鲜奶中产γ-氨基丁酸的乳酸菌株的筛选与鉴定

从新鲜牛奶中筛选高产γ- 氨基丁酸(GABA)的乳酸菌株fmbl12-4,通过形态特征、生理生化特征和16S rDNA 序列分析,鉴定菌株为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp. lactis)。当fmbl12-4 的湿菌体与100mmol/L L- 谷氨酸钠溶液(L-MSG)按1:20(m/V)混合,于30℃、100r/min 振荡反应24h,转化液中GABA 浓度达到82.36mmol/L。在质量浓度为2.5g/100mL L-MSG 的MRS 培养基中培养6d,GABA 质量浓度达到4.68g/L。     

产胞外多糖乳酸球菌的分离筛选及在Mozzarella干酪中的应用

从东北传统的发酵制品大酱、糖蒜和辣酱中分离出116株乳酸菌,其中LJ35和LJ51两株菌胞外多糖产量相对较高且稳定,分别为乳酸乳球菌乳酸亚种(L.lactis subsp.lactis)和乳酸乳球菌乳脂亚种(L.lactis subsp.cremoris),胞外多糖的产量分别为62.19 mg/L和74.24 mg/L.以菌株LJ35和LJ51制作Mozzarella千酪的研究表明,添加2%LJ35或2%LJ51作发酵剂制作的Mozzarellla干酪保水性分别提高了2.1%和3.2%;同时干酪的融化性得到改善,干酪硬度降低,变得柔软.     

乳酸乳球菌乳亚种NCU036018细菌素的分离纯化及其抗菌机制

从自然发酵泡菜中筛选到1株对金黄色葡萄球菌具有抑制作用的乳酸菌,经16S rDNA和生理生化实验鉴定其为乳酸乳球菌乳亚种（Lactococcus lactis subsp. lactis）并命名为NCU036018。NCU036018发酵上清液中的抑菌物质对胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K、α-糜蛋白酶敏感,而对胃蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶以及过氧化氢酶不敏感,在pH 2.0～10.0、温度50～100℃的范围内分别保留了70%和90%以上的抑菌活性。随后通过硫酸铵盐析、超滤、阳离子交换层析对发酵上清液抑菌成分进行分离纯化,将得到的细菌素命名为乳球菌素036018,其分子质量在14.4～20 kDa之间,最小抑菌浓度为0.50 mg/mL。乳球菌素036018能有效降低金黄色葡萄球菌生物膜的形成率,损坏细胞表面形态、破坏细胞膜的通透性,从而抑制甚至杀死细胞。将乳球菌素036018添加至牛奶中,发现其具有显著抑制金黄色葡萄球菌生长的效果,具有良好的食品防腐保鲜的应用前景。     

营养因素对乳酸乳球菌DL-203生长及其Nisin生物合成的影响

对Nisin高产菌株乳酸乳球菌DL—203的营养要求及其 对Nisin生物合成的影响进行了研究。结果表明,乳链菌 肽的生物合成与DL-203的生长呈极显著正相关,乳酸 乳球菌DL—203生长和合成Nisin的最佳碳源和氮源分 别为蔗糖和大豆蛋白胨,其适宜浓度均为15～20g/L。磷 酸盐对乳酸乳球菌DL—203生长及其Nisin生物合成具 有极大的促进作用,其中以Na_2HPO_4效果最好,其浓度 在224mmol/L以下时对菌体生长和Nisin生物合成具有 较大的促进作用。     

乳酸乳球菌Lactococcus lactis subsp.Lactis产丁二酮发酵条件研究

对乳酸乳球菌乳亚种Lactococcus lactis subsp.Lactis发酵丁二酮条件进行研究,通过正交试验优化确定其最佳产丁二酮发酵条件为:温度37℃,起始pH6.5,接种量5%,柠檬酸钠的添加浓度0.75%。在此条件下,菌株在脱脂乳培养基中丁二酮的产量可达到69.58 mg/L。     

分离自酸菜汁的乳酸乳球菌体外去除胆固醇特性

将从自然发酵的酸菜汁中分离鉴定的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)接种于高胆固醇培养液MRSO-CHOL中,分别改变茵的培养时间和接种量以及培养基中胆盐质量浓度和胆盐种类,发现乳酸乳球菌对培养液中胆固醇的体外去除率在72 h前随时间的增加而提高,72～96 h基本维持稳定,96 h后下降;随着接种量的增加,胆固醇的去除率增加;培养液不舍胆盐时,乳酸乳球菌的胆固醇去除率很低,仅为4.51%.胆盐质量浓度为0～0.3 mg/mL时,随着胆盐质量浓度的升高,胆固醇的去除率也逐渐升高.胆盐质量浓度高于0.3 mg/mL时,胆固醇去除率下降;牛磺胆酸钠对胆固醇的去除效果最佳.     

