盐生海芦笋来源真菌Penicillium stoloniferum发酵产物抗肿瘤活性成分研究

采用活性追踪的方法,对一株盐生海芦笋来源真菌Penicillium stoloniferum发酵产物中的抗肿瘤活性成分进行分离和鉴定。利用常压硅胶柱层析、Sephedex LH-20、半制备HPLC等分离方法从中分离得到8个单体化合物,通过理化性质分析及波谱学方法鉴定其化学结构分别为：麦角甾-7,9(11),22-三烯-3-醇、麦角固醇、菠菜甾醇、5α,8α-环二氧-(22E,24R)-23-甲基麦角甾-6,22-二烯-3β-醇、色氨酸-苯丙氨酸-环二肽、苯丙氨酸、邻苯二甲酸正丁酯、邻苯二甲酸异丁酯;以SRB法评价化合物的抗肿瘤活性,5α,8α-环二氧-(22E、24R)-23-甲基麦角甾-6,22-二烯-3β-醇、邻苯二甲酸正丁酯、邻苯二甲酸异丁酯对小鼠乳腺癌P388细胞具有强的细胞毒活性,IC50值分别为14、34、46μg/mL,其他化合物没有活性。     

罗汉果内生真菌的分离及其发酵产物的抗氧化活性研究

为探究罗汉果内生真菌发酵产物的化学成分及其抗氧化活性,从罗汉果内生真菌中筛选8株菌株的代谢产物进行化学成分试验,用DPPH·清除法和·OH清除法测定发酵产物的体外抗氧化活性。结果表明,8株罗汉果内生真菌发酵产物通过化学成分定性试验,推测可能含有蛋白质、多糖、有机酸、黄酮和醌类等物质。在供试液质量浓度为1 mg/mL时,其中菌株F5发酵液对DPPH·的清除率大小顺序为乙酸乙酯萃取相（96.83%）＞VC（95.77%）＞氯仿相（95.24%）;菌株F5发酵液对·OH的清除率大小顺序为VC（99.36%）＞原液（73.56%）＞水相（61.98%）,表明罗汉果内生真菌发酵产物具有较强的抗氧化作用,并且抗氧化的成分极性较大。     

产油脂真菌PJX-29抗氧化活性成分研究

对一株红树林来源的产油脂真菌PJX-29发酵产物中的抗氧化成分进行分离和鉴定。利用溶剂萃取、硅胶柱色谱及制备HPLC等分离手段从发酵产物中分离得到2个甘油酯类化合物和其他5个化合物,通过理化性质分析及波谱学方法鉴定其化学结构分别为:十五碳单甘油酯,9″,12″-十七碳二烯酸,十六烷基甘油酯,6-戊基-α-吡喃酮4,,6-二羟基-9,10-二甲基苯乙酮,双(8-8’-7羟基-4-甲氧基-5-甲基香豆素),对羟基苯甲酸6,-氨基苯甲醛,并以DPPH法评价了化合物的抗氧化活性,结果表明化合物1,化合物2和化合物6具有较强的抗氧化活性,其IC50分别为:(11.38±0.61)(、9.33±0.80)和(11.12±1.01)μg/mL。     

头孢霉AL031真菌固体发酵产物抗氧化、抑菌活性研究

基于原有固体发酵条件,以提取物清除DPPH自由基的能力为评价指标,探讨头孢霉AL031真菌固体发酵的最佳时间和次生代谢产物的提取条件。用DPPH法和光敏化合物微生物法测定其次生代谢产物的抗氧化活性,微生物纸片法测定其抑菌活性。结果表明:头孢霉AL031真菌固体发酵的最佳培养时间为9d,最佳提取条件为以乙酸乙酯浸泡,其提取物对DPPH自由基的EC50为5.84μg/mL,光敏化合物微生物法亦证明其具有良好的抗氧化活性。抑菌实验表明头孢霉AL031真菌的次生代谢产物具有广谱抑菌作用。     

