人心肌肌钙蛋白I的分离纯化

目的制备抗人cTnI单克隆抗体,以便进一步制备AMI诊断制剂。方法用兔骨骼肌Tnc(sT-nC)制备ThC-Sepharose-4B亲和柱,直接从心肌组织中分离提纯人cTnI。结果所提纯的cTnI经SDS-PAGE分析已达电泳纯,其相对分子质量和氨基酸组成与文献报道相符。结论为建立AMI早期诊断试剂奠定了基础。     

家兔肌钙蛋白的分离纯化

目的 分离提纯肌钙蛋白Ｉ（ＴｎＩ）以便制备心肌梗塞诊断试剂。方法 采用离子交换、分子筛、疏水 层析相结合的方法分离纯化兔骨骼肌肌钙蛋白Ｃ（ｓＴｎＣ）．制备ＴｎＧ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱。结果 所提纯的ｓＴ－ ｎＣ,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析已达到电泳纯,经ＵＶ－２５０扫描显示出特异性吸收曲线,证明其含有较多的苯丙氨酸,而不含 色氨酸,进一步证明其纯度。结论 为提纯ＴｎＩ创造了条件。     

牛心肌肌钙蛋白T的提取、纯化及其单克隆抗体的制备

目的提取、纯化牛心肌肌钙蛋白T(Cardiac troponin T,cTnT),并制备其单克隆抗体。方法采用组织匀浆、蛋白层析技术提取、纯化牛cTnT,紫外分光光度法检测其浓度;SDS-PAGE检测其纯度;间接ELISA法检测其反应特性。将纯化的牛cTnT免疫小鼠,进行细胞融合,间接ELSIA法筛选阳性杂交瘤细胞株,采用小鼠体内法制备腹水。结果纯化的两批牛cTnT浓度分别为0.246和0.336 mg/ml;相对分子质量约为37 000,纯度分别为86.02%和93.77%;纯化的cTnT蛋白可与鼠抗牛cT-nT单克隆抗体结合。共获得5株分泌抗牛cTnT单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中,阳性杂交瘤细胞株3B10腹水抗体效价达1∶10 240。结论已成功提取、纯化了牛cTnT,并建立了稳定分泌抗牛cTnT单抗的杂交瘤细胞株,为cTnT检测试剂盒的国产化奠定了基础。     

心肌肌钙蛋白Ⅰ在病毒性心肌炎的诊断和病情观察中的意义

目的探讨肌钙蛋白Ⅰ在病毒性心肌炎的诊断及病情观察方面的意义。方法对95例急性病毒性心肌炎患者进行肌钙蛋白Ⅰ和心肌酶谱的动态分析以及肌钙蛋白Ⅰ与病程关系的分析。结果肌钙蛋白I阳性率为47.4%;肌钙蛋白I阳性率明显高于心肌酶谱各项目阳性率;肌钙蛋白I阳性组1个月的治愈率(占11.1%)显著低于阴性组(占44.0%),肌钙蛋白Ⅰ阳性组3个月的总治愈率(占6.4%)明显低于阴性组(占92.0%)。结论肌钙蛋白I在病毒性心肌炎的诊断和病情观察中具有重要意义。     

血清心肌酶、肌钙蛋白对小儿手足口病的检测及临床意义

目的评价手足口病患儿心肌酶谱和肌钙蛋白改变的临床意义。方法收集我院50例手足口病患儿,检测谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白I(CTNI),并同时检测50例健康小儿作为对照。结果手足口病患儿AST、LDH、CK、CK-MB和CTNI活性均明显高于正常对照组(P<0.05)。结论心肌酶谱和肌钙蛋白可作为HFMD患儿的诊断依据。     

血清肌钙蛋白(CTn)及CK、CK-MB在急性心肌梗塞中的意义

目的了解在急性心梗(AMI)血清肌钙蛋白(CTn)及CK、CK-MB三者的关系。方法CTn为免疫增强比浊法,CK及CK-MB采用速率法;日本Olympus AU-400全自动生化分析仪。结论AMI病人CTn均>2.0ng/ml。血清CK-MB均升高,而CK并非特异性升高。     

人血清载脂蛋白A-Ⅰ的分离纯化及其单克隆抗体的研制

应用密度梯度超离心结合离子交换层析分离提纯人血清载脂蛋白A－1（ApoA-I），经免疫扩散，SDS－PAGE和紫外扫描鉴定，证实其达到电泳纯．以此免疫BALB/c小鼠，应用杂交瘤技术建立了7株分泌抗人ApoA-I的杂交瘤细胞株，并对其免疫学性质进行了研究。上清效价为10－2～10－4，腹水效价为10－6～10－8．除1种MCAb为lgG2a外．其余均为IgG1。经ELISA间接法检测，证明7种McAb均只与ApoA-I发生强阳性反应．而不与人ApoA-Ⅱ、ApoB100、白蛋白、球蛋白、转铁蛋白和纤雏连接蛋白等血浆蛋白反应．免疫印迹试验证实，7种McAb在包含载脂蛋白在内的众多血浆蛋白成分中，仅持异地识别MW为28KD的ApoA-I。另外还对其中3种MCAb的相对亲和力及抗原结合位点进行了研究。     

