基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法溯源分析云南省肉制品中金黄色葡萄球菌

目的 利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术对云南省肉制品中金黄色葡萄球菌进行溯源。方法 通过MALDI-TOF MS, 主成分分析及聚类分析等方法, 对来源于云南省肉制品的88株金黄色葡萄球菌, 包括耐苯唑西林或敏感金黄色葡萄球菌株(MRSA/MSSA)的进行溯源研究。结果 86株金黄色葡萄球菌可鉴定到种的水平, 2株可鉴定到属的水平。用MALDI-TOF MS鉴定金黄色葡萄球菌与生化和血清学方法的分型高度相关, 聚类分析表明, 88株菌株在距离水平为500的情况下被划分为4个类型, 其中5型同数据库中来自欧美的9株标准菌株亲缘关系最近。88株金黄色葡萄球菌中来源相同地区的菌株MALDI-TOF MS肽指纹图谱相似性较好, 相同类别来源或地区来源的金黄色葡萄球菌菌体蛋白表达更为相似, MRSA和MSSA菌株MALDI-TOF MS肽指纹图谱未观察到显著差异。结论 MALDI-TOF MS是一种快速、高敏感、高通量、高精度的金黄色葡萄球菌鉴定技术, 具有良好的可追溯性。     

基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱的 溶藻弧菌鉴定研究

目的建立快速检测和鉴定溶藻弧菌的方法,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF-MS)和SARAMIS分析软件,对来自水产品中的溶藻弧菌进行了检测和鉴定。方法将从样品中分离得到的可疑菌落于37℃纯化培养24、48、72 h后,分别用微生物API生化鉴定系统和MALDI-TOF-MS方法进行分析鉴定,并对MALDI-TOF-MS鉴定方法的稳定性、准确性和重复性进行初步探讨。结果不同的培养时间,24、48和72 h对MALDI-TOF-MS检测的蛋白质谱图影响较小,鉴定值分别为94.10%,93.90%,92.70%;同时用微生物API-20E生化鉴定试剂盒进行辅助分析鉴定,培养24 h后,鉴定值为97.7%,T值为0.47,但培养72 h后,鉴定值为52.4%,T值为0.15。同一样品点样2次,得到的6张图谱显示出峰位置基本一致。用标准菌株大肠埃希菌ATCC 8739和溶藻弧菌ATCC 17749纯化培养24 h后,鉴定值分别为99.90%和97.60%。结论与传统的生化鉴定方法相比,MALDI-TOF-MS和SARAMIS软件分析方法具有较高的稳定性、重复性和准确性,可以快速、准确地鉴定溶藻弧菌,可用于水产品中溶藻弧菌的高通量、低成本的快速检测鉴定。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法鉴定食品中金黄色葡萄球菌

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对食源性金黄色葡萄球菌的鉴定效果。方法应用MALDI-TOF MS对210株食源性金黄色葡萄球菌进行鉴定,与传统的生化鉴定结果进行比较,并用SPSS19.0软件分析鉴定结果。结果 MALDI-TOF MS将210株金黄色葡萄球菌鉴定到种、属水平分别为98.10%和1.43%,与VITEK 2鉴定方法无差异(P0.05)。结论 MALDI-TOF MS具有简便、快速、准确等优点,适用于对食源性金黄色葡萄球菌进行高通量、低成本的快速鉴定。     

免疫富集联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法测定牛奶、鸡蛋中的沙门氏菌

目的建立免疫富集联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)检测牛奶、鸡蛋中沙门氏菌的方法。方法沙门氏菌经免疫磁珠特异性富集后采用MALDI-TOF MS鉴定,并优化富集过程中的抗体、免疫磁珠添加量以及捕获时间,研究其特异性,并用于实际样品中沙门氏菌的检测。结果富集过程最佳反应条件为:每1 mg磁珠中抗体添加量为250μg,1 mL菌样中免疫磁珠添加量为600μL,捕获时间为30 min,免疫磁珠捕获沙门氏菌具有特异性;用于检测牛奶和鸡蛋中的沙门氏菌时,将浓度为3 CFU/mL的沙门氏菌特异性富集后选择性增菌9h即可被MALDI-TOF MS准确鉴定。结论该方法具有选择性好,特异性高,耗时短,结果准确的优点,为食品中沙门氏菌的检测提供相关参考。     

水产品中溶藻弧菌基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速鉴定方法建立

目的建立水产品中溶藻弧菌的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)的快速鉴定方法。方法以溶藻弧菌标准菌株(CICC 10889)为研究对象,采集不同样品处理方法 (直接涂抹法和甲酸提取法)、激光强度和菌株传代次数的MALDI-TOF MS图谱并加以分析比较,探讨上述因素对方法准确性的影响。将溶藻弧菌标准菌株(CICC 10889)的MALDI-TOF MS图谱主产物(MSP)添加到数据库中,使用36株分离菌株及8株与溶藻弧菌近缘的弧菌标准菌株验证数据库的补充对鉴定结果可信度的影响。结果甲酸提取法处理所得图谱特征峰多、基线平滑、信噪比高,图谱质量优于直接涂抹法;激光强度对MALDI-TOF MS图谱有影响,过高或过低均会导致图谱质量的下降;标准菌株补充数据库后可提高鉴定可信度,分离株的鉴定分值均达到2.300以上;传代次数对鉴定结果没有影响。结论 MALDI-TOF MS方法可将溶藻弧菌准确鉴定到种水平。该方法准确、可靠,可用于溶藻弧菌的快速鉴定。     

