木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化活性研究

目的:研究木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物的抗氧化特性.方法:测定不同酶解时间下的酶解液的抗氧化性;用葡聚糖凝胶分离活性肽段并测定其抗氧化性.结果:在酶用量6 000 U/g 底物、底物质量分数3%、pH7.5、温度55℃的酶解条件下酶解210 min,酶解液的抗氧化活性较高,0H·清除率55.43%,O2-·清除率64.23%,DPPH·清除率79.32%,总抗氧化能力98.74%单位/mL;通过葡聚糖凝胶分离并与已知标准品对照,木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化活性多肽的分子质量主要集中在1321～607 Da,该分子质量片段活性多肽对0H·的清除率为42.26%,对02-·的清除率为57.33%,对DPPH·清除率为74.43%,总抗氧化能力88.43单位/mL.结论:木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白210 min时酶解液的抗氧化活性较高,抗氧化活性多肽分子质量主要集中在1 321～607 Da之间.     

真空提取核桃粕多酚的抗氧化活性研究

目的 探究真空提取的核桃粕(walnut meal)多酚的抗氧化活性。方法 以非真空条件下提取的多酚为对照,采用超声波辅助真空法提取核桃粕多酚,用HPD-100型大孔树脂对多酚进行纯化,福林酚(Folin-Ciocalte)法测定多酚含量,通过试剂盒检测多酚对1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)、超氧阴离子自由基的清除率及Fe³⁺还原能力(ferric reducing antioxidant power,FRAP)来评价其体外抗氧化活性,用cck8(cell countingkit-8)法测定不同浓度的核桃粕多酚对HepG2细胞的毒性作用,确定3个无毒性作用浓度,以770μmol/L的H₂O₂诱导HepG2细胞建立氧化应激损伤模型,通过测定HepG2细胞中丙二醛(malonicdialdehyde, MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活力、谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量探究12.5、25...     

固态发酵核桃粕制备活性肽及其抗氧化活性的研究

为高效利用核桃粕,本研究以核桃粕为原料,采用黑曲霉固态发酵制备活性肽。考察接种量、发酵时间、发酵温度和培养基含水比例对多肽得率的影响,通过响应面实验确定最优发酵工艺条件为:接种量5.5%,发酵温度33.50℃,培养基含水比例1.00mL/g,发酵时间84h。经验证实验可知,在最优发酵条件下核桃活性肽得率可达35.68%,比优化前提高了26.7%。该活性肽具有较强的体外抗氧化活性,DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基清除率的IC50分别为0.15、1.75、2.4mg/mL。由此得出核桃粕是一种良好的活性肽生产原料,且该活性肽是理想的天然抗氧化产品。      

核桃仁活性成分的提取及体外抗氧化活性研究

用95%乙醇、乙酸乙酯、正乙烷依次萃取核桃仁的可溶成分.用化学发光法、DPPH法、TBA法测定各提取物的抗氧化活性.结果表明核桃仁各取物对DPPH自由基均有清除作用,以95%乙醇提取物最佳,乙酸乙酯提取物次之;95%乙醇提取物对亚油酸自氧化体系的抑制作用也强于乙酸乙酯提取物,而正己烷提取物则表现出促氧化作用,在以Fe2+及Fenton反应催化的亚油酸脂质过氧化体系中,95%乙醇提取物的抑制作用强于同浓度的茶多酚;此外,95%乙醇提取物对碱性连苯三酚体系产生的超氧阴离子自由基(O2.)有较强的清除作用,但对VC-Cu2+-酵母-H2O2体系产生的羟基自由基(.     

水飞蓟粕蛋白的酶解及其酶解物抗氧化活性研究

以水飞蓟粕为原料,研究其蛋白酶解工艺及酶解物的抗氧化活性。结果表明,中性蛋白酶用于制备水飞蓟粕蛋白抗氧化肽具有明显的优势。正交试验确定了制备水飞蓟粕蛋白抗氧化肽的最佳酶解条件为:底物质量分数2%,加酶量14 000 U/g,pH7.0,温度55℃,酶解时间120 min,该条件下制备的水飞蓟粕蛋白酶解物对羟自由基的清除率为88.57%。抗氧化试验显示,水飞蓟粕蛋白酶解物具有一定的清除DPPH自由基和羟自由基能力,IC50分别为0.402 g/L和6.659 g/L,水飞蓟粕蛋白酶解物同样也具有较强的还原能力。     