头孢霉AL031真菌固体发酵产物抗氧化、抑菌活性研究

基于原有固体发酵条件,以提取物清除DPPH自由基的能力为评价指标,探讨头孢霉AL031真菌固体发酵的最佳时间和次生代谢产物的提取条件。用DPPH法和光敏化合物微生物法测定其次生代谢产物的抗氧化活性,微生物纸片法测定其抑菌活性。结果表明:头孢霉AL031真菌固体发酵的最佳培养时间为9d,最佳提取条件为以乙酸乙酯浸泡,其提取物对DPPH自由基的EC50为5.84μg/mL,光敏化合物微生物法亦证明其具有良好的抗氧化活性。抑菌实验表明头孢霉AL031真菌的次生代谢产物具有广谱抑菌作用。      

分子生物学与形态学相结合鉴定盐生海芦笋内生真菌Salicorn 15

从盐生海芦笋中分离出一株内生真菌(Salicorn 15),采用分子生物学与形态学观察相结合对其鉴定。提取该菌的基因组DNA后分别对其18S rDNA和ITS区域进行PCR扩增并进行单克隆测序分析,在NCBI上进行同源性分析,进而构建系统发育树,再结合形态学观察,将菌株Salicorn 15鉴定为层出镰刀菌Fusarium proliferatum。     

盐生海芦笋抗菌内生细菌的筛选与鉴定

以抗菌活性为指标,从野生海芦笋中筛选与鉴定具有抗菌活性的内生细菌。采用平板分离与斜面纯化的方法,从海芦笋中分离到13株内生细菌,经过对8株病原菌抗菌活性测试,菌株HLS-7和HLS-8对大肠杆菌(Escherichia coli)、金色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)和白假丝酵母(Candida albicans)均显示了较强的抑制活性,其抑菌圈直径均10 mm;对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和肺炎克雷伯菌(Klebsiella penumoniae)均显示了中等抗菌活性,表现出广谱的抑菌活性。PCR扩增这2株菌的16S r DNA区域,单克隆后测序进行同源性分析,构建系统发育树,结合形态学观察和生理生化实验,将菌株HLS-7和HLS-8分别鉴定庆生芽孢杆菌(Bacillus qingshengii)和甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。通过电喷雾质谱分析这2株菌的发酵产物,结果显示,菌株HLS-7可产生脂肽类化合物Fenycin和Iturin,菌株HLS-8可产生脂肽类化合物Iturin,提示这2株菌的抗菌活性可能源于脂肽化合物。     

基于PKS Ⅰ基因海芦笋内生真菌及其次级代谢产物筛选鉴定

一般研究内生真菌的方法都无法预测内生真菌次级代谢产物的类型,本实验以Ⅰ型聚酮合成酶（polyketide synthase,PKS）基因为探针,野生海芦笋（Salicornia bigelovii Torr.）为原料,筛选出菌株Salicorn 3,并对其发酵产物中的化合物进行分离鉴定。结果表明：经过ITS1-5.8S-ITS4 rDNA同源序列鉴定的菌株Salicorn 3为圆弧青霉（Penicillium cyclopium）,通过系统发育树分析并结合文献数据比较,表明该菌株具有产生聚酮类化合物的潜力。通过常压硅胶柱层析和Sephadex LH-20柱层析从其发酵产物中分离得到两个单体化合物,采用核磁共振和电喷雾质谱鉴定其化学结构分别为二酮哌嗪生物碱和脑苷脂C。     

18S rDNA和ITS相结合鉴定一株盐生海芦笋内生真菌的研究

对分离自盐生海芦笋的一株代号为Salicorn 8的真菌进行鉴定,提取基因组DNA后分别PCR扩增18S rDNA和ITS区域,基因测序并进行同源性分析,构建ITS基因系统发育树,结合形态学分析,将该菌鉴定为木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)。     

海芦笋提取物体外抗氧化活性的研究

通过测定海芦笋水提物、醇提物、海芦笋粗多糖和精多糖还原能力及对羟自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O2·)的清除能力,研究海芦笋提取物的抗氧化活性。结果表明：海芦笋水提物、醇提物和多糖对·OH 都有较强清除作用,但清除能力均低于对照物VC;在相同浓度下,各提取物的还原能力和对·OH 的清除能力呈相同趋势,均是海芦笋水提物较醇提物强,粗多糖较精多糖强。但海芦笋水提物和多糖在实验所选浓度范围内,对邻苯三酚自氧化没有抑制作用,而醇提物显示出一定抑制活性。     

