芦荟过氧化氢酶的分离纯化和性质研究

目的：获得库拉索芦荟过氧化氢酶纯品并对其性质进行研究。方法：采用硫酸铵分级沉淀,DEAESepharose阴离子交换层析,CM-Sepharose 阳离子交换层析和Sephacryl S-200 凝胶层析对酶蛋白进行分离纯化,采用SDS-PAGE 鉴定酶的纯度、分子质量。结果：从芦荟中分离纯化获得电泳纯的过氧化氢酶,纯化倍数为228.05倍,酶活力回收率为14.10%,比活力达17427.30U/mg。该酶的分子质量为239.90kD,亚基分子质量为60.60kD。推测该酶由4 个相同亚基构成。该酶最适温度为45℃,最适pH 值为7.5,以过氧化氢为底物测定该酶的表观Km 为34mmol/L。结论：成功分离纯化获得过氧化氢酶,该酶具有良好的热稳定性和酸碱耐受性。     

苹果过氧化氢酶的纯化及性质研究

新鲜苹果经匀浆、抽提、硫酸铵盐析、DEAE-Cellulose柱层析,获得纯化苹果过氧化氢酶(CAT)液。纯化CAT酶液蛋白含量26.8mg/mL,活力843Units/mL,比活力31.5Units/mg。经过温度和pH考察,酶的最适温度为50℃、最适pH值为5.0。金属离子影响为:Cu2 和Mn2 对该酶有不同程度的激活作用,Na 对该酶有一定程度的抑制作用。以过氧化氢为底物,Lineweaver-Burk双倒数作图法求得此酶的Km和Vmax分别为2.27mmol/L和2.5μmol/min。     

韭菜过氧化氢酶的分离纯化及其部分酶学特性

为获得韭菜过氧化氢酶纯品并对其性质进行研究,将新鲜韭菜通过匀浆、抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析等步骤,获得了电泳纯的韭菜过氧化氢酶(CAT),纯化倍数为70.36,回收率为18.33%,酶比活力达到22064.57U/mg。其全酶分子质量和亚基分子质量分别为241.76、62.43kD。该酶反应的最适温度为37℃,最适pH值为7.2。该酶在25～40℃以及pH5～9有较好的稳定性,同时在最适条件下测得其Km值为46.93mmol/L。甲醇、乙醇、异丙醇、SDS以及Cu2+、Ag+、Fe2+等金属离子对该酶有较强的抑制作用。     

贻贝过氧化氢酶的纯化及部分性质

新鲜贻贝肉匀浆抽提液经硫酸铵盐析、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层纯化,得到一种过氧化氢酶。该酶为糖蛋白,亚基分子量约为７６０００,中性糖含量约为１０．５６％,研究结果表明,贻贝过氧化氢酶的最佳ＰＨ７．０左右,对热不稳定,４５℃保温１５ｍｉｎ,酶的残余活力约为７０％;６０℃保温１５ｍｉｎ,则酶的残余活力仅剩１０．６％左右。ＮａＮ３、ＫＣＮ及某些金属离子如Ｐｂ＾２＋、Ｈｇ＾２＋、Ｆｅ＾２＋、Ｃｄ     

蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质测定

大蒜中功能成分含硫化合物是由蒜氨酸酶(alliinase,E C4.4.1.4)催化蒜氨酸(alliin)生成的。本实验通过提取、盐析、透析及层析,自新鲜大蒜中分离纯化出蒜氨酸酶,并测定了蒜氨酸酶的酶学性质。蒜氨酸酶的适宜分离纯化过程及条件为:pH7.0Na /K 磷酸缓冲液提取,45%饱和度NH4(SO4)2盐析,10000×g离心沉淀30min,pH6.5的Na /K 磷酸缓冲液溶解,截留1.4万分子量透析袋透析,Sephadex G-200层析,收集洗脱时间4.75h的洗脱液。蒜氨酸酶最适温度和pH值分别为30℃和6.3,Mg2 、Zn2 、Fe2 、Fe3 、EDTA-Na金属离子对蒜氨酸酶有激活作用,Fe3 激活作用最明显,Cu2 严重抑制蒜氨酸酶活性。以合成S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜为底物,蒜氨酸酶的Km为5.91mmol/L、Vmax为1.55μmol/min。     

甘南牦牛肝过氧化氢酶超滤纯化工艺及酶学性质研究

采用超滤工艺从甘南牦牛肝中分离纯化过氧化氢酶,得出的超滤最佳工艺为超滤膜截留分子质量250 kDa、超滤温度25 ℃、压力0.20 MPa、流速30 m/s、浓缩倍数为3倍。酶学性质研究结果显示,该酶最适温度、pH值分别为35 ℃和7.5,米氏常数（Km）值为53.8 mmol/L。     

韭菜过氧化物酶的分离纯化及性质

经匀浆、抽提、硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的韭菜过氧化物酶(POD)。该酶比活力达到14031.41U/mg,纯化倍数为102.96,回收率为10.85%。该酶分子质量约为28.4kD,最适温度40℃、最适pH值为4.6。该酶在20～40℃以及pH 4.0～8.0有较好的稳定性,在最适条件下测得其Km值为18.15mmol/L。低浓度草酸、Zn2+、Mg2+等对该酶有较强激活作用;甲醇、乙醇、异丙醇、SDS、抗坏血酸(AsA)以及Mn2+、Fe3+等对该酶有较强的抑制作用。     

