应用反相HPLC法测定生物制品中苯酚含量

目的　采用反相高效液相色谱法测定 3种生物制品中苯酚含量。方法　以C18化学键合硅胶为固定相 ,以乙腈 /水 (70∶30 ,V/V)为流动相 ,UV检测波长 2 78nm进行测定。结果　平均回收率为 98. 5 % (n =6 ) ,3种生物制品 6次独立测定的相对标准偏差分别为伤寒ViRSD =0 . 77% ,PPDRSD =1 6. 1% ,气管炎疫苗RSD =1 4. 4 % ,苯酚在 0 . 0 5～ 0 . 5mg/ml范围内 ,浓度与吸收面积呈良好的线性关系。结论　本法操作简单 ,结果准确 ,重复性好 ,可用于实际检测分析。     

螨变应原制品的质量控制及标准化研究进展

螨变应原制品是以螨虫培养物为原材料制备而成的生物制品,用于螨虫过敏症的体内诊断和脱敏治疗。螨变应原提取物制备过程和标准化方法对制品质量和效力指标均有重要影响。质量稳定的螨变应原制品是脱敏治疗取得成功的关键。本文对螨变应原制品生产及质量控制关键参数进行综述,以期为相关产品的研究和质量控制提供参考。     

高效液相色谱法测定磺化酚醛树脂中游离苯酚含量

本文主要研究了应用高效液相色谱仪准确测定磺化酚醛树脂在生产过程中产生的游离苯酚含量的方法.采用的实验条件主要有:空间排阻凝胶色谱柱(Sephadex G-10),20℃柱温和0.01mol/L的氢氧化钠流动相,其中流动速度为0.5ml/min,流动时间为30min.检测器根据其中各种组分的不同紫外吸收特性来区分磺化酚醛树脂产品和游离苯酚.在以上条件下,实验有效分离了磺化酚醛树脂和其中的游离苯酚,本方法可以作为磺化酚醛树脂工业生产中控制产品反应程度的有效方法之一.     

螨变应原点刺制品生物活性测定方法

目的探讨以荧光酶联免疫竞争抑制法(简称Uni CAP法)代替放射性吸附抑制试验(radioallergosorbent test,RAST)测定螨变应原点刺制品生物活性的可行性。方法分别将螨变应原皮肤点刺制品中屋尘螨、粉尘螨点刺液及相应参考品进行系列稀释后,分别与等体积尘螨阳性血清混合,并设阴性对照及100%抑制对照。分别采用γ放射免疫计数器(RAST法)和Immuno CAP 100E全自动过敏原分析仪(Uni CAP法)测定特异性Ig E(s Ig E)浓度,计算点刺样品的生物活性。结果采用Uni CAP法测定结果的RSD值均低于20%。粉尘螨点刺液用两种方法测定的结果基本一致,而屋尘螨点刺液的结果相差较大,但均在标准范围内。结论以Uni CAP法替代RAST法测定点刺液活性具有可行性,可缩短制品的检验时限,并减少了对操作人员及环境的危害。     

检测螨变应原注射液中铝含量的电感耦合等离子体质谱法的建立及验证

目的建立电感耦合等离子体质谱(inductively coupled plasma-mass spectrometry,ICP-MS)法测定螨变应原注射液中的铝含量,并进行验证及初步应用。方法样品经微波消解后,采用ICP-MS法测定其中的铝含量。确定ICPMS法的线性范围及最低检出限,并进行精密性、重现性、准确性验证。用建立的ICP-MS法检测2批螨变应原注射液样品的铝含量;分别采用建立的ICP-MS法和该制品进口检验标准中的比色法检测5批螨变应原注射液样品的铝含量。结果建立的ICP-MS法的线性范围为0~100 ng/ml,r=0.999 9;最低检出限为0.111 ng/ml;该方法重复检测6次10 ng/ml标准溶液铝含量的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.56%;检测6份样品铝含量的RSD值为1.13%;检测9份样品铝含量的总平均加标回收率为95.7%,RSD值为1.37%。该方法检测2批螨变应原注射液样品中的铝含量,结果均符合其标准要求;建立的ICP-MS法与比色法检测5批螨变应原注射液样品中铝含量的结果基本一致。结论建立了ICP-MS法检测螨变应原注射液中的铝含量,该方法操作简便、快速,精密性、重现性、准确性良好,为螨变应原注射液质量标准的提高奠定了基础。     