核桃粕酶解工艺研究

以核桃粕为原料,用复合蛋白酶与风味蛋白酶水解制备核桃多肽,对酶解工艺中的多种影响因素、工艺参数进行了研究,探索出了酶法水解核桃粕的最佳工艺参数。     

乳酸菌发酵核桃粕制备多肽及其体外抗氧化活性

以核桃粕为原料,乳酸菌作为发酵菌种,通过发酵制备核桃粕多肽并对其抗氧化活性进行研究。首先对发酵时间、发酵温度、接种量3个因素进行单因素试验,在单因素试验的基础上进行响应面优化,得到最佳发酵工艺条件,通过体外抗氧化试验测定多肽的抗氧化能力。结果表明：影响试验的因素大小顺序为接种量>发酵温度>发酵时间。核桃粕多肽产量制备的最佳工艺条件：发酵时间12h,发酵温度37℃,接种量13%,在此条件下,多肽产量达到12.84mg/g,与预测值差异不大,证明该优化工艺可靠,按照优化工艺制备所得核桃粕多肽在质量浓度为10 mg/mL时,DPPH自由基清除率可达82%,具有较强的还原能力。     

蛋白酶酶解核桃饼粕的抗氧化活性

为研究碱性蛋白酶酶解核桃饼粕制得的酶解液的抗氧化活性,运用碱溶酸沉提取法提取核桃饼粕蛋白,利用碱性蛋白酶酶解制得核桃饼粕酶解液及核桃饼粕分离蛋白酶解液.通过对·OH、O2-、DPPH自由基清除能力及总还原力的测定,对比核桃饼粕与其分离蛋白酶解产物的抗氧化活性.结果 显示,·OH清除率分别为17.32％和18.11％,O...     

火麻仁粕酶解产物的抗氧化活性研究

采用Alcalase 2.4L FG酶解火麻仁粕,研究不同酶解条件下酶解物的抗氧化活性.结果表明,酶解5 h的产物抗氧化效果最好:酶解物对DPPH·、HO·的清除以及对二价铁离子螯合的EC50分别为1.36,0.62,1.15 mg/mL,虽然比传统抗氧化剂差,但发现在抑制油酸过氧化体系中从第5天开始酶解物对油酸的抑制效果优于α-生育酚,并且酶解物中游离抗氧化氨基酸高.     

酶解方式对核桃蛋白肽及其抗氧化活性的影响

分别采用7种蛋白酶对核桃蛋白进行单酶水解,并与双酶复合酶解进行比较,考察不同酶解方式对酶解产物水解度、短肽得率和抗氧化活性的影响。结果表明,碱性蛋白酶单酶酶解核桃蛋白,产物的水解度和短肽得率显著高于其它单酶处理,分别达到18.94%和76.37%,对DPPH自由基清除能力的IC50值仅为3.23mg/mL,抗氧化活性显著高于其它处理;将碱性蛋白酶分别与其它蛋白酶组合酶解,核桃蛋白酶解产物的水解度和短肽得率均有所提高,其中与木瓜蛋白酶组合处理的水解度可达28.36%,短肽得率可提高至85.62%。双酶酶解产物对提高清除DPPH自由基和羟自由基的活性不显著,碱性蛋白酶分别与中性蛋白酶、木瓜蛋白酶的组合可以显著提高酶解产物清除超氧阴离子自由基的活性。     

核桃蛋白酶解工艺优化与酶解液抗氧化活性分析

采用单因素和正交实验,以水解度为评价指标,研究了加酶量、pH值、酶解温度和料液比对酶解工艺的影响。确定了碱性蛋白酶水解核桃蛋白的酶解条件:酶解温度60℃,料液比1∶25,pH10.0,加酶量7%,酶解时间为2h。对在此条件下制备的酶解液的抗氧化性进行了研究。对于水解度分别为30%、20%、10%的水解液进行了分析。结果表明,3个水解度水解液对二苯代苦味酰基自由基、羟基自由基和超氧阴离子均有较好的清除能力,且还原性较强。     

