黑曲霉果胶酯酶固定化前后酶学性质比较研究

采用明胶加戊二醛包埋法和蛋壳微粒吸附法分别对黑曲霉果胶酯酶进行了固定化,并研究了两种固定化方法制备得到的固定化黑曲霉果胶酯酶的酶学性质。结果表明,通过固定化,黑曲霉果胶酯酶的各项酶学性质指标都得到了改善,明胶固定化果胶酯酶和蛋壳固定化果胶酯酶的酶活回收率分别为46.3%和42.2%,而且与游离果胶酯酶相比,两种固定化酶的最适温度都由40℃上升到45℃,最适pH由4.4下降到4.0和4.2,Km值0.0113%由下降到0.0033%和0.0027%。      

黑曲霉果胶酯酶固定化前后酶学性质比较研究

采用明胶加戊二醛包埋法和蛋壳微粒吸附法分别对黑曲霉果胶酯酶进行了固定化,并研究了两种固定化方法制备得到的固定化黑曲霉果胶酯酶的酶学性质.结果表明,通过固定化,黑曲霉果胶酯酶的各项酶学性质指标都得到了改善,明胶固定化果胶酯酶和蛋壳固定化果胶酯酶的酶活回收率分别为46.3%和42.2%,而且与游离果胶酯酶相比,两种固定化酶的最适温度都由40℃上升到45℃,最适pH由4.4下降到4.0和4.2,Km值0.0113%由下降到0.0033%和0.0027%.     

黑曲霉果胶酯酶的研究

黑曲霉(As3.3324)用高甲氧基果胶诱导,当接种量为3×103个孢子,30℃恒温培养,转速90r/min,液体培养4d时果胶酯酶的活力最大,为90.2U/mL培养基。该果胶酯酶能将高甲氧基果胶的酯化度从64.54%降低到45.70%。经果胶酯酶作用后低甲氧基果胶的粘度为0.006Pa·s,与同样条件处理的高甲氧基果胶的粘度0.007Pa·s相差不大。      

黑曲霉果胶酯酶的研究

黑曲霉(As3.3324)用高甲氧基果胶诱导,当接种量为3×103个孢子,30℃恒温培养,转速90r/min,液体培养4d时果胶酯酶的活力最大,为90.2U/mL培养基。该果胶酯酶能将高甲氧基果胶的酯化度从64.54%降低到45.70%。经果胶酯酶作用后低甲氧基果胶的粘度为0.006Pa·s,与同样条件处理的高甲氧基果胶的粘度0.007Pa·s相差不大。     

黑曲霉产果胶酯酶发酵条件的研究

比较了黑曲霉(AS3.350)以有机和无机氮为氮源液态发酵制备果胶酯酶的效果,并对有机氮源的液态发酵条件进行优化。结果表明,以有机氮为氮源的发酵效果优于无机氮,黑曲霉(AS3.350)接种量0.3mL(3×103个孢子),转速90r/min,30℃发酵4d时,果胶酯酶活力高达93.4U/mL培养基。     

黑曲霉YY-22产酸性果胶酶的分离纯化

本文研究了从黑曲霉YY-22发酵产酸性果胶酶粗酶液中分离出较高纯度果胶裂解酶(PL)、聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶酯酶(PE)的方法,同时考察了主要组分PL在各分离阶段的纯化效果。依次采用硫酸铵盐析、疏水相互作用层析及离子交换层析对果胶酶PG、PE、PL进行分离。结果表明:果胶酶粗酶液中硫酸铵饱和浓度为65%时,沉淀中PL回收率最大,部分杂蛋白在盐析过程中被分离出来;沉淀复溶后经Phenyl-Sepharose FF疏水相互作用层析首先分离出PE活性组分,又经Q-Sepharose HP强阴离子交换层析分别得到PG和PL活性组分。果胶酶粗酶液中主要组分PL经三步纯化后的比活力达到79.37 U/mg蛋白,纯化倍数为13.30,活力回收为33.05%。较高纯度PL、PG、PE的获得,为进一步研究酶的基本性质及其在果蔬加工和葡萄酒中的应用奠定基础。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究

利用硫酸铵盐析、季氨乙基-琼脂糖凝胶FF（Q-Sepharose FF）离子交换层析、苯基-琼脂糖凝胶6 FF（Phenyl-Sepharose 6 FF）疏水层析和丁基-琼脂糖凝胶HP（Butyl-Sepharose HP）疏水层析对黑曲霉来源β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,采用十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定其分子质量,并对其酶学性质进行研究。结果表明,经分离纯化后得到分子质量约为116 kDa的β-葡萄糖苷酶,纯化倍数达到50.39倍,回收率为4.65%,比酶活为103.80 U/mg,该β-葡萄糖苷酶的最适反应温度为60 ℃,最适反应pH值为5.0,在温度30～50 ℃,pH 2.0～8.0之间具有较好的稳定性。     