四螨嗪的高效液相色谱测定

本文选用反相高效液相色谱法，以苯乙醚为内标物，对四螨嗪进行定量分析。本方法简便、快速、准确，并具有良好的精密度。     

高效液相色谱法测定化妆品中氢醌和苯酚的量

采用甲醇超声提取,高效色谱分离的方法测定化妆品中氢醌和苯酚的含量。较佳色谱条件为:采用AgilentTC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相V(甲醇)∶V(水)=55∶45,流速1.0 mL/min,紫外检测波长λ=280 nm。结果表明,在此条件下氢醌和苯酚的质量浓度与相应的峰面积具有良好的线性关系,两者的线性方程分别为y=23.083ρ 1.049(r=0.999 9);y=12.861ρ 1.062(r=0.999 8),回收率在96.2%~102.8%,方法的RSD≤3.4%。采用保留时间与紫外光谱共同定性,增加了方法的准确性。     

高效液相色谱法测定杀螨隆

杀螨隆由Ｃｉｂａ－ＧｅｉｇｙＡＧ开发,化学名称为１－特丁基－３－（２,６－二异丙基－４－苯氧基苯基）硫脲,为有效的杀虫剂和杀螨剂。其高效液相色谱法国内未见报道。本文采用反相高效液相色谱法,操作简便,定量准确,结果重现性好。１实验部分１．１仪器与试剂１...     

HPLC法测定肺炎球菌多糖疫苗中的苯酚含量

目的建立测定肺炎球菌多糖疫苗中苯酚含量的HPLC法。方法采用Novo-Pak C-18色谱柱(3.9 mm×150 mm,4μm),以甲醇-水(20∶80)为流动相进行洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为271 nm,柱温为25℃,进样量为10μl。对该方法的适用性、专属性、精密度、重现性、稳定性、准确性进行验证,并确定该方法的线性范围及定量限。用建立的方法检测6批23价肺炎球菌多糖疫苗中苯酚含量,并与溴量滴定法进行比较。结果苯酚浓度在0.031 25~0.500 2 mg/ml范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r=1.000),定量限为0.31μg/ml;供试品溶液的色谱峰与苯酚对照品溶液的主峰保留时间均约在4.5 min;苯酚对照品溶液连续进样6次,峰面积相对标准偏差(RSD)为0.09%,保留时间的RSD为0.02%;6份同1批供试品溶液中苯酚含量的均值为2.42 mg/ml,RSD为0.48%;同1份供试品溶液室温下放置,0~24 h测定12次,保留时间均值为4.485,RSD为0.53%,峰面积平均值为1 037 336,RSD为0.29%;9份加标供试品溶液的平均回收率为99.63%,RSD为1.18%。6批23价肺炎球菌多糖疫苗中苯酚含量的两种方法检测结果基本一致。结论建立的HPLC法操作简便,专属性、精密度、准确度、重现性、稳定性好,可对23价肺炎球菌多糖疫苗中的苯酚进行准确定量。     

屋尘螨变应原制品中铝含量微波消解-电感耦合等离子体原子发射光谱检测方法的建立

目的建立微波消解-电感耦合等离子体原子发射光谱(inductively coupled plasma atomic emission spectrometry,ICP-AES)法检测屋尘螨变应原制品中铝含量,并进行验证。方法采用微波消解法对样品进行消解处理后,用ICPAES法测定样品中的铝含量,并对建立的方法进行线性范围、精密度、准确性验证,确定最低检出限和最低定量限;用建立的方法检测2批次屋尘螨变应原制剂中的铝含量。结果该方法铝元素浓度在0~0.30μg/ml范围内与分析线的响应值具有良好的线性关系(r=0.999 552);0.10μg/ml标准品溶液连续进样11次,铝含量平均值为0.100 2μg/ml,相对标准偏差(RSD)为1.2%;6份样品溶液的铝含量平均值为10.90μg/ml,RSD为1.4%;3份样品溶液的平均加标回收率为95.5%,RSD为4.9%;该方法最低检出限为0.008 5μg/ml,最低定量限为0.028μg/ml。2批次共5份屋尘螨变应原制剂样品中铝含量测定结果均符合该企业注册标准中铝含量标准要求。结论微波消解法对样品消解完全,采用微波消解-ICP-AES法可以对屋尘螨变应原制品中的铝含量进行准确定量,该方法操作简便,灵敏度、精密度、准确度良好。     

屋尘螨变应原制剂外观异常对其质量的影响

目的分析屋尘螨变应原制剂外观异常对其质量的影响。方法依据进口药品注册标准(JS20130104)对1批(T6469)屋尘螨变应原制剂进行全面质量检定,同时与检定合格样品(A3016、A3064及A3110批)进行相应比对,Western blot鉴定主要变应原组分,纳米粒径颗粒分析仪检测制剂中铝佐剂-蛋白吸附物的中值粒径(D50)。选取检定合格样品进行冷冻模拟验证,观察低温冷冻对制剂外观性状的影响。结果 T6469批制剂外观不均一(外观性状异常与正常样品),混悬液浊度有差异,部分样品出现摇不散的贴壁颗粒,外观性状异常样品与正常样品比较,浑浊度降低,沉降速度增快,铝佐剂吸附物液面高度明显低于外观正常样品。经检定,T6469、A3016、A3064及A3110批制剂pH、铝含量、苯酚含量及游离上清活性均在质量标准范围内,在相对分子质量25 000及14 000处均出现特异性条带,但T6469批外观性状异常样品条带变弱。T6469外观性状异常与正常样品之间D50差异有统计学意义(P <0. 05);检定合格样品冻存前后D50差异有统计学意义(P <0. 05)。T6469批外观性...     