副溶血性弧菌MALDI-TOF-MS检测方法的建立与应用

目的:建立快速检测副溶血性弧菌基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测方法。方法:考察培养基、培养时间、培养温度以及样品前处理方法对图谱质量和鉴定结果的影响,对方法的稳定性、重复性进行研究;采集461株副溶血性弧菌食品分离株MALDI-TOF-MS指纹图谱,并对图谱进行分析。结果:采用2%NaCl-TSA培养基,在37℃,24 h条件下培养,可达到强峰值信号,谱图重现性良好,甲酸-乙腈提取法获得的质谱图特征峰多,信噪比高;461株副溶血性弧菌食品分离株有97.6%的菌株鉴定分值大于2.000。结论:本研究建立的副溶血性弧菌MALDI-TOF-MS鉴定方法结果准确,可用于实际检测。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱定性分析啤酒中糖类条件的优化

通过选择不同基质(2,5-二羟基苯甲酸、super DHB、2,4,6-三羟基苯乙酮)和设置不同啤酒样品稀释倍数(从原液到1 000倍稀释),优化了MALDI TOF MS定性分析啤酒中糖类的试验条件。研究结果显示,3种基质中,2,4,6-三羟基苯乙酮应用于MALDI TOF MS对啤酒中糖类表征的能力优于另外两种基质。当以2,4,6-三羟基苯乙酮为基质,啤酒样品稀释10倍时,MALDI TOF MS可达良好的定性分析效果。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在 李斯特菌检测和鉴定中的应用

为建立食品中各种李斯特菌的快速检测和鉴定方法,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对单增李斯特菌、绵羊李斯特菌、英诺克李斯特菌、威尔斯李斯特菌和格氏李斯特菌5种李斯特菌进行检测,并与传统的生化鉴定方法(VITEK 2)和聚合酶链式反应(PCR)方法检测结果进行比较;用不同培养基和不同培养时间培养的单增李斯特菌对该方法进行检测,还对60份人工感染5种李斯特菌的食品样品分别进行MALDI-TOF-MS、PCR以及传统生化方法的检测和鉴定。结果表明：MALDI-TOF-MS能够快速、可靠地区分上述5种李斯特菌,而且具有很好的稳定性和重复性,在检测时间、重复性和准确性方面的总体表现优于传统生化鉴定方法。MALDI-TOF-MS技术适用于对李斯特菌等食源性病原菌进行高通量、低成本的快速鉴定。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法对环境中芽孢杆菌的鉴定及溯源

目的 使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术 (matrix assisted laser desorption lionization-time of flight mass spectrometer, MALDI-TOF MS)，对芽孢杆菌进行快速鉴定和聚类分析，用于研究MALDI-TOF MS对芽孢杆菌溯源的可行性。方法 对实验菌株纯化培养后，使用甲酸提取法提取实验菌株蛋白，并使用MALDI-TOF MS，对22株环境分离菌株和1株标准菌株(CGMCC(B)1.1086)进行鉴定。进一步采集22株实验菌株的蛋白质指纹图谱，使用SARAMIS软件，对实验菌株进行聚类分析。结果 经鉴定，标准菌株(CGMCC(B)1.1086)的鉴定结果可信度为99.9%。22株环境菌均为芽孢杆菌，其中，6株菌鉴定到属水平，16株菌鉴定到种水平。在相似水平为80%的条件下，22株芽孢杆菌分为22个分支。结论 可以使用MALDI-TOF MS对芽孢杆菌进行快速鉴定与分型，对于微生物溯源有重要意义，能够满足食品检测及溯源的需求。     

聚合酶链式反应和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱方法鉴定克罗诺杆菌

目的 采用聚合酶链式反应(PCR)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术快速鉴定克罗诺杆菌的方法,实现对该菌显色培养基上生长的可疑菌落高通量、低成本初筛。方法 通过内转录间隔区(its)基因设计针对克罗诺杆菌的属特异性引物,以7株参考菌株为对照,对2013年国家食品安全污染物监测网上报、初步鉴定为克罗诺杆菌的214株菌株进行复核鉴定。同时随机挑选其中84株菌,采用MALDI-TOF-MS技术和VITEK革兰阴性细菌鉴定卡鉴定。结果 7株参考菌株的PCR结果与对应大小一致,214株待测菌株PCR结果均为阳性。84株菌MALDI-TOF-MS和VITEK鉴定的结果均为克罗诺杆菌,符合率为100%。结论 PCR和MALDI-TOF-MS技术具有高通量、低成本、耗时短等优势,可以实现大量可疑菌落的初筛,为我国克罗诺杆菌的监测和防控提供技术支持。     