锌、锰对微拟球藻生长及营养物质积累的影响

研究了不同质量浓度锌锰共同添加对微拟球藻（Nannochloropsis oculata）生长及营养物质积累的影响,结果表明,不同质量浓度的锌锰胁迫对培养液中藻细胞密度的影响和单个藻细胞中营养物质的积累不同。当培养液中Zn2+质量浓度为60 μg/L,Mn2+质量浓度为400 μg/L时,藻细胞密度、蛋白质和粗脂肪含量最高,分别为8.5×108个/mL、0.59 mg/mL和0.71 mg/mL。当培养液中Zn2+、Mn2+质量浓度分别为40 μg/L和600 μg/L时,藻细胞密度为6.2×108个/mL,单个藻细胞中蛋白质含量和粗脂肪含量最高,分别为0.98×10-9 mg和1.83×10-9 mg。     

金属离子对斯达油脂酵母发酵产油脂的影响

通过摇瓶培养考察金属离子(Mg2+、Ca2+、Fe3+、Zn2+、Mn2+、Cu2+)对斯达油脂酵母(Lipomyces starkeyi 1809)生长和发酵生产油脂的影响。结果表明:在不同金属离子的各种浓度下,斯达油脂酵母的菌体生物量、油脂产量、油脂含量和油脂系数的差异均达到极显著水平(P0.01)。当培养基中缺失Mg2+或Fe3+或Zn2+时明显抑制菌体生长和油脂积累,添加适当浓度的Mg2+、Fe3+、Zn2+可促进斯达油脂酵母菌体生长和油脂合成,菌体利用底物合成油脂的转化率显著提高;添加适当浓度的Ca2+或Cu2+有利于菌体生长和油脂积累;Mn2+缺失有利于菌体生长和油脂合成,Mn2+浓度越高越不利于油脂积累。在试验浓度范围,MgSO4.7H2O 1 000 mg/L、CaCl2.2H2O 500 mg/L、FeCl3.6 H2O 1.6 mg/L、ZnSO4.7H2O 0.3 mg/L、MnCl2.4H2O 0.008 mg/L、CuCl2.2H2O 0.08 mg/L为斯达油脂酵母生长和油脂积累的适宜浓度。结论:在培养基C/N一定的条件下,金属离子对斯达油脂酵母生长和产油脂能力起着重要的作用,本试验结果对建立微生物油脂发酵调控的新策略具有重要的理论和实践意义。     

外源信号分子AI-2对发酵乳杆菌TG4-1-1和乳酸片球菌11-3产胞外多糖的影响

研究群体感应信号分子AI-2对发酵乳杆菌TG4-1-1和乳酸片球菌11-3胞外多糖产量的影响,探讨信号分子AI-2对乳酸菌分泌胞外多糖的调控机制。采用苯酚-硫酸法和哈维氏弧菌BB170生物发光法测定菌株不同培养时间胞外多糖产量和AI-2活性,筛选添加最佳浓度的外源信号分子AI-2,测定菌株的生长量、胞外多糖产量、AI-2活性,扫描电镜观察菌体形态及冷冻干燥后多糖形态。结果表明:发酵乳杆菌TG4-1-1和乳酸片球菌11-3均在10 h时AI-2活性最强,22 h时胞外多糖产量最高,分别达到(195.863±1.643)mg/L和(125.179±1.458)mg/L。100μmol/L外源AI-2为菌株TG4-1-1和11-3的最佳添加浓度,而该浓度对两株菌各阶段生长量均无显著影响(P>0.05),对菌株TG4-1-1在16～22 h和菌株11-3在13～22 h的胞外多糖产量有显著促进作用(P<0.05)。同时,显著增强试验菌株在10 h时AI-2的活性(P<0.05)。添加100μmol/L外源AI-2培养13 h后菌体表面光滑,形状规则,形态饱满,其对胞外多糖形态...     