核桃饼粕蛋白提取、多肽制备条件优化及其酶解液的抗氧化性研究

本研究以去除多酚的核桃粕为原料,利用均匀试验优化核桃粕碱溶性蛋白提取条件,利用二次通用组合旋转设计优化双酶法制备核桃粕多肽制备条件,结合项目组前期建立的模拟胃肠道消化体系及模拟胃肠道消化体系+混合乳酸菌两种体系,制备核桃粕蛋白酶解液,采用体外实验对比三种体系制备核桃粕蛋白酶解液的抗氧化活性。核桃粕蛋白质最佳提取条件为:提取溶液的pH11、料液比为1:21 (g/mL)、提取温度65 ℃、提取时间70 min,提取2次,在此条件下提取液蛋白含量为221.6233 mg/g。双酶法制备核桃粕多肽工艺条件分为两个阶段,第一阶段胃蛋白酶酶解阶段,其最佳条件为:底物质量浓度为1 g/100 mL、pH2.4、加酶量为133.53 U/g、温度为40 ℃、时间139 min,在此条件下酶解,核桃粕多肽酶解液水解度25.90%;第二阶段胰蛋白酶酶解阶段,其最佳条件为:加酶量800 U/g、温度20 ℃、pH为6、酶解时间240 min,在此条件下酶解,核桃粕多肽酶解液的水解度为35.57%。三种酶解液的总抗氧化能力V_C当量值分别为:双酶酶解液0.0516 mg/mL,体外模拟胃肠道消化酶解液0.0634 mg/mL、体外模拟胃肠道消化+混合乳酸菌酶解液0.0411 mg/mL,用双酶、体外模拟胃肠道消化、体外模拟胃肠道消化+混合乳酸菌三种体系制备的核桃粕蛋白酶解液均具有抗氧化性活性,而双酶法制备的核桃粕酶解液具有较强的抗氧化活性。     

核桃(Juglandaceae)种仁、叶、花粉抗氧化活性及成分鉴定

为综合开发核桃生物资源,研究了7种不同溶剂提取的不同种类核桃种仁、叶及其花粉提取物的抗氧化活性,并鉴定其抗氧化成分。采用DPPH和ABTS⁺自由基清除能力以及FRAP还原能力评价其抗氧化活性,并测定总酚、总黄酮含量,采用高分辨质谱仪鉴定样品抗氧化活性成分。结果表明,供试7种溶剂中60%丙酮提取物抗氧化活性较高。山核桃叶的DPPH(IC₅₀=0.156 mg/mL)和ABTS⁺(IC₅₀=0.131 mg/mL)自由基清除能力及还原能力(62.17 mg V_C/g)较其他品种核桃叶强。‘西林3号’核桃不同部位抗氧化活性测定显示,DPPH和ABTS⁺自由基清除力及FRAP还原力顺序从强到弱为:内种皮 > 叶 > 花粉 > 带皮种仁 > 去皮种仁。利用LC-MS从‘西林3号’内种皮及其核桃叶、KT-J02核桃叶、山核桃叶等4个供试样品的60%丙酮提取物中共鉴定出17种抗氧化活性成分,其中酚类9种,黄酮类8种,槲皮素和汉黄芩素为4种供试样品共有成分。山核桃叶中鉴定出13种成分,其中4种仅存在与山核桃中,即没食子酸、3-咖啡酰奎宁酸、表儿茶素没食子酸酯和对香豆酸;‘西林3号’和KT-J02核桃叶分别有1种成分仅存在于其中,为没食子酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖和儿茶素。内种皮中鉴定出6种成分,鞣花酸仅存在于内种皮中。     

漂烫时间对铁核桃雄花序营养成分含量及抗氧化活性的影响

以‘黔核7号’核桃雄花序为材料,研究不同漂烫时间(0、3、6、9、12、15 min)对核桃雄花序主要营养品质及抗氧化活性的影响。结果表明,漂烫显著降低了核桃雄花序中的灰分、脂肪、蛋白质等常规营养素含量;漂烫3 min可溶性糖、淀粉、可滴定酸、灰分含量明显降低;脂肪含量在漂烫6 min后明显下降;粗纤维和蛋白质含量则在漂烫9 min和12 min后明显降低。漂烫处理对K、Fe、Mn和Zn含量损失严重,其次是Cu、P和B;Mg和Ca含量在漂烫过程中显著升高。漂烫过程中,必需氨基酸的损失率高于非必需氨基酸和总氨基酸,苯丙氨酸和缬氨酸损失率最高。抗氧化物质总酚和总黄酮含量均随漂烫时间的延长而明显下降,抗氧化能力也随之下降,且铁离子还原能力降幅大于1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力。结论:为最大程度地保持核桃雄花序的营养价值,在加工和烹饪过程中漂烫时间应控制在3 min以内。     

