影响,利用Hoechst33342染色后观察细胞形态学的变化,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率。MTT分析结果显示,石榴酸的半致死浓度(IC50)为30μmol/L。应用荧光显微镜观察Hoechst荧光染色后细胞核形态变化,石榴酸处理T24细胞后,细胞核体积明显变小,并呈现皱缩致密的颗粒状的强荧光。应用流式细胞仪分析石榴酸对细胞凋亡的影响,发现石榴酸能够诱导膀胱癌T24细胞的凋亡,30μmol/L石榴酸处理细胞24h,凋亡率为49.4%。说明石榴酸能够显著抑制膀胱癌T24细胞的活力,有效诱导T24细胞凋亡。     

大黄素抑制人鼻咽癌细胞CNE增殖及诱导凋亡作用

大黄素(emodin)是从大黄中提取的一种天然蒽醌类衍生物,具有明显的抗肿瘤活性。研究大黄素对人鼻咽癌细胞株CNE增殖的抑制作用以及其诱导凋亡的机制,对其抗肿瘤机制的研究具有积极的意义。利用MTT法检测大黄素对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制作用,通过Hoechst33342染色,观察大黄素处理人鼻咽癌细胞株的形态学变化,Western blot研究其诱导肿瘤细胞凋亡通路的变化。结果表明,对于试验细胞株,大黄素杀伤肿瘤细胞的作用,随大黄素浓度升高和作用时间的增加,呈剂量依赖性和时间依赖性;通过倒置显微镜观察细胞在给药后的直观形态学变化,给药后通过Hoechst33342染色进一步证明大黄素可诱导凋亡。给药后通过Western blot对其作用机制的初步探索表明,大黄素处理后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)发生剪切,增强Caspase依赖性细胞凋亡通路的信号。大黄素单药可以抑制人鼻咽癌细胞CNE的增殖,表明其有可能成为一种有效的治疗鼻咽癌的药物。     

β-桐酸诱导膀胱癌T24细胞凋亡机理

应用Hoechst33342染色对T24细胞进行染色,荧光显微镜下观察T24细胞经β-桐酸处理后的细胞形态学变化;应用流式细胞术分析β-桐酸对T24细胞凋亡率的影响,结果发现,β-桐酸能够诱导膀胱癌T24细胞凋亡。利用蛋白免疫印迹法分析凋亡的相关蛋白表达,发现β-桐酸能上调Bax/Bcl-2比例,并使Caspase-3表达水平上升,这为β-桐酸诱导T24细胞凋亡提供了进一步依据。β-桐酸还能够促进PPARγ的活化,且PPARγ抑制剂能够拮抗β-桐酸对JEG-3细胞生长的抑制作用和凋亡蛋白的表达影响,提示β-桐酸诱导膀胱癌T24细胞的凋亡作用与PPARγ的活化有关。     

三七茎叶皂苷对大鼠离体心肌凋亡的保护作用

为了研究三七茎叶皂苷(Pn GL)对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤模型心肌细胞凋亡的保护作用机制,采用TUNEL和免疫印迹(Western blot)蛋白方法检测细胞凋亡及凋亡基因蛋白Bcl-2、Bax、ERK1/2等相关凋亡通路,观察Pn GL对心脏缺血/再灌注损伤后心肌细胞凋亡的保护作用机制。TUNEL结果显示,正常细胞核形态大小较为一致、荧光较弱,而凋亡细胞核呈高亮;空白对照组可见少量TUNEL阳性细胞;模型组阳性细胞显著增加;给予PnGL后凋亡细胞所占比例随着药物浓度的增加而明显下降。Western blot实验结果显示,与空白对照组比较,缺血/再灌注组中心肌细胞Bcl-2表达明显降低,Bax表达明显增加,ERK1/2和p-ERK1/2表达明显降低;给予PnGL后,Bcl-2表达明显升高,Bax表达明显降低,ERK1/2和p-ERK1/2表达明显升高。因此,Pn GL对缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用,其保护作用可能与激活ERK1/2细胞凋亡保护通路、从而调节Bcl-2和Bax的表达有关。     