维生素对大肠杆菌Escherichia coli.JN8产L-色氨酸的影响

研究了9种维生素对大肠杆菌Escherichia coli.JN8生长及其发酵产L-色氨酸产量的影响,并对发酵培养基中的维生素浓度进行了优化。结果表明,低浓度肌醇和叶酸可显著促进大肠杆菌的生长及L-色氨酸的合成,叶酸和肌醇的最适添加量分别为0.000 2 mg/L和0.2 mg/L;较高浓度的生物素可以明显促进菌体生长及色氨酸的合成,其最适添加量为0.12 mg/L;较低浓度VB6的添加严重抑制色氨酸的合成,当其质量浓度增至0.8 mg/L时,菌体浓度和色氨酸的产量均较对照有显著的提高,分别提高11.8%和27.2%。添加VB5可略微提高色氨酸的产量,最优质量浓度为0.4 mg/L。添加VB1、VB2、VB3和VC虽然对菌体的生长均有较强的促进作用,但对于色氨酸合成却有不同程度的抑制作用。     

一株乳酸乳球菌的降胆固醇特性及其作用机制

探讨了乳酸乳球菌乳亚种HUCM 201的降胆固醇特性及其体外去除胆固醇的机制。乳酸乳球菌乳亚种HUCM 201菌株可从培养基中去除33.1%的胆固醇,其中14.3%的胆固醇发生共沉淀并重新溶解在洗涤液中,18.1%的胆固醇被吸收到菌体细胞内。HUCM 201菌株对5种结合型胆酸盐分别表现出了不同的胆盐水解酶活性,其中对甘氨胆酸钠的水解能力最强,总酶活为0.279 U/mL,比酶活为0.076 U/mg。     

乳酸乳球菌胞外多糖磷酸化的工艺优化

采用单因素和正交试验,对乳酸乳球菌胞外多糖的磷酸化工艺进行研究,探讨磷酸盐用量、反应温度、反应时间、反应pH值对乳酸乳球菌胞外多糖最终PO43-接枝量的影响。所得的乳酸乳菌球菌胞外多糖磷酸化的工艺优化条件为：胞外多糖与磷酸盐质量比为6:1、温度90℃、时间4h、pH6.0,此条件下所得PO43-的接枝量为1.639mg/g。     

硒化乳酸菌胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞及肿瘤细胞内游离Ca2+的影响

目的：研究硒化乳酸菌胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞、SGC7901胃癌细胞及海拉细胞（Hela cells）内游离Ca2+的影响。方法：分离制备小鼠腹腔巨噬细胞,利用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM及激光共聚显微镜测定加药后10 min细胞内Ca2+浓度的变化。结果：添加硒化多糖后,巨噬细胞内Ca2+浓度缓慢升高,而胃癌细胞与Hela细胞内Ca2+水平均有不同程度的下降。结论：通过对乳酸菌胞外多糖进行硒化修饰可增强其刺激巨噬细胞的能力,因而发挥其免疫功效。硒化多糖与肿瘤细胞表面受体结合后引起细胞内Ca2+内流的减少,提示硒化后的多糖可引起肿瘤细胞不同程
度的细胞凋亡。     

乳酸乳球菌乳酸亚种高产胆盐水解酶发酵条件的优化研究

本文利用从藏灵菇中筛选的产胆盐水解酶的乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcuslactissubsp.lactis)研究提高酶活力的环境因素。针对主要影响胆盐水解酶合成的四个因素,采用四因素三水平L9(34)正交试验确定了高产胆盐水解酶优化发酵条件:葡萄糖添加量为3%、大豆蛋白胨添加量为2%、发酵温度为37℃、接种量为2%。在优化条件下,胆盐水解酶活力是优化前的11.84倍。     

实时荧光定量PCR技术监测腌制麻竹笋中乳酸乳球菌动态变化

采用实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）技术定量监测6 g/100 mL盐质量浓度腌制麻竹笋中乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）的动态变化。经乳酸乳球菌标准菌株基因组DNA提取、标准阳性质粒制备、标准曲线绘制、各时期竹笋腌制发酵液中细菌基因组DNA提取和乳酸乳球菌qRTPCR特异性扩增,对腌制液中乳酸乳球菌进行定量检测。结果表明,在腌制过程中（0～63 d）,随着腌制时间的延长,乳酸乳球菌含量逐渐升高,在腌制14 d时达到最大值（4.63×108 copies/μL）,与0 d（2.41×102 copies/μL）相比增加了6 个数量级,而后浓度缓慢降低,在腌制63 d时浓度为5.02×106 copies/μL。qRT-PCR技术为定量监测腌制麻竹笋中微生物的动态变化提供了一条可靠、快速的有效途径。     