海蓬子籽油亚油酸共轭化产物的抗肿瘤作用

目的:探讨海蓬子籽油亚油酸共轭化产物体外抗肿瘤活性。方法:以含有73.52%亚油酸的海蓬子籽油为原料,利用化学法转化制备共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA),采用国标法和小鼠急性毒性实验对共轭化油进行理化指标分析和急性毒性评价,MTT法检测共轭化油对人肿瘤细胞的生长抑制作用。结果:共轭化油中c9,t11-CLA和t10,c12-CLA含量为68.75%,理化指标符合相关产品要求。小鼠急性毒性LD50>20g/kg,属无毒级。共轭化油对食道癌EC109细胞和乳腺癌HTB-22细胞均有较强抑制作用,对宫颈癌HeLa细胞无抑制活性,对正常人胚肾细胞293T无毒性,对EC109细胞的IC50为111.9μg/mL。结论:利用海蓬子籽油转化的共轭亚油酸产物对人肿瘤细胞有较强的生长抑制作用,但其作用具有选择性。     

铁皮石斛抗肿瘤活性成分的探究

为了探究铁皮石斛中的抗肿瘤活性成分,本研究采用乙酸乙酯、95%乙醇、水三种不同极性的溶剂依次对铁皮石斛茎的干燥粉末进行了提取,初步得到了三种提取物;初提取物在MTT细胞增殖检测结果的指引下,结合硅胶柱层析、TLC薄层分析和凝胶柱层析进行分离纯化,最终筛选出具有强抗肿瘤活性的组分。结果显示乙酸乙酯提取物经分离纯化后得到了最强抗肿瘤活性成分,其对肝癌细胞HepG-2、胃癌细胞SGC-7901和乳腺癌细胞MCF-7的增殖都有明显的抑制效果,半抑制浓度IC50依次为:0.45μg/mL、0.36μg/mL、0.34μg/mL,经波谱学数据鉴定,该化合物为金钗石斛菲醌。金钗石斛菲醌首次分离自金钗石斛,其抗肿瘤功效已经得到证实,并引起了广泛的关注,本研究成果对以铁皮石斛为原料的药品和保健食品的开发具有重要的指导意义。     

海蓬子正丁醇萃取物的体外抗氧化性研究

对海蓬子的正丁醇萃取物,通过硅胶柱层析、葡聚糖凝胶LH-20柱层析、高效液相色谱分离进行纯化,得到一种活性成分SBF;通过LC-MS检测,确定其分子量为802。并对SBF的还原能力、对羟自由基、DPPH自由基的清除能力和对脂质过氧化的抑制能力进行检测,研究其体外抗氧化活性。研究结果表明,SBF具有一定还原能力,对羟自由基、DPPH自由基都有一定的清除能力,但均小于阳性对照VC;SBF对脂质过氧化也具有一定抑制作用,在浓度小于1.2mg/mL时,抑制作用大于VC,在浓度大于1.2mg/mL时,抑制作用小于VC。     

白灵侧耳发酵全液多糖提取及抗肿瘤活性研究

液体发酵白灵侧耳，从发酵全液中提粗多糖，研究其体内抗肿瘤活性。用0.2、0.4、0.8g/kg三个剂量组对荷S180小鼠进行灌胃。结果发现，白灵侧耳发酵全液粗多糖得率为0.97g/100ml，多糖含量为32.9%；低中高三个剂量组对肿瘤的抑制率分别为46.15%、55.42%和58.67%，同时能提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数。白灵侧耳发酵全液多糖具有抗肿瘤活性。     

响应面法优化海蓬子皂苷提取工艺条件与生物活性研究

响应面分析法优化海蓬子皂苷提取工艺,初步鉴定海蓬子皂苷的结构,并探讨其对α-葡萄糖苷酶与胰脂肪 酶的体外抑制活性。海蓬子皂苷最佳提取条件为料液比1∶27（g/mL）、乙醇体积分数62%、超声时间30 min。在此 条件下,海蓬子皂苷的提取量为10.14 mg/g;显色反应和红外光谱初步分析表明,海蓬子皂苷为四环三萜类皂苷; 体外实验表明,经纯化的海蓬子皂苷提取物对α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶均有较强抑制作用,并呈剂量效应,对α-葡 萄糖苷酶、胰脂肪酶的抑制率分别达到68.20%和84.28%。该结果提示海蓬子皂苷可能具有阿卡波糖样的降血糖机 制以及降血脂的功效。