MALDI-TOF-MS方法检测、鉴定副溶血性弧菌

目的 应用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术建立快速检测和鉴定副溶血性弧菌的方法。方法 采用副溶血性弧菌标准菌株,在不同的培养基或不同的培养时间进行MALDI-TOF-MS检测,同时对长时间冷冻保存的菌株进行检测,以验证该方法的稳定性和重复性。对不同来源的菌株进行检测,以确认方法的准确性。结果 用PW、TCBS琼脂和弧菌显色培养基等3种培养基,以及分别培养18 h、42 h和72 h的细菌,对该菌的蛋白质谱图影响很小;保存2年的菌株,其MALDI-TOF-MS鉴定分值保持稳定;对来自不同国家和地区的不同来源的菌株都可以得到同样准确的结果。结论 MALDI-TOF-MS方法可以快速、准确地鉴定副溶血性弧菌。因其具有很好的稳定性和重复性,可用于副溶血性弧菌的日常检测。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法分析天然牦牛酸奶中的德氏乳杆菌

目的探索基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)在牦牛酸奶中德氏乳杆菌检测中的应用。方法采用MALDI-TOF MS对分离自天然牦牛酸奶中的德氏乳杆菌进行分析研究。针对10株分离自牦牛酸奶经16S rDNA鉴定的德氏乳杆菌进行质谱分析,根据乳酸菌的特异性特征,设计6种微生物破碎方法和5种微生物蛋白质抽提方法进行正交组合实验,在同一质谱条件下采用加权计算及均方根误差分析的获得变异较低稳定性高的处理方法。在最佳处理组合下采用SARAMIS Premium对德氏乳杆菌进行相关分析。结果实验结果表明在液氮、超声、甲酸处理下德氏乳杆菌在基质解析电离中可产生稳定且丰富的蛋白质峰组,且相关分析较离散,但实验结果可为菌种差异性分析提供理论帮助。结论 MALDI-TOFMS对天然牦牛酸奶中德氏乳杆菌特征性分析具有较强应用价值。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在食源性致病菌鉴定中的研究进展

;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)具有高效、准确、检测速度快等优点。作为近年来发展的新型食源性致病菌鉴定技术,MALDI-TOF MS为食品病原微生物靶标性监测和食品安全事件应急检验提供了一种高效的鉴别技术参考。本文检索了近年来国内外MALDI-TOF MS技术在食源性致病菌检测中的相关研究,综述基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测原理及具体案例,在此基础上分别从参考菌株数据库建设、标准化程序规范等方面对MALDI-TOF MS在食源性致病菌检测领域的研究方向进行展望,以期为后续食品安全检测及快速监管提供技术支持。     

基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法对铜绿假单胞菌的鉴定与聚类分析

目的 建立基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法(matrix assisted laser desorption lonization-time of flight mass spectrometery, MALDI-TOF MS)快速鉴定和聚类分析铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, P. aeruginosa)。方法 将全自动微生物分析仪鉴定为P. aeruginosa的20株分离株和1株标准菌株(CICC 21636)进行MALDI-TOF MS检测。经离线微生物鉴定软件分析, 所有菌株均报告为P. aeruginosa。获取21株 P. aeruginosa的特征蛋白质指纹图谱, 建立命名为Pseudomonas aeruginosa的自建数据库, 并采用 P. aeruginosa标准菌株CICC 21636进行验证。结果 Pseudomonas aeruginosa自建数据库对P. aeruginosa的鉴定结果较设备自带数据库明显提高。而且自建数据库信息基础上, 进一步对21株P. aeruginosa进行聚类分型, 实现了对不同来源P. aeruginosa可能污染源的追溯。结论 作为一种快速、准确、高通量的全新技术手段, MALDI-TOF MS能够实现对P. aeruginosa的特异性快速鉴定, 能满足在公共安全卫生、突发食品安全事件和口岸快速通关方面对P. aeruginosa的快速鉴定需求。     

金黄色葡萄球菌基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱的鉴定与聚类分型

目的 建立基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法(matrix assisted laser desorption lonization-time of flight mass spectrometer, MALDI-TOF MS)快速鉴定金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S. aureus)并自建数据库, 进行聚类分型。方法 基于MALDI-TOF MS技术, 对经全自动微生物分析仪(VITEK2 COMPACT)鉴定为S. aureus的25株分离株和1株标准菌株(ATCC 25923)进行鉴定。并进一步采集26株S. aureus特征性蛋白质指纹图谱, 使用flex Analysis软件进行分析, 汇总成标准图谱并构建本地分离株S. aureus的鉴定数据库, 命名为Staphylococcus aureus。结果 经标准菌株ATCC 25923验证, 自建数据库对S. aureus鉴定结果的可信度较设备自带数据库明显提高, 鉴定分值由2.251提高到了2.845。自建数据库进一步对26株S. aureus进行聚类分型, 在差异水平100时, 24株不同来源S. aureus被聚类成24个分支, 将食品中不同来源分离的S. aureus分为24个型。结论 MALDI-TOF MS作为一种快速、准确、高通量的全新微生物鉴定技术, 实现了对S. aureus的特异性快速鉴定与分型, 能够满足公共安全卫生、突发食品安全事件和口岸快速通关方面的需求。