石榴酸诱导子宫内膜样腺癌细胞凋亡的作用机理

研究了石榴酸诱导子宫内膜样腺癌RL-952细胞凋亡的作用机理.以α-亚麻酸和α-桐酸为对照,通过MTT法检测石榴酸对细胞相对活力的影响,并通过荧光显微镜观察细胞核的形态学变化,应用流式细胞术分析细胞的凋亡率.应用蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白的表达,分析石榴酸对PPARγ和p53蛋白表达的影响.应用荧光染料DCFH-DA染色,通过荧光分光光度法分析了细胞内ROS水平的变化.应用PPARγ抑制剂T0070907和ROS清除剂NAC对石榴酸的作用机理进行了初步探讨.结果表明,与α-亚麻酸和α-桐酸相比,石榴酸抑制RL-952细胞相对细胞活力的作用最强;石榴酸处理后细胞出现明显的凋亡形态学改变,凋亡细胞的比例明显增加.石榴酸能够明显促进凋亡相关蛋白酶Caspase-3的表达,并上调凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达比例,且明显增加PPARγ和p53蛋白的表达水平.石榴酸还能够显著增加RL-952细胞内ROS的产生.石榴酸抑制RL-952细胞活力的作用可以被T0070907和NAC所拮抗,结果提示,石榴酸对子宫内膜样腺癌RL-952细胞的凋亡诱导作用可能与PPARγ信号通路的活化及ROS的产生有关.     

流式细胞仪检测苏丹Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ对SGC-7901细胞增殖的影响

为了进一步研究苏丹Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ对人胃癌细胞(SGC-7901)增殖的影响,采用流式细胞仪测定了DNA含量的变化,分析细胞周期的变化.结果表明:苏丹Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ促进了SGC-7901细胞由G1期进入S期和G2期,表现为G1期细胞平均DNA含量下降,S期DNA含量上升,G2期DNA含量上升,细胞增殖指数(PI)增加,S期细胞指数(SPF)增加.其中苏丹Ⅲ在50μg.mL-1剂量时对SGC-7901细胞增殖影响非常显著(P<0.01),苏丹Ⅰ、Ⅳ在10μg.mL-1剂量时对SGC-7901细胞增殖影响非常显著(P<0.01).苏丹Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ是通过影响细胞周期,从而调节SGC-7901细胞的增殖活动,促进细胞分化增殖.     

The Difference of Sensitivity between BXPC-3 and K562 Cells by Treatments with Combination of Indole-3-acetic Acid and Horseradish Peroxidase

The difference of sensitivity to indole- 3-acetic acid （ IAA ） combined with horseradish peroxidase （HRP） in K562 and BXPC- 3 cells was investigated. The cell proliferation was determined by MTF assay. The cell cycle and apoptosis of K562 and BXPC-3 cells were examined by a fluorescence flow cytometer （FCM） and terminal deoxynacleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling （TUNEL） respectively. The experimental results show that IAA and HRP could inhibit BXPC- 3 cell proliferation greatly compared with K562 cell during the first 48 h . The cell cycle was arrested predominantly at G2/ M phase in K562 and BXPC- 3 cells. The cell apoptosis of K562 and BXPC- 3 was induced by IAA/ HRP. There was a significant difference between the two cell lines since BXPC-3 cells were more sensitive than K562 cells by treatments with combination of IAA and HRP.     

人参皂苷Compound K对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

对人膀胱癌T24细胞进行体外培养,采用MTT方法观察不同浓度人参皂苷Compound K处理细胞24、48、72h后对细胞增殖的抑制作用,利用Hoechst33342对细胞进行染色,荧光显微镜观察细胞形态学变化,应用流式细胞术观察人参皂苷Compound K对T24细胞凋亡的诱导作用,并应用WesternBlotting检测不同浓度人参皂苷Compound K处理后T24细胞中caspase-3及相关蛋白的表达情况。结果显示,人参皂苷Compound K对膀胱癌T24细胞的增殖具有较强的抑制作用,呈浓度和时间依赖关系,并诱导肿瘤细胞凋亡,同时caspase-3活化型表达量增加。说明人参皂苷Compound K能够显著抑制膀胱癌T24细胞的活力,有效地诱导T24细胞凋亡。     

积雪草酸衍生物的合成及抗肿瘤活性的研究

以积雪草酸为先导化合物,对其2位、3位、12位、23位和28位进行结构修饰,设计并合成12个积雪草酸类似物.采用MTT比色法,选用人胃腺癌细胞株SGC-7901,人非小细胞肺癌细胞株A549和人成纤维肉瘤细胞株HT-1080为靶细胞,进行积雪草酸类似物体外细胞毒活性药理评价.结果表明化合物4b、6b对于SGC-7901、A549、HT-1080的抑制率明显高于对照品,值得进一步研究.     