一株仅产L-乳酸的乳酸乳球菌发酵培养基的优化

为了研究一株分离自新疆牧民家庭自制酸马奶中的乳酸乳球菌KLDS 4.0325产L-乳酸的能力,以L-/D-乳酸试剂盒验证该菌种在发酵过程中所产L-乳酸的光学纯度为100%。利用Plackett-Burman设计法对影响该菌株发酵的培养基主要组分进行筛选,确定影响L-乳酸产量的主要因素为蔗糖、酵母粉、K2HPO4。在此基础上,采用响应面法优化发酵培养基的组成,结果表明：当蔗糖添加量为102.9 g/L、酵母粉添加量为2.5 g/L、K2HPO4添加量为7.9 g/L时,L-乳酸产量最大,可达86.6 g/L,在最优发酵条件下获得的实测值与模型预测值（86.3 g/L）吻合,说明所建立的模型是切实可行的。     

单亲灭活德氏乳杆菌和乳酸乳球菌原生质体融合条件优化

利用单亲灭活原生质体技术对德氏乳杆菌FQ菌株和乳酸乳球菌FL菌株的原生质体进行融合,考察原生质体制备、再生和融合条件的影响因素。结果表明:制备德氏乳杆菌FQ菌株原生质体最适条件为温度37℃,在含有10μg/mL变溶菌素和1mg/mL溶菌酶溶液中超声处理90min。在此条件下,原生质体再生率可达6.36%。乳酸乳球菌FL菌株添加1mg/mL甘氨酸处理后,用10mg/mL溶菌酶37℃恒温酶解90min,原生质体形成率可达99.97%。65℃处理乳酸乳球菌FL菌株原生质体120min,原生质体灭活率可达96.89%。融合实验结果表明,在PEG6000 400g/L(含0.02mol/L MgCl2和0.01mol/L CaCl2)、融合时间5min、融合温度20℃、pH6.5的条件下促融,德氏乳杆菌FQ菌株和乳酸乳球菌FL菌株原生质体的融合率可达2.72×10-6。     

具有溶栓活性的重组乳酸乳球菌的构建

利用PCR方法从纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.natto)基因组DNA中扩增纳豆激酶原基因,构建了纳豆激酶原基因的表达载体pFY002,转化Lactococcus lactis NZ9000,得到活性表达纳豆激酶的重组菌Lactococcus lactis NZ9000/pFY002。利用纤维蛋白平板法检测其溶栓活性,并对诱导剂乳链菌肽(NisinA)的浓度、温度、诱导时间对重组菌产酶的影响进行探究。     

Substrate specificity of a tripeptidase as a metalloenzyme purified from Lactococcus lactis subsp. lactis biovar. diacetylactis ATCC 13675

The peptidase purified to homogeneity from Lactococcus lactis subsp. lactis biovar. diacetylactis ATCC 13675 was considered to be an aminotripeptidase (EC 3.4.11.4) from the results of substrate specificity. The K(m) value showed a tendency to decrease with the number of alanine residues, but to increase with the number of glycine residues in the substrate tripeptide. The effects of divalent metal ions on enzyme activity were considerably different depending on the tripepride used as a substrate. In the case of Mn2+, Co2+, Ni2+, Cu2+, Zn2+ and Cd2+, there was apparent correlation between enzyme activities observed in the presence of metal ions and following metal ion replacement. The Zn2+-replaced enzyme showed almost the same K(m) and k(cat) values as the native enzyme, suggesting the enzyme to be a zinc metallopeptidase. The K(m) of the divalent metal-replaced enzyme increased in the order of Co2+, Zn2+, and Mn2+. As a result of replacement with Co2+ an enzyme having 2.3-fold higher activity compared to the native enzyme for GGF as a substrate was obtained. Thus, the change in substrate specificity observed following metal replacement may suggest a highly specific interaction between the enzyme, metal and substrate, leading to the activity expression and stability of the tripeptidase.     

乳酸乳球菌KLDS4.0325的B族维生素生物合成途径分析

为了探究乳酸乳球菌KLDS4.0325的B族维生素合成潜力,利用各类B族维生素生物合成途径的相关蛋白序列针对该菌株的氨基酸序列进行同源性搜索,并与其他9 株乳酸乳球菌的叶酸生物合成途径进行比较分析。结果表明：与参考菌株相比,乳酸乳球菌KLDS4.0325具有较为完整的叶酸和核黄素合成途径编码基因,在基因水平上可以有效合成叶酸和核黄素,具有相当大的工业潜能。