嗜酸乳杆菌细菌素Lactobacillin XH2抑制大肠杆菌作用机理的探讨

将离子交换色谱纯化获得的抑菌效价为380.60 AU/mL的嗜酸乳杆菌细菌素Lactobacillin XH2作用于大肠杆菌（Escherichia coli）,从死亡率、细胞膜损伤及引起胞内物质外泄方面,探讨Lactobacillin XH2抑制大肠杆菌的机理。结果表明：Lactobacillin XH2作用于大肠杆菌后,在3 h内大肠杆菌死亡率达96%,菌体细胞变形并出现孔洞,菌体短小且不规整。进一步分析发现,细胞膜通透性增大,胞内K+快速大量泄露,膜电位紊乱失衡;胞内紫外吸收物质、乳酸脱氢酶等生命大分子物质大量流失;同时导致了大肠杆菌胞内三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）外泄,细胞物质代谢、能量代谢失常,最终导致了菌体死亡。这些现象表明,孔道形成（pore formation）理论可能同样适用于Lactobacillin XH2对革兰氏阴性菌大肠杆菌的作用机理。     

嗜酸乳杆菌WS所产细菌素生物学特性的研究

LactobacliiusacidophilusWS在MRS培养基中经过37℃培养得到的细菌素经受70℃、121℃处理20min后,活性几乎不变,对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌有明显的抑制作用,而对大肠杆菌为代表的革兰氏阴性菌的抑制作用不明显,说明该细菌素是一种广谱抗菌的细菌素。细菌素对木瓜蛋白酶(papain)、蛋白酶K(proteinaseK)以及胰蛋白酶(trypsin)敏感,而对中性蛋白酶(subtilisin)和胃蛋白酶(pepsin)的敏感性差。在一定的范围内,细菌素的抑菌活性和环境的酸度呈正相关。     

一株乳酸乳球菌所产细菌素的生物学特性

对乳酸乳球菌KLDS4.0326所产类细菌素进行分离纯化,并对细菌素的部分生物学特性进行研究。在排除酸性产物和过氧化氢的干扰后,菌株的无细胞发酵上清液对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性细菌以及大肠杆菌、沙门氏菌等革兰氏阴性细菌具有显著的抑制作用;经胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性降低,表明抑菌成分为蛋白类物质;该细菌素具有良好的热稳定性,在酸性条件下抑菌活性稳定,并且具有较广的抑菌谱,能够抑制多种革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。     

产细菌素植物乳杆菌菌株的筛选及其细菌素生物学特征研究

从甘蓝泡菜中分离到６９株乳酸杆菌,通过琼脂点扩散交叉拮抗试验,筛选出３株有明显抑菌活性代谢产物的植物乳杆菌。排除酸、过氧化氢等干扰因素后,离心发酵液对指示菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍ９６Ｄ仍有抑菌作用,用胰蛋白酶对其透析液处理后活性丧失,说明它们产生的抑菌物质是细菌素。以Ｇ８菌株为试材,对其细菌素类物质的产生及细菌素粗提物进一步研究,发现在对数末期其抑菌活性最高,对热相对稳定（１００℃,２０ｍｉｎ）,易被胰蛋白酶、蛋白酶Ｋ和胃蛋白酶失活,显示活性的ｐＨ值范围为４．０～５．５,粗提液表现为不仅抗明串株菌属、片球菌属、乳杆菌属的一些菌株,而且抗一些非乳酸菌的革兰氏阳性菌,但对大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）等革兰氏阴性菌没有任何抑制作用。说明Ｇ８菌株产生的是一类抗广谱革兰氏阳性菌的细菌素     

嗜酸乳杆菌产类细菌素Lactobacillin NX2-6的初步研究

从内蒙古传统乳制品酸马奶中筛选出1株产生具有广谱抑菌活性物质的嗜酸乳杆菌NX2-6。在排除酸性产物和过氧化氢的干扰后,菌株NX2-6所产生的类细菌素对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌和大肠杆菌等革兰氏阴性菌及米曲霉等真菌具有较强的抑制作用;经胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K处理后发酵液抑菌活性明显下降,但仍具有较强的抑菌活性,对α-胰凝乳蛋白酶抗菌活性没有显著变化,因此表明该抗菌活性物质为蛋白类物质或非单一物质。在酸性条件下它具有很好的热稳定性,pH2.0时活性最强,中性或碱性条件下不具有抗菌活性,抑菌活性pH值范围在2.0-5.0。此抗菌物质不同于一般细菌素,属于类细菌素,命名为Lactobacillin NX2-6。菌株NX2-6产物在生防、食品具有潜在的应用价值。     