黑曲霉496-1菌株植酸酶的分离纯化及酶学性质

黑曲霉(A.niger)496 1菌株所产胞外植酸酶,经透析浓缩、DEAE cellulose离子交换层析及SephadexG 75,Sephacryl100凝胶过滤,获得了2个植酸酶,其相对分子质量分别为64200及41100.该2个植酸酶的最适pH分别为6.0和3.0,最适温度分别为55℃和40℃.初步确定一个是中性植酸酶,另一个为酸性植酸酶.     

苹果果胶酯酶提取及其酶学性质探究

以国光苹果为原料,通过单因素和正交实验考察了Na Cl浓度、p H、提取温度和提取时间对苹果果胶酯酶酶活的影响,确定了苹果果胶酯酶最佳提取工艺参数,并研究了苹果果胶酯酶的酶学性质。结果表明:在Na Cl浓度为2.5mol/L、p H为8.5、提取温度30℃和提取时间为27h时,苹果果胶酯酶的酶活达到0.98μmol/min·m L;该酶反应的最适温度为40℃,热稳定性较差,最适p H为11;金属离子中Ca2+对果胶酯酶有显著的激活作用,Na+、K+和Fe2+也有一定的激活作用,而Ba2+、Mn2+和EDTA对果胶酯酶有抑制作用。      

黑曲霉液态发酵产柚苷酶的分离纯化及其性质研究

本文针对黑曲霉液态发酵所产柚苷酶的分离纯化工艺及其酶学性质进行研究。将黑曲霉液态发酵所产酶液,依次通过30%~70%硫酸铵盐析、膜透析和DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析后得到高纯度柚苷酶。经SDS-PAGE凝胶电泳仅得到一条清晰条带,分子量约为65.10 ku。纯化获得的柚苷酶比酶活可达6932.54 U/mg,纯化倍数和酶活回收率分别为13.82倍和13.30%,并且能有效水解柚皮苷。进一步研究发现,该酶的最适反应p H为4.5,最适作用温度为50℃,在20℃~50℃及p H 3.0~6.0范围内有良好的稳定性。在一定浓度范围内,K+、Ca2+和Na+对柚苷酶活性有促进作用,而Fe3+、SDS和EDTA-Na2对其活性有明显的抑制作用。本研究为深入理解柚苷酶分离纯化过程,明确其酶学性质,进一步探索柚苷酶应用于天然活性产物生物转化过程的相关机制提供了基础数据,具有非常重要的科学意义和潜在的应用价值。     

黑曲霉SL2-111固态发酵生产聚半乳糖醛酸酶

以麸皮为主要原料，采用黑曲霉(Aspergillus niger)诱变菌株SL2—111进行聚半乳糖醛酸酶固态发酵，培养物最高酶活力可达到2695u／g(鲜曲)。产酶最适培养基为：麸皮15g，柚皮粉1．5g，(NH4)2SO4 0．8g，Ca—Cl2 0.075g。最佳产酶条件为：28℃，pH6．0，培养72h。成曲的最佳浸提条件为：以0．1mol／L，pH4．0柠檬酸柠檬酸钠缓冲液为浸提剂，在30℃下浸提5h。     

Partial Purification and Characterization of Sulfhydryl Oxidase from Aspergillus niger

ABSTRACT: Sulfhydryl oxidase (SOX) was purified after extraction and the contaminating catalase activity was completely eliminated in the last chromatography step. A yield of 25% was obtained with a purification factor higher than 300. The isoelectric point was 3.7 and the molecular weight 110 kDa. SOX exhibited an optimal activity at pH 5.6 and its efficiency (V_mapp/K_mapp) increased from pH 4.5 to 6.5. At pH 5.6, the K_mappvalues were 0.5, 2.5, 10.5, 110, and 450 mM for GSH, cysteine, g-glu-cys, dithiothreitol, and homocysteine, respectively, and the V_mappvalues represented 2, 34, 24, and 44% of the V_maPPvalue found for GSH, respectively. Cys-gly was not oxidized by SOX. In the presence of GSH, SOX is able to catalyze the oxidation of cysteine and cys-gly at a significant rate.     