β-桐酸抑制膀胱癌T24细胞生长及其与ROS的关系

研究了β-桐酸(β-ESA)对人膀胱癌T24细胞的生长抑制作用,阐明活性氧簇(ROS)产生与生长抑制作用的关系。利用MTT法检测细胞活力,DCFH-DA荧光探针检测ROS,二硫代二硝基苯甲酸比色法(DNTB)检测谷胱甘肽(GSH)的含量。MTT结果显示,β-桐酸对T24细胞有明显的生长抑制作用,呈时间剂量相关性(P<0.05);活性氧检测表明β-桐酸可以诱导ROS的产生(P<0.05);GSH含量检测表明GSH水平显著降低(P<0.05);加入ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)可以拮抗β-桐酸的作用(P<0.05)。实验结果表明,β-桐酸可抑制T24细胞的生长,其机制可能与诱导ROS的产生有关。     

双基因溶瘤腺病毒联合5-FU抑制肺癌细胞增殖的研究

研究携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒（ZD55-TRAIL-IETD-Smac）联合化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）对肺癌细胞的体外杀伤作用。通过MTT法检测细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot检测杀伤性基因表达与凋亡相关蛋白表达。结果显示ZD55-TRAIL-IETD-Smac与5-FU联合应用能有效地抑制肺癌细胞的增殖,并通过激活Caspase通路诱导肺癌细胞产生凋亡,表明,5-FU能够显著增强携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒对肺癌细胞的杀伤作用,为肺癌的临床应用提供了参考。     

Effect of hydroxyapatite nanoparticles on K562 cells in vitro

Stable and single-dispersed hydroxyapatite （HAP） nanoparticles were synthesized with ultrasonic-assisted method. HAP nanoparticles were characterized by dynamic light scattering, XRD （X-ray diffraction） and TEM （Transmission Electron Microscopy）. The effect of HAP nanoparticles on the K562 human myelogenous leukemia cell line was investigated by MTT assay and cell count test, and the mechanism was studied through the changes of cell cycle and ultrastructure. The results showed that HAP nanoparticles inhibited the proliferation of K562 cells dramatically in vitro. HAP nanoparticles entered the cytoplasm of K562 cells and the cells were arrested at G/M phase, thus, the cells died directly.     

Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T细胞白血病Molt-4细胞周期和凋亡的影响

为了研究Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T淋巴细胞白血病细胞株Moh-4增殖和凋亡的影响,采用MTT法检测了BILB021对Molt-4细胞增殖的影响,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化,流式细胞术检测药物作用前后细胞周期和凋亡的改变,Westernblotting检测BIIB02l对细胞周期和凋亡相关蛋白的影响。结果显示：BIIB021以时间和刺量依赖性方式抑制Molt-4细胞增殖,48、72h的IC50分别为384．6nmol／L和301．8nmol／L;Hoechst33258染色可观察到细胞内出现凋亡小体,且随着药物浓度增大,凋亡小体的数目也逐渐增多;流式结果同样显示,随着药物浓度升高,细胞凋亡率逐渐上升,400nmol／LBILB021可诱导细胞凋亡率达34．4％;另外,BIIB021可显著阻滞细胞于GO／G1期;Westernblotting显示BILB021激活Caspase-8、-9、-3和PARP,下调CDK4／6,上调p21和p18,并能明显抑制Akt和p65。由此表明,BIIB021能激活死亡受体途径和线粒体途径诱导Molt-4细胞凋亡,并通过影响CDK4／6和p21、p18使得Molt-4细胞被阻滞于GO／G1期,抑制细胞增殖;BIIB021对Mott-4的Akt和NF-kB也有抑制作用。     

抗癌散对肿瘤细胞的作用研究

为了观察抗癌散中各提取部位在体外对人体肿瘤细胞的作用，利用MTT测定法观察从抗癌散中提取的乙醇部位、多糖部位、乙酸乙酯部位、石油醚部位、正丁醇部位、挥发油部位对肿瘤细胞的影响。结果证明正丁醇部位对HGC细胞和A549细胞的抑制率最大；Hela细胞随着用药浓度的增大，石油醚部位抗癌效果显著增强，正丁醇和挥发油部位在浓度为50μg／mL和100μg／mL时都很有效。