黄瓜过氧化物酶的分离纯化及酶学性质

新鲜的黄瓜经匀浆、抽提、硫酸铵沉淀、CM-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析后获得电泳纯的过氧化物酶。该酶的比活力、回收率及纯化倍数分别为64 177.67 U/mg、9.58%、61.93。该酶的分子质量为41.15 kD,亚基分子质量为40.21 kD。该酶的最适温度和最适pH值分别为60 ℃和6。在25～45 ℃及pH 5～9的范围内非常的稳定。在测定条件下测得该酶的Km值为53.79 mmol/L。硫氰化钾对该酶活力基本无影响。尿素、K+、Mn2+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Cu2+对该酶都具有激活作用且浓度至50 mmol/L时酶活力分别被激活至112%、127%、113%、128%、139%、199%、348%,然而十二烷基磺酸钠、抗坏血酸和草酸对该酶有强烈的抑制作用;Zn2+、甲醇、乙醇和异丙醇对该酶有一定的抑制作用。     

大豆谷氨酸脱羧酶分离纯化及酶学性质研究

对大豆中的谷氨酸脱羧酶(GAD)进行了提取、纯化及酶学性质的研究.采用硫酸铵分级沉淀技术对大豆中GAD进行了纯化,该酶被纯化了4.7倍.纯化后的大豆GAD最适温度为40℃,最适pH为5.9,大豆GAD的热稳定性较差,在80℃几乎失去活性,但该酶在pH5.0～8.0较稳定,能保持很好的酶活.大豆GAD对底物谷氨酸的Km值为19.4 mmol/L.Mg2、KCl对大豆GAD活性影响不大,但KI、Ag+、SDS对大豆GAD有抑制作用.Ca2+对大豆GAD有激活作用,当Ca2浓度为1 500 μmol/L时,对大豆GAD激活作用最强,相对酶活能达到160％.大豆GAD与其他植物GAD相比存在差异,并证实可被Ca2+激活.     

低温脂肪酶的分离纯化及酶学性质

苏云金芽胞杆菌CZW001脂肪酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、透析、超滤离心、DEAE-纤维素-52离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析得到电泳纯的脂肪酶,纯化倍数为75.5倍,活性回收率为37.6%,12%SDS-PAGE电泳估计其相对分子质量约40 000。对纯化后的脂肪酶进行酶性质研究表明:酶的最适作用温度为25℃,对热敏感,60℃处理30 min仅残留30%酶活性;酶的适宜作用pH范围在7～9,最适pH为8;该脂肪酶的水解活性对Ca2+表现明显的依赖性,Al3+、Zn2+和Fe2+对脂肪酶有显著的抑制作用;脂肪酶对醇类有机溶剂的耐受性随碳链增加而减小;脂肪酶对豆油表现出显著的特异性,而蓖麻油抑制脂肪酶水解活力。     

大豆糖蛋白的分离纯化及结构分析

通过DEAE-Cellulose52离子交换层析和SephadexG-200凝胶层析从大豆中提取纯化一种糖蛋白,并对其结构进行了初步分析。用SDS-PAGE检测纯度,并测定其分子质量的大小,测定结果为61000,蛋白质含量为30.55%;β-消除反应说明其为O-连接型糖蛋白,红外光谱法推断其含有α型糖苷键。     

龙须菜琼胶多糖的提取、纯化与性能表征

龙须菜(Gracilaria Lemaneiformis)的热水提取物,经DE-22和Sephadex G-200柱层析纯化,得到一种含微量硫酸基的琼胶多糖,此多糖经Q-Sepharose柱层析鉴定为单一组分。紫外光谱显示它不含蛋白质、多肽及核酸,红外光谱揭示它含3,6-内醚半乳糖特征吸收以及微量的硫酸基,热学性质表明在其0～700℃升温过程中存在两个失重过程,旋光分析表明随温度的升高,该多糖水溶液存在一个由有序构象(螺旋结构)向无序构象(无规线团)转变的过程。     

小球藻糖蛋白的分离纯化与性质测定

小球藻经热水抽提、脱蛋白、乙醇沉淀得粗糖蛋白,粗糖蛋白经Sephadex-75层析得到糖蛋白纯品。糖蛋白纯品经Sephadex-200层析证明为单一物质。紫外可见光谱只出现280nm和195nm的单峰。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示糖蛋白分子量为63.7kDa。气相色谱分析表明该糖蛋白单糖组成主要是葡萄糖、半乳糖、鼠李糖。β-消去反应证明糖和蛋白是O-糖肽键连接的。     

牛肾溶菌酶的分离纯化及部分酶学性质

将新鲜牛肾匀浆后,经由缓冲液提取,正丁醇除脂,硫酸铵分级沉淀,CM-Sepharose阳离子交换层析,Superdex-200凝胶过滤层析后得到电泳纯的牛肾溶菌酶。结果表明：该酶比活力为15 145.63 U/mg,回收率为29.13%,纯化倍数为231.05;分子质量约12.66 kD,为单亚基酶。最适反应温度为65 ℃,在65 ℃以下较稳定;最适pH 9.0,pH值在3.0～9.0范围内稳定性较好;测得最适条件下牛肾溶菌酶对溶壁微球菌的Km值为0.399 μg/mL;甲醇、乙醇、异丙醇和硫氰化钾（KSCN）对该酶有激活作用;十二烷基硫酸钠、Pb2＋、Ag＋对该酶有明显抑制作用。     

鸭卵清溶菌酶的分离纯化及性质

通过硫酸铵的分级沉淀、CM-Sepharose阳离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析等步骤,从鸭卵清中获得电泳纯的溶菌酶,该酶的比活力达到33687.26U/mg,纯化倍数为109.44,回收率为28.00%。测得该酶分子质量约为14.82kD,对溶壁微球菌的最适反应温度为50℃,最适pH值为7,且在50℃以下及pH5～9有较好的稳定性,同时在最适条件下测得其Km值为0.0864mg/mL。Fe2+、Mg2+、Mn2+等金属离子对该酶有较强的抑制作用,而Zn2+、Cu2+、Co2+对该酶有一定的激活作用。