嗜酸乳杆菌的培养条件及其生物学特性

对嗜酸乳杆菌的培养条件及其生物量、产酸、耐酸、抗胆盐、世代繁殖和抑菌特性的影响做了初步研究。结果表明,最适生长温度为36～38℃,最适起始pH为5 5～6 2 ,静置培养比振荡培养好,最高生物量和滴定酸度分别可达10 10 CFU/mL和2 19°T。同时嗜酸乳杆菌具有强耐酸性和耐胆盐性,对大肠杆菌和沙门氏菌有很强的抑菌作用。     

源自泡菜的植物乳杆菌产新型广谱抑菌细菌素的特性分析

筛选对食源性致病菌和腐败菌有特异性抑制作用的产细菌素乳酸菌菌株,并研究细菌素的特性,为其在食品防腐中的应用提供参考.从分离自泡菜的112株乳酸菌中反复筛选得到1株产细菌素(BacH32)菌株(Hlh32),经鉴定菌株Hlh32为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),其在35?℃?MRS培养基中发...     

嗜酸乳杆菌产细菌素的提取及其生物特性研究

以嗜酸乳杆菌为研究对象,通过响应面实验和生物学方法,对该菌细菌素产生条件、细菌素定位和稳定性进行研究。结果表明:该菌产生细菌素的最适培养条件为:培养温度38℃、初始p H7.0、培养时间18 h;在嗜酸乳杆菌发酵液中提取的细菌素具有抑制大肠杆菌生长的作用,主要存在于细胞外;该菌产生的细菌素在40~70℃保持较高的活性;在蛋白酶K、胃蛋白酶和胰蛋白酶处理后,抑菌活性显著下降;在p H3.0~10.0之间具有抑菌活性;在紫外照射时间0.25~1 h之间,活性较稳定。此研究结果对该菌产细菌素的分离鉴定及应用提供了重要参考。      

面包乳杆菌(Lactobacillus panis)C-M_2细菌素的分离纯化及特性分析

本实验对面包乳杆菌C-M2所产的新型细菌素进行分离纯化和特性研究。通过乙酸乙酯萃取、阳离子交换层析和半制备液相三步分离纯化该细菌素。最终细菌素的比活力达到5 044.96 AU/mg,纯化倍数为79.8倍,但回收率仅为0.35%。通过液相色谱-串联质谱法分析,该细菌素的分子质量为863.52 D,氨基酸序列为MVKKTSAV,它是一种新型的Ⅱ类细菌素。该细菌素具有广泛的抑菌谱,可以抑制革兰氏阳性和阴性的食品腐败菌。该细菌素对热和p H值稳定,即使在121℃灭菌15 min,仍保留82.1%的抑菌活性,在p H 6条件下保留85.6%的抑菌活性。它能被多种蛋白酶失活,不能被脂肪酶和淀粉酶失活,这些结果表明该细菌素具有作为食品生物防腐剂的潜在应用价值。     

抑制牛乳房炎嗜酸乳杆菌的筛选和抑菌物质的研究

牛乳房炎是造成重大经济损失的疾病之一,通过6株嗜酸乳杆菌对4株导致牛乳房炎的致病菌进行细菌素、H₂O₂等各种因素的抑菌实验,阐述了各个乳酸菌的抑菌能力以及影响其抑菌能力的主要抑菌物质,结果发现:6株乳酸菌普遍对金黄色葡萄球菌抑菌效果显著,其中嗜酸乳杆菌NCFM（H7）上清液对4株致病菌抑菌效果最好,KLDSAD3（H6）细菌素对无乳链球菌抑制效果最好,KLDSL6（H3）细菌素对乳房链球菌、大肠杆菌抑菌能力最强,且其H₂O₂对乳房链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑菌活性较强,KLDSAD2（H5）细菌素对金黄色葡萄球菌抑制效果最好,其中L6（H3）抑菌活性物质耐热能力较强,AD2（H5）抑菌活性物质热敏性很强,而且这些抑菌活性物质只有在酸性条件下才具有更强的抑菌活力。      