抗氯霉素卵黄抗体的制备及其分离纯化

将合成的氯霉素(CAP)与牛血清白蛋白(BSA)的偶联物(CAP-BSA)作为免疫抗原注射到母鸡体内得到氯霉素卵黄抗体(IgY). 比较了不同的提取方法,用优化的辛酸-硫酸铵沉淀法从卵黄液中初步提取卵黄抗体. 选用3,3￠-二氨丙基亚胺(DADPA)作为亲和凝胶与配基氯霉素之间的"间隔臂",合成了分离纯化抗氯霉素特异性IgY的亲和层析柱. 将IgY粗品经过亲和层析柱,得到的特异性IgY的抗体活性提高了10倍,收率约为3.3%.     

人心肌肌酸激酶MB同工酶的原核表达及纯化

目的原核表达并纯化人心肌肌酸激酶MB同工酶(creatine kinase MB,CK-MB)。方法分别从含CK-M、CK-B基因片段的质粒SC319293和SC119007中扩增CK-M、CK-B基因,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-CK-MB,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白,经GST亲和层析柱纯化后,ELISA法检测其抗原性。结果重组表达质粒pGEX-4T-1-CK-MB经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确;表达的重组CK-MB蛋白相对分子质量约110 000,表达量占菌体总蛋白的57%,主要以包涵体形式存在;纯化的CK-MB蛋白纯度大于90%,可与兔抗CK-B、CK-M多克隆抗体特异性结合。结论成功原核表达并纯化了重组CK-MB蛋白,为其大量生产奠定了基础。     

Cu(Ⅰ)Y催化剂催化甲醇氧化羰基化合成碳酸二甲酯

对气相甲醇氧化羰基化合成碳酸二甲酯反应中的Cu(Ⅰ)分子筛催化剂进行了活性评价,考察了分子筛载体、催化剂制备温度和制备时间对反应活性的影响,并对反应条件进行了优化.结果表明,Y型分子筛为载体催化活件最好.Cu(Ⅰ)Y催化剂,其最佳制备温度为650℃,制备时间为4 h,反应温度为140℃.在O_2流量为1 mL/min时,随着CO/O_2摩尔比值的提高,CMeOH及STY均呈先上升后下降的趋势,而SDMC则呈上升趋势,最佳原料气摩尔比CO/O_2=10/1.     

锌离子螯合亲和层析分离纯化谷胱甘肽的研究

以谷胱甘肽的酵母抽提液为原料,用自制的以壳聚糖小球为载体、Zn2 为配基的金属螯合亲和层析柱分离纯化谷胱甘肽(GSH).用含0.5 mol·L-1NH4Cl的pH值4.2、0.02 mol·L-1的磷酸盐缓冲溶液洗脱,然后经浓缩、冷冻干燥处理,即得到分离纯化的GSH.结果表明,上柱谷胱甘肽抽提液浓度为 132.30 mg·(100 mL)-1、上柱pH值为7.0时,谷胱甘肽回收率为68.61%;洗脱液中氯化铵浓度为0.5 mol·L-1、洗脱pH值为6.0时,谷胱甘肽洗脱回收率达到44.47%.     

聚丙烯透明改性剂的合成及分离纯化研究

利用正交试验法对DBS的合成及纯化条件进行了优化,得出了优惠工艺条件:原料中苯甲醛与山梨醇摩尔比2.2∶1.0,环己烷与甲醇体积比为 70∶30,搅拌速率和反应时间分别是450 rpm和5 h,在此条件下合成DBS,并用环己烷/丙酮混合溶剂提纯,可以得到99%DBS,其收率达到82.9%。     

固态离子交换制备Cu(Ⅰ)分子筛研究进展

固态离子交换是将金属离子引入分子筛结构中一种十分简单而有效的方法,它克服了溶液离子交换存在的诸多不利因素。本文介绍了固态离子交换制备Cu(Ⅰ)型分子筛的反应原理、制备条件的影响以及不同结构Cu(Ⅰ)型分子筛的应用。鉴于微波场中离子运动速率显著加快的特点,提出采用微波加热可以显著提高固态离子交换反应速率,对于提高Cu+离子交换度,消除残留CuCl的影响,获得高性能的Cu(Ⅰ)Y催化剂具有重要的应用价值。     