尘螨变应原治疗性产品鉴别试验解吸附方法的建立

目的建立尘螨变应原治疗性产品鉴别试验的解吸附方法。方法选取两个厂家的尘螨变应原治疗性产品,分别用1 ml 20%柠檬酸溶液、0.4 mol/L磷酸盐溶液和0.5 mol/L EDTA-Na溶液解吸附后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴别试验。将两个厂家各3批尘螨变应原治疗性产品于常温及37℃下分别解吸附16和24 h,进行Western blot鉴别试验。结果两个厂家的制品经3种溶液解吸附后,SDS-PAGE结果均可见相对分子质量约28 000及15 000的组分Ⅰ丝氨酸蛋白酶和组分ⅡNPC家族蛋白目的条带,Western blot结果可见同样大小的与鼠抗螨变应原组分Ⅰ、Ⅱ单克隆抗体特异性结合的蛋白条带,而未解吸附的制品未检测到以上目的条带。3批制品的Western blot鉴定结果相近,表明两种解吸附温度及时间对鉴别试验的结果影响不大。结论尘螨变应原治疗性产品需经解吸附后才能进行鉴别试验,本研究建立的解吸附方法可有效稳定地对制品进行解吸附。     

尘螨制品抗原活性检定用血清国家标准品的建立

目的建立尘螨制品抗原活性检定用血清国家标准品。方法根据过敏患者临床症状和血清学检测筛选并确认尘螨过敏患者,收集符合入选标准的患者血清并混合,采用ImmunoCAP实验检测该混合血清中针对屋尘螨和粉尘螨特异性IgE抗体含量,经协作标定最终确定混合血清的特异性IgE数值。将血清标准品和企业内参血清分别与该企业样品混合并孵育过夜,经ImmunoCAP实验检测屋尘螨和粉尘螨变应原制剂活性。结果该血清国家标准品中,针对屋尘螨的特异性IgE含量为247.4 KUA/L,针对粉尘螨的特异性IgE含量为243.4 KUA/L。血清国家标准品与企业内参血清在检测结果上具有较高的一致率。结论建立了我国第1批尘螨制品抗原活性检定用血清国家标准品,已被国家药品标准物质委员会批准正式使用,批号为290002-201601。     

人凝血/抗凝血因子类产品蛋白含量快速检测方法的建立及验证

目的建立人凝血因子Ⅷ、人凝血因子Ⅸ、人凝血酶、人抗凝血酶Ⅲ蛋白含量Lowry快速检测法,并进行验证。方法采用《中国药典》三部(2010版)Lowry法检测因子类产品的蛋白含量,通过耐用性研究降低辅料对方法的干扰,优化Lowry检测方法,并对方法的专属性、线性及范围、准确度、精密度进行验证。结果不同辅料对Lowry法的干扰程度不同,人凝血因子Ⅷ、人凝血因子Ⅸ、人凝血酶、人抗凝血酶Ⅲ样品分别稀释20、10、80、160倍,可明显降低辅料的影响;Lowry法与凯氏定氮法相关性良好,方法线性R0.99,其准确度、精密度均良好。结论 Lowry法测定人凝血因子Ⅷ、人凝血因子Ⅸ、人凝血酶、人抗凝血酶Ⅲ蛋白含量操作简便、快速、准确,可用于产品的质量控制。     

生物制品中残留甲醛含量衍生-气相色谱检测方法的建立及初步应用

目的建立生物制品中残留甲醛含量衍生-气相色谱检测方法,并进行验证及初步应用。方法采用液体进样方式,毛细管色谱柱(SH-Rxi-5MS,30 m×0. 25 mm×0. 25μm)分离,FID检测器检测,外标法定量,测定样品中残留甲醛含量。进样前,对照品及样品使用2,4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenyl-hydrazine,2,4-DNPH)衍生处理,考察不同衍生条件(包括衍生时间、衍生温度和提取溶剂等)对甲醛衍生及提取效率的影响。色谱条件:初始温度为150℃,保持1 min;以20℃/min的速率升温至250℃,保持10 min;检测器温度为250℃,进样口温度为250℃,分流比为10∶1;载气为N2;进样量为1μL。对建立的方法进行重复性、准确性验证及初步应用。结果游离甲醛质量浓度在1～100μg/mL范围内时,浓度与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为A=3 789. 7 C-1 030. 2,相关系数为0. 999 8。用建立的方法重复检测甲醛标准液6次,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1. 73%;在百白破疫苗样品中加...