嗜酸乳杆菌zrx02的plnD基因克隆及生物信息学分析

目的:对zrx02嗜酸乳杆菌细菌素编码基因进行克隆与序列分析。方法:对分离出的菌株进行16S rRNA鉴定,并根据已报道的plnD编码产物基因设计引物,以该菌基因组DNA为模板进行PCR扩增和测序,利用Pro Param tool,TMHMM等在线软件对编码蛋白进行生物信息学分析。结果:该菌为嗜酸乳杆菌,命名为嗜酸乳杆菌zrx02,该菌含有plnD基因,通过与Gen Bank中相关的抗菌素基因进行比对,发现其基因序列与Gen Bank库中的Lactobacillus plantarum strain（WP 016526896.1）plnD gene的同源性达到100%。生物信息学分析显示该基因全长355 bp,编码92个氨基酸,相对分子量10.54 ku,理论等电点9.26,该基因编码蛋白是稳定蛋白,不具有明显的跨膜结构,二级结构主要有α-螺旋、无规则卷曲和延伸链组成,三级结构结果显示plnD蛋白模型与Streptococcus pneumoniae中的ComE同源性最高。结论:对嗜酸乳杆菌zrx02 plnD基因的克隆与分析,为进一步探究细菌素的形成机制奠定理论基础。      

嗜酸乳杆菌胆盐水解酶的分离纯化及酶学性质

对嗜酸乳杆菌La-XH1产生的胆盐水解酶进行分离纯化,并对其部分酶学性质进行研究。结果表明：嗜酸乳杆菌La-XH1胆盐水解酶的粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose CL-6B柱层析后的酶比活力分别为47.82 U/mg和115.85 U/mg,纯化倍数分别为4.46 倍和10.82 倍,酶的回收率分别为59.89%和25.11%;通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）电泳分析,该酶的分子质量约为43 kD,最适温度为40 ℃,最适pH值为6.0,Fe3+、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+对该酶有激活作用,其中Fe3+的激活作用最强,Na+、K+对该酶几乎无作用,而Cu2+、Ba2+对该酶有很强的抑制作用。     

嗜酸乳杆菌生物学特性及其发酵乳的研究

研究了嗜酸乳杆菌的生物学特性,并确定其发酵乳的合适的加工工艺。结果表明,在质量分数为11％脱脂乳培养基中加入质量分数为7％的啤酒能显著提高嗜酸乳杆菌的产酸速率及活菌总数。该菌株耐盐和耐胆酸盐能力分别达到6 0％和1.5％,同化胆固醇达80％,证明是一株性能优良的益生菌株。在此基础上确定嗜酸乳杆菌发酵乳的加工工艺:①采用乳糖部分水解的牛乳（水解率40％）为原料,接种质量分数为3％的嗜酸乳杆菌;②采用混合菌种（嗜酸乳杆菌+唾液链球菌嗜热亚种+德氏乳杆菌保加利亚亚种=3％+0.5％+0.5％）为发酵剂,按常规酸乳工艺生产。产品中嗜酸乳杆菌的活菌数达到109mL-1以上,5d后其活菌数仍有6×108mL-1,且产品口风味良好。     

一株从泡菜中分离的产细菌素乳杆菌的鉴定及细菌素特性研究

从泡菜中分离的329 株乳酸菌中,筛选出一株产细菌素的乳酸菌,编号为SD-22。经生理生化实验鉴定为短乳杆菌(Lactobacillus brevis)。在排除过氧化氢干扰和有机酸抑菌作用后,brevicin SD-22 对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌具有较好的抑制作用,对部分真菌也有抑制作用,但对酵母菌和青霉无抑制作用,具有良好的热稳定性和pH 值稳定性,经胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K 处理后抑菌活性完全消失,对α- 淀粉酶不敏感。因此初步认为该菌株是一株产广谱细菌素的乳酸菌。     

超声波细胞破碎法检测嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶活力的研究

采用超声波破碎法对嗜酸乳杆菌A和B产生的β-半乳糖苷酶进行提取,并以邻硝基苯-β-D-半乳糖苷(ONPG)为底物测定了β-半乳糖苷酶的活力。通过单因素试验和正交试验,选出了超声波破碎的最佳工艺条件。实验表明,嗜酸乳杆菌A在工作时间7.6min,工作/间歇为28s/20s,温度36℃时,超声波对细胞的破碎效果较好,此条件下破碎后,A株产生的β-半乳糖苷酶活力为5.963μmolONP/L·min。嗜酸乳杆菌B在工作时间6.8min,工作/间歇为20s/20s,温度37℃时效果较好,产生的β-半乳糖苷酶活力为6.683μmolONP/L·min。因此,嗜酸乳杆菌具有较高产生β-半乳糖苷酶的能力。     