黑曲霉N5-5单宁酶的纯化及酶学性质测定

采用中空纤维膜超滤和葡聚糖凝胶层析相结合的方法对黑曲霉N5-5单宁酶进行纯化,然后对纯酶性质进行测定。结果显示,黑曲霉N5-5单宁酶用该方法纯化后,可纯化近20倍,酶活力可回收23.30%。对纯酶作十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,可知黑曲霉N5-5单宁酶为分子质量64.2 k D的单肽链蛋白。纯酶的酶促反应最适温度为45℃,且在25~45℃范围内热稳定性良好;酶促反应最适p H值为5.0,且在p H 5.0~5.5范围内酸碱稳定性良好。另外,反应动力学测定结果表明,该酶对底物没食子酸丙酯的米氏常数K_m为0.916 mmol/L,最大反应速率vmax为0.877 mmol/(L·min)。     

Purification and Properties of Apple Pectinesterase

Pectinesterase from apple was separated into two fractions by chromatography on Sephadex G-75. The major pectinesterase was purified by cation-exchange chromatography on CM-Sephadex C-50. It had a molecular mass of 36 kDa, and isoelectric point of about 9, similar to one of the major pectin-esterases of lemon. The enzyme required the presence of cations for optimum activity and was completely inactive at temperatures above 75°C. Although the major pectinesterase had no effect on the cloud stability of apple juice, a fraction containing a minor pectinesterase caused cloud clarification.     

一株酸性糖化酶的分离纯化及酶学性质研究

从土壤中筛选得到一株产酸性糖化酶的黑曲霉ASP-S21,粗酶液通过（NH4）2s04沉淀、Sepharose HP阴离子交换层析、SephacrylS-200层析柱分离纯化,SDS-PAGE电泳测定其分子量为120kDa。该酶最适作用温度为65℃;酶的最适反应pH值为4．0;在pH2．2-7．6之间,具有较好的酸稳定性;酶的Km值为0．94mg／mL,Vmax=142．43mol（Glu）／min-L。Cu2＋和Co2＋对酶活有较强的促进作用,10mM的Cu2镟酶活力提高到129％,Fe^3＋对酶催化活力抑制作用较强。该酶且具有部分降解生淀粉的能力,在pH4．0,50℃反应1h,生淀粉酶活力为0．39U,RDA值为4．57％。得到的黑曲霉ASP-S21酸性糖化酶,产生的糖化酶活力高、耐酸稳定性好,酶争陛质符合淀粉糖化工业化过程中对酶的要求,具有良好的研究前景。     

黑曲霉T3-5-1高活力单宁酶的制备及其性质研究

用黑曲霉T3-5-1生产单宁酶,将粗酶液分别采用硫酸铵沉淀法和透析法初步纯化,结果表明,使用截留分子量12 kDa的透析袋对粗酶液透析后的比活力(3108.58 U/mg),高于硫酸铵沉淀法处理后的比活力(2939.38 U/mg)。然后对透析样品用Sephadex G-100葡聚糖凝胶层析法进一步纯化,得到纯度较高的单宁酶,通过与单宁酶A及单宁酶B进行GPC色谱图比较发现,其分子量基本一致,但黑曲霉T3-5-1单宁酶的比活力(5304.78 U/mg),远高于单宁酶A(1788.15 U/mg)和单宁酶B(935.07 U/mg)的比活力。该单宁酶性质研究表明:其最适pH值为5.0,最适反应温度为40℃,且其酸碱稳定性和热稳定性良好。当底物为没食子酸丙酯时,最大酶促反应速率Vmax为81.96μmol/(L·min),米氏常数Km为0.85 mmol/L。最后考察了该单宁酶的催化合成能力,结果表明,在AOT异辛烷反胶束体系中,该单宁酶可催化没食子酸和丙醇反应合成没食子酸丙酯。     

Purification and Characterization of a Novel Protopectin-Solubilizing Enzyme from Aspergillus niger Z-25

A mutant, Aspergillus niger Z-25 derived from A. niger XZ-131 with N⁺ supplementation, produced a protopectin-solubilizing enzyme (protopectinase). The enzyme was purified to homogeneity by a procedure involving ammonium sulfate fractionation and gel chromatographies on DEAE-Sephadex A-50 and Sephadex G-100 columns. The molecular weight of the protopectinase was estimated at 68.4 KD by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The enzyme was stable from pH 3.0 to 7.0 and up to 60°C. The optimum pH and temperature for enzyme activity was 4.0 and 50°C, respectively. The purified enzyme had 268-U/mL PPase (protopectinase) activity on citrus protopectin, and also showed 100-U/mL PGase (polygalacturonase) activity, which catalyzed the hydrolysis of polygalacturonic acid. The Km value for protopectin was 0.215 mg/mL, while the Km value for polygalacturonic acid was 39.09 mg/ml. The PPase/PGase q-value was 2.68, more than 0.5. Therefore the enzyme was considered a novel pectinase and classified as protopectinase.