皮卡佐剂狂犬病疫苗的有效性

皮卡佐剂狂犬病疫苗已取得国家临床研究批件。在暴露后免疫中,即使未同时接种抗血清,皮卡佐剂狂犬病疫苗也具有良好的保护效果,明显优于无佐剂的市售疫苗。因此,皮卡佐剂狂犬病疫苗有可能发展为一种治疗性疫苗,在无法实施抗血清接种时,用于Ⅲ度暴露后咬伤患者的免疫。本文就有关该疫苗的有效性作一综述,包括皮卡佐剂狂犬病疫苗的非特异性免疫功能及在动物体内的体液免疫和细胞免疫应答。     

利用DNA免疫技术制备麻疹病毒抗血清

目的利用DNA免疫技术制备特异性麻疹病毒抗血清,用于麻疹减毒活疫苗毒种以及含麻疹病毒疫苗的检定。方法以含麻疹病毒沪-191融合蛋白F和血凝素H基因的重组真核表达载体pGI-F和pGI-H作为免疫原,免疫家兔,制备麻疹病毒抗血清。采用细胞培养法检测抗血清细胞毒性,ELISA法检测抗体滴度,微量细胞病变法检测抗血清的特异性和中和效价。结果麻疹病毒抗血清细胞毒性小,与风疹病毒、腮腺炎病毒、水痘病毒均无交叉反应。抗血清的ELISA效价大于256 000,中和效价为1∶1 024,4倍稀释后仍能完全中和1×10~5 CCID_(50)/ml麻疹病毒。结论 DNA免疫方法可制备高效价、低细胞毒性的麻疹病毒抗血清,该血清可用于麻疹疫苗毒种及含麻疹疫苗的质量控制。     

高效价麻疹抗血清的制备及检定

目的制备高效价麻疹抗血清,用于疫苗检定中病毒鉴别、支原体检测、麻腮二联和麻腮风三联疫苗的联合滴定试验。方法将麻疹病毒L4株于Vero细胞中传代培养,获得高滴度病毒原液,制备免疫抗原,分别经腹腔注射法、耳静脉注射法和背部皮下多点注射法免疫家兔,制备抗血清,并按规程要求对抗血清进行检定。结果采用腹腔注射法、耳静脉注射法和背部皮下多点注射法免疫家兔所制备的抗血清的中和效价分别为1∶960、1∶2 560和1∶3 840,经检定,3种方法制备的抗血清均达到疫苗检定的使用要求。结论背部皮下多点注射法制备的麻疹抗血清效价最高,且操作简单,可作为制备高效价麻疹抗血清的最佳方案。     

疫苗毒种支原体检测中去除本病毒干扰方法的探索

目的探索疫苗毒种支原体检测中去除本病毒干扰的方法。方法分别采用非敏感细胞直接接种法、特异性抗血清中和法及离心加中和法处理21株疫苗毒种样品后,评价去除本病毒干扰的效果。结果21株疫苗毒种中,13株可通过非敏感细胞法去除本病毒干扰;6株可通过特异性抗血清中和法去除干扰;2株可通过离心加中和法去除干扰。应用上述3种方法检测161批疫苗毒种,均能有效去除本病毒干扰。结论非敏感细胞直接接种法、特异性抗血清中和法及离心加中和法可针对不同毒种去除本病毒的干扰,适用于疫苗毒种的支原体检测。     

大肠杆菌表达的破伤风毒素C片段的免疫原性分析

目的　分析大肠杆菌表达的破伤风毒素C片段 (简称TTC)的免疫原性。方法　利用分子生物学技术在大肠杆菌中表达破伤风毒素C片段 ,用阴离子交换层析和金属离子螯合亲和层析方法进行蛋白纯化。参照2 0 0 0年版《中国生物制品规程》的方法检测表达产物的效价。用间接血凝实验检测免疫动物血清中的破伤风抗体单位。结果　重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的 15 %。纯化后蛋白纯度达到 96 5 %。免疫效价为 18 70 6IU mg ,ED50 为 2 0 μg。 1μgTTC经 4次免疫能诱导机体产生足够的抗体 ,保护动物免受破伤风毒素的攻击。 结论　重组蛋白具有良好的免疫原性 ,为开发基因工程疫苗奠定了基础     