嗜酸乳杆菌对杂色曲霉素吸附作用的研究

嗜酸乳杆菌是肠道内的一种益生菌,也是奶制品中含有的重要的活性微生物。本文探讨了嗜酸乳杆菌及其菌体总蛋白对杂色曲霉素的去除能力,实验结果显示:嗜酸乳杆菌菌体总蛋白对杂色曲霉素的相对吸附率达75.8%,而面包酵母菌体总蛋白为48.9%、小牛血清白蛋白只有32.5%, 嗜酸乳杆菌菌体总蛋白的吸附作用呈一定的量效关系;胰蛋白酶或胃蛋白酶消化使嗜酸乳杆菌菌体总蛋白对杂色曲霉素的相对吸附率由52.2%下降至34.3%和36.1%,但吸附作用没有消失;菌体总蛋白与杂色曲霉素混合温育1、2、3、4、5h检测,结果嗜酸乳杆菌菌体总蛋白在整个实验的时段中的相对吸附率在57.2%～75.7%的较高水平内波动,而面包酵母菌体总蛋白由开始的70.6%相对吸附率在实验5h结束时的19.8%,另外的BSA的吸附率一直维持在14.6%～34.3%之间;酸和热处理菌体使嗜酸乳杆菌对ST的相对吸附率由60.5%分别增加至71.2%和69.5%。本研究的结果为杂色曲霉素的去毒以及食品加工提供了有用的参考数据。     

嗜酸乳杆菌NCFM胞外多糖对小鼠免疫相关基因的调控

目的：研究嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)NCFM胞外多糖对小鼠免疫相关基因的调控作用。方法：通过构建小鼠模型,对小鼠脏器系数进行分析,提取肠组织RNA,采用Real-time RT-PCR方法对免疫相关基因chemokine (C-C motif) ligand 2(CCL2)和interleukin 18(IL18)的表达情况进行分析。结果：脏器系数随着天数的增加而增加,实验组的脏器系数较对照组相比,显著增加。在2个免疫相关基因中,随着时间的延长,IL18和CCL2呈现出先迅速增加后减少的趋势,同时均在第4天表达量达到最大值,且与对照组相比差异极显著(P＜0.01)。结论：胞外多糖可以提高小鼠免疫脏器的质量,并且能够引起免疫相关基因出现特定表达变化,对小鼠机体的免疫调控具有一定的作用。     

植物乳杆菌MA2的生物学特性研究

对Kefir源植物乳杆菌MA2的生物学特性进行了研究,结果显示,MA2菌株在MRS培养基初始pH为6.60,接种量为4%,37℃厌氧条件下培养18 h,活菌数可达到1.2×109cfu/mL。乙酸和乳酸为发酵液中的优势有机酸,且厌氧条件下发酵液中的有机酸的含量较高,厌氧发酵液中检测出的6种脂肪酸中C18∶1的含量最高。降胆固醇试验证明,低聚葡萄糖(GOS)可以促进MA2的胆固醇移除能力,移除率可达到70%;菌体细胞脂肪酸的测定结果显示MA2菌株降胆固醇的机理主要是吸附、吸收同化机理。MA2菌株的牛乳发酵试验结果显示其具有良好的产黏特性,在乳清培养基中胞外多糖产量可达380 mg/L。结合其良好的耐酸、耐胆盐特性,植物乳杆菌MA2具有良好的益生菌应用潜力。     

嗜酸乳杆菌发酵大豆酸凝乳的研究

本文研究了嗜酸乳杆菌在豆乳中的生长情况,考察了温度、接种量、木瓜汁添加、嗜酸乳杆菌与植物乳杆菌复配比例对发酵的影响,最后根据发酵豆乳的感官指标,确定了嗜酸乳杆菌发酵豆乳的最佳工艺。结果表明,发酵温度为39℃、接种量为6%、木瓜汁添加量为10%、嗜酸乳杆菌与植物乳杆菌配比为1:2是制作木瓜发酵豆乳的最佳工艺条件。产品中嗜酸乳杆菌的活菌数达到3.0×109CFU/mL,且产品口感良好。     

菊粉寡糖促进嗜酸乳杆菌生长的研究

对菊粉可促进嗜酸乳杆菌的生长进行了初步研究。结果表明 ,用菊粉代替培养基中部分葡萄糖 ,嗜酸乳杆菌的生长得到明显的促进 ,当MRS培养基中葡萄糖与菊粉的质量比为 1∶1时 ,嗜酸乳杆菌的生物量及酸度得到提高 ,在 3 7℃下培养 48h ,活菌的数量及酸度比对照组分别提高 1 0 10CFU/mL和 1 0°T。