心肌肌钙蛋白I在病毒性心肌炎的诊断和病情观察中的意义

目的 探讨肌钙蛋白I在病毒性心肌交的诊断及病情观察方面的意义.方法 对95例急性病毒性心肌炎患者进行肌钙蛋白I和心肌酶谱的动态分析以及肌笱蛋白I与病程关系的分析.结果 肌钙蛋白I阳性率为47.4%;肌钙蛋白I阳性率明显高于心肌酶谱各项目阳性率;肌钙蛋白I阳性组1个月的治愈率(占11.1%)显著低于阴性组(占44.0%).肌钙蛋白I阳性组3个月的总治愈率(占6.4%)明显低于阴性组(占92.0%).结论 肌钙蛋白I在病毒性心肌炎的诊断和病情观察中具有重要意义.     

酪氨酸-银(Ⅰ)的反应及其合成研究

研究了酪氨酸同银(Ⅰ)离子间的反应以及在微乳液体系中合成了酪氨酸-银固态物种,并用红外光谱进行了结构表征。研究了反应条件等对酪氨酸-银(Ⅰ)反应的影响。结果表明,酪氨酸-银(I)反应的优化条件为:pH=5.0左右,酪氨酸浓度为2.4 mmol/L,SDS(十二烷基硫酸钠)浓度为0.32%,硝酸二氨合银浓度为1.2 mmol/L,甲醛浓度为0.015%,硼砂浓度为3.6 mmol/L,反应时间90 min,光照度>600 Lux。并通过电泳法测定了酪氨酸-银体系带正电荷,双电层的电动电位为+1.17×10-4 V。     

人尿促卵泡激素的纯化及其放免行为的研究

用特异性 McAb 制备免疫亲和层析柱,从 hMG 中纯化人尿 FSH(uFSH);纯化的 uFSH在 SDS-PAGE 中呈单条带,分子量约34.9KD;用 RIA 法测得 hMG 和 uFSH 中 LH/FSH 比值分别为24.96%和0.09%,说明 FSH 及 LH 分离的较好。参照生物检定统计法,比较 uFSH 与 FSH 国际参考品在特定 RIA 系统中剂量—反应关系的结果表明,偏离平行无显著差异,说明两者具有相同的放免行为;在 WHO FSH RIA 系统中,分别以 uFSH 和 FSH 国际参考品为标准,测得30份人血清 FSH含量,其两组数值呈良好相关(R=0.993)。     

肝素-琼脂糖凝胶6FF的制备及其在抗凝血酶III分离纯化中的应用

以自制琼脂糖凝胶6FF为基质，肝素为配基，利用还原胺化方法制备了肝素-琼脂糖凝胶6FF介质. 考察了肝素偶联反应的影响因素，并对其进行了优化，得到肝素配基的含量为2.7 mg/mL. 用所制介质从人血浆中分离出抗凝血酶III，从血浆开始计算的抗凝血酶III活性回收率为31.76%，与商品Heparin-Sepharose CL-6B的分离效果相当.     

基于OLED的Cu(Ⅰ)配合物的结构和荧光性能研究

随着OLED普及性的增强,其发光材料研究价值愈发突出。因此,本文通过分析Cu(Ⅰ)配合物配位模式,对基于OLED的Cu(Ⅰ)配合物结构、及其荧光性能展开分析。从而在配合物配体、结构的优化设计中,使设计Cu(Ⅰ)配合物荧光性能可以达到理想目标。     

血红素肽-铁的分离纯化及其清除自由基能力

目的分离纯化血红素肽-铁,并分析其清除自由基的能力。方法以聚丙烯酰胺为载体,对利用真空及低压高频脉冲胰蛋白酶降解猪血红蛋白的产物进行金属螯合亲和层析分离纯化,利用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)及生物信息学网站分析血红素肽-铁的分子结构;以维生素C(Vc)为对照,分析血红素肽-铁的抗氧化能力;以邻苯三酚法分析血红素肽-铁清除超氧阴离子的能力;以脱氧核糖法分析血红素肽-铁清除羟基自由基(·OH)的能力;以三氯甲烷-甲醇法分析血红素肽-铁对脂质过氧化的抑制作用。结果分离纯化的血红素肽-铁由139个氨基酸组成,相对分子质量为16065.08,铁离子含量为11013.5μg/L,理论pI为8.10,消光系数为6990,脂肪系数为92.73,不稳定系数为1.18,总平均疏水性为-0.023;在体外具有较强的清除超氧阴离子和抗氧化自由基能力。结论分离纯化的血红素肽-铁具有清除自由基的能力。