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对转基因玉米T25转化体特异性荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证,选择了7家实验室采用经过验证的方法对3个水平的转基因玉米T25基体标准物质进行协同实验研究。通过比较分析各参与实验室的实验条件、标准曲线的参数,进一步证明该方法室间重复性好。经统计学分析各参与实验室的数据等精度,因此计算各实验室的总平均值做为标准物质的标准值。3个水平的基体标准物质的标准值和扩展不确定度(k=2)分别为1.17%±0.22%、2.17%±0.38%和9.81%±2.30%。 相似文献
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PCR技术及琼脂糖凝胶电泳技术为基础,对转基因水稻克螟稻2号和阴性受体秀水11进行真实性 鉴定。利用典型性检测、指纹图谱技术对候选物的转基因事件的真实性、转入事件正确性(是否为特异性目标外源 基因)、品系遗传背景进行鉴定,结果表明,克螟稻2号只含特异性序列CrylAb,秀水11不含所选的外源基因,它们具有相同的遗传背景。随机各抽取克螟稻2号和秀水11水稻100株,通过特异性PCR、免疫印迹实验来检测原材 料的纯度,结果表明,克螟稻2号为100%的转基因水稻,秀水11为100%的阴性受体水稻。 相似文献
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将筛选后的转基因水稻TT51-1和非转基因水稻明恢63种子分别冷冻研磨成粉末,采用重量法配置了5个不同水平的标准物质。经检验该标准物质的均匀性良好,可在4℃保存条件下存储1年。标准物质采用重量法的质量分数作为标准值,数字PCR测定拷贝数分数作为参考值,通过转基因水稻与非转基因水稻种子粉末提取效率比值校准的数字PCR定值结果与重量法质量分数定值结果之间具有等效一致性,该标准物质可用于转基因水稻TT51-1的定量PCR检测及其特异性检测方法的评价。 相似文献
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转基因玉米pUC57-BT11质粒标准分子的构建与适用性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
构建了含有转化体特异性片段(BT11-93bp)和玉米的内标准基因片段(zSSIIb-151bp)的质粒分子pUC57-BT11,经酶切和测序验证后,对其特异性进行检查。采用测序和荧光定量PCR法对该质粒分子进行定值,结果为1.01±0.01(k=2)。通过质粒分子和基因组DNA产生的内源和外源基因比较,发现两者标准曲线斜率无显著差异,线性相关系数均≥0.99。利用pUC57-BT11质粒分子对已知含量的转基因基体标准物质进行转基因含量测定,结果发现采用pUC57-BT11质粒分子对标准物质的测定结果与其标准值一致,表明pUC57-BT11质粒分子可作为转基因玉米BT11转化体特异性的定性和定量检测用标准物质。 相似文献
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采用二甲基亚砜(DMSO)作为冻干标准物质的溶剂,以重量法准确配制维生素K_1/DMSO溶液,再进行分装、冷冻干燥,经定性分析、定值分析、均匀性检验、稳定性考察和不确定度评定,研制了维生素K_1冻干标准物质。以维生素K_1纯度标准物质溶液为校准品,对得到的冻干物质进行了高效液相色谱法定值分析,冻干标准物质的准确定值结果为0.96 mg/mL,相对扩展不确定度为7%。建立的维生素K_1冻干标准物质研制方法,对于临床检验中维生素K_1的准确测定和相关疾病的正确诊断治疗以及维生素K_1长期保存具有重要意义。 相似文献