鲜食核桃仁抑制褐变与脱色方法及货架期保鲜效应

鲜核桃仁因易于褐变而难以作为成品生产与销售。本实验以‘香玲’核桃湿鲜坚果为试材,分别对新鲜核桃仁、已褐变核桃仁进行不同工艺参数下4 种方法抑制褐变以及2 种方法脱色处理,根据20 ℃货架期下色值变化和感官观测结果,选取两组实验的最佳处理条件分别为1.0%（质量分数,后同）抗坏血酸（ascorbic acid,AsA）＋0.05%柠檬酸（citric acid,CA）浸泡5 min（抑制褐变）以及1.0% AsA 20 ℃下浸泡1 h（脱色）。分别用两种方法单独处理或与1 kJ/m2短波紫外线（ultraviolet radiation C,UVC）复合处理,以同等条件下去离子水处理为对照组,统一用30 μm厚的聚乙烯袋包装,5 ℃货架保鲜。结果表明,两组实验中,单独处理和UVC复合处理均可持续抑制多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）、过氧化物酶（peroxidase,POD）活力升高,苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia lyase,PAL）活力在货架14～21 d时较对照组显著提高（P＜0.05）,第56天时抑制褐变的单一和复合处理组及脱色的复合处理组酸价均显著低于对照组（P＜0.05）。两组实验中复合处理可同时延缓细菌和霉菌的滋生,部分提高总抗氧化活性（ferric reducing/antioxidant power,FRAP）;核桃仁过氧化值（peroxide value,POV）有所增加,含油率未受明显影响,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力与对照组差异不明显。核桃仁种衣和去皮核桃仁的PPO活力均受AsA的竞争性抑制。5 ℃货架56 d时,脱色组复合处理核桃仁的亮度（L*值）达到与抑制褐变处理同等效果,且核桃仁无可见霉变。本研究结果可为鲜核桃仁的商品化生产提供理论与技术依据。     

核桃蛋白的分离制备及其酶解物的抗氧化特性

根据蛋白在水溶液、盐溶液、醇溶液及碱性溶液中的溶解性不同,从核桃粕中分离得到四类不同性质的蛋白组分:清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,其中球蛋白和谷蛋白含量较高,分别为16.90%和71.40%。以脱脂脱酚粕、谷蛋白和球蛋白为原料,分别制备蛋白酶解液,以DPPH自由基清除率和蛋白质回收率为指标,对蛋白酶解工艺条件进行优化,探讨蛋白酶解液的分子量分布与抗氧化活性的关系。结果表明:在碱性蛋白酶、pH8及酶解9h的条件下,蛋白酶解液有较高的DPPH·清除率和蛋白回收率;脱脂脱酚核桃粕酶解液DPPH·清除率83.29%高于谷蛋白酶解液79.25%和球蛋白酶解液72.27%,蛋白回收率分别为69.83%、66.42%和73.71%。脱脂脱酚粕、谷蛋白和球蛋白酶解液以小分子肽居多,其中相对分子量≤1000的肽段分别占总量的42.73%、63.91%和55.10%,推测其抗氧化活性可能与小分子肽含量有关。     

核桃多酚与蛋白质的作用方式及其抗氧化活性

以核桃为研究对象,将核桃碱提蛋白和酸提蛋白经溶剂作用后超滤,通过破坏核桃多酚-蛋白复合体间的作用力得到不同结合态多酚,测定多酚含量及其抗氧化活性,以期探究核桃酚类物质与核桃蛋白化学键结合机制。研究结果表明,在pH3.5和pH11条件下,游离态多酚含量分别为6.46、6.27 mg/g,占总酚含量的25.15%、29.77%,非共价结合态多酚含量分别为11.31、7.74 mg/g,占总酚含量的44.02%、36.75%,共价结合态含量7.92、7.05 mg/g,占总酚含量的30.83%、33.48%。由此可知,非共价结合为核桃多酚与核桃蛋白质的主要结合方式。在pH3.5和pH11条件下,游离态多酚对DPPH自由基的清除率分别为82.34%、43.68%,Fe²⁺螯合率分别为71.88%、49.96%,还原力吸光度值分别为1.157、0.857,脂质抗过氧化能力分别为47.71%、32.69%。在5种不同结合态多酚中,游离态多酚的抗氧化活性显著高于其他结合态多酚(p<0.05)。     

核桃多肽的抗氧化活性及其分子量、氨基酸组成特性研究

目的:为了提高核桃粕利用价值,阐明核桃多肽抗氧化活性及其构效关系。方法:采用DA 201-C大孔树脂和Sephadex G-15葡聚糖凝胶分离纯化核桃粕蛋白酶解液,分析比较不同疏水性和不同分子量核桃多肽抗氧化活性及氨基酸组成特性。结果:经DA 201-C大孔树脂分离的多肽组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的抗氧化活性随洗脱溶剂疏水性增大而增大。组分Ⅲ经Sephadex G-15分离纯化得到a、b、c、d四个不同分子量多肽组分。分子量分布在400~700 Da的组分c具有最高的羟自由基清除能力,并含有较高的谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸,与组分Ⅲ在氨基酸组成上具有相似性。结论:具有较好抗氧化活性的核桃多肽分子量小于800 Da,并具有疏水性较强,谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸组成含量相对较高的结构特性。