破伤风毒素C片段基因克隆及重组表达研究

破伤风毒素片段C分子不具备神经毒毒性，在动物实验中可诱导小鼠产生中和抗体，并能保护小鼠抗破伤风毒素攻击，是理想的亚单位疫苗候选者。我们用基因工程技术在大肠杆菌中重组表达破伤风毒素片段C抗原，为研制新型破伤风疫苗打下基础。从破伤风梭状芽胞杆菌中提取其总DNA，取100ngDNA，利用PCR技术从中扩增出1.4Kb的破伤风毒素片段C基因。扩增产物经限制性内切酶BurnHI、Sail在37C酶切消化后，通过低熔点琼脂糖凝胶电泳纯化，随后克隆进大肠杆菌谷航甘防流基转移酶融合表达载体PGEX－4T－2相应的限制性内切酶克隆位点，组建成重…     

百日咳毒素S1亚单位突变体在大肠杆菌中的表达及纯化

目的克隆百日咳毒素S1亚单位,获得其突变体(S1/9K-129G,rS1),构建原核表达系统,并鉴定融合蛋白的特异性。方法采用PCR和重叠延伸扩增得到突变体,将其与pMD18-T连接,转化至大肠杆菌DH5α,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-T-rS1,经双酶切得到rS1活性结构域编码片段。将其插入pQE-30载体中,转化大肠杆菌M15株,经IPTG诱导表达。表达产物经镍离子柱纯化,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果PCR及重叠延伸获得了约700bp的目的基因片段,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27000左右的蛋白,Western blot检测能与兔抗百日咳毒素多价抗血清发生反应。结论成功表达并纯化了百日咳毒素S1亚单位突变体,为研制百日咳疫苗候补抗原的相关分子免疫学研究奠定了基础。     

新型冠状病毒高效价中和血清的快速制备及应用

目的制备新型冠状病毒高效价中和血清。方法使用重组表达的新型冠状病毒RBD蛋白作为免疫原,免疫SPF级家兔,制备抗血清。通过ELISA和微量中和试验检测抗血清效价。将制备的抗血清分发至我国多家新冠灭活疫苗研发企业,检测抗血清效价。结果经3次免疫后,抗血清的ELISA效价大于160万,中和效价为8 192。5家企业返回微量中和效价检测结果的几何平均效价为6 950。结论成功制备了新型冠状病毒高效价中和血清,并分发至我国多家新型冠状病毒灭活疫苗生产企业用于毒株鉴别及外源病毒因子检测,解决了制约疫苗快速研发的技术瓶颈。     

A群脑膜炎球菌兔抗血清的制备及鉴定

目的制备A群脑膜炎球菌兔抗血清内部参考品,并进行鉴定。方法用新鲜培养的A群脑膜炎球菌混悬液按确定的免疫方案免疫日本大耳白兔,免疫完成后,按确定的采血时间点,经颈动脉采血,分离血清,进行凝集试验,观察兔抗血清凝集反应情况;采用免疫双扩散和ELISA法检测兔抗血清效价,同时利用火箭免疫电泳和ELISA法鉴定兔抗血清的血清学特异性。结果确定免疫方案为基础免疫4周后,加强免疫2周;免疫完成后第6天为最佳采血时间点。6份自制A群脑膜炎球菌兔抗血清的凝集试验效价均达到1︰160,与相应的多糖能够产生沉淀线的最大稀释倍数均不低于1︰8,与A群脑膜炎球菌荚膜多糖反应的抗体滴度均在106及以上,与C、Y和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖之间无交叉反应。结论自制的A群脑膜炎球菌兔抗血清可作为A群脑膜炎球菌荚膜多糖疫苗的定性和定量检测的内部参考品,同时也为其他多糖类疫苗血清抗体的制备提供了参考。     

幽门螺杆菌粘附素hpa A和霍乱毒素B亚单位ctx B融合基因的原核表达

目的　构建幽门螺杆菌粘附素 (hpaA)和霍乱毒素B亚单位 (ctxB)融合基因的原核表达载体 ,诱导表达并进行纯化。方法　用PCR扩增hpaA和ctxB两个目的基因片段 ,克隆至同一pQE 30表达载体中 ,构建含双基因的表达质粒pQE hct,转化E .coliDH5α ,经IPTG诱导表达融合蛋白HCT ;经Westernblot分析其免疫原性 ,采用镍离子柱进行纯化。结果　经测序HCT融合基因片段由 116 1bp组成 ,为编码 387个氨基酸残基的多肽。经SDS PAGE分析相对分子质量约为 4 0 0 0 0。可溶性蛋白占菌体总蛋白的 2 5 %以上 ,经亲和层析后可获得纯度为 92 %以上的重组融合蛋白。经Westernblot检测可被Hp全菌抗血清和CT抗血清识别。结论　已成功构建融合蛋白HCT的原核表达载体并能高效表达 ,为研制Hp口服疫苗提供依据