甲壳素固定化β-葡萄糖醛酸苷酶的研究

以甲壳素为载体、戊二醛为交联剂,固定β-葡萄糖醛酸苷酶,对β-葡萄糖醛酸苷酶的固定化条件进行了研究,并通过正交实验确定了酶固定的最佳条件：戊二醛浓度0.7%,交联时间4h,吸附时间为9h,反应温度40℃,此时酶活力回收率可达67.32%。     

甲壳素固定化β-葡萄糖醛酸苷酶的研究

以甲壳素为载体、戊二醛为交联剂,固定β-葡萄糖醛酸苷酶,对β-葡萄糖醛酸苷酶的固定化条件进行了研究,并通过正交实验确定了酶固定的最佳条件:戊二醛浓度0.7%,交联时间4h,吸附时间为9h,反应温度40℃,此时酶活力回收率可达67.32%。      

海藻酸钠固定化β-葡萄糖醛酸苷酶的研究

本文研究了以海藻酸钠为载体,采用交联-包埋方式固定β-葡萄糖醛酸苷酶的固定化工艺。分别考察海藻酸钠浓度、戊二醛体积分数、氯化钙浓度、交联时间和固化时间对固定化酶相对酶活力的影响,并以正交试验确定β-葡萄糖醛酸苷酶最佳的固定化条件:海藻酸钠质量浓度35g/L、给酶量1600U/g载体、戊二醛体积分数0.2%、氯化钙质量浓度20g/L、交联时间2h、固化时间2h。研究表明此时固定化酶的回收率较高,可达到71.66%,本文使用的固定化工艺简单易行,具有广阔的工业前景。     

响应面法优化木聚糖酶和α-葡萄糖醛酸酶联合水解桦木木聚糖工艺

在单因素试验基础上应用响应面试验,优化重组耐热性木聚糖酶（XynB）和α-葡萄糖醛酸酶（AguA）联合水解桦木木聚糖的条件。响应面法分析结果显示,4个影响因素的最佳组合为底物质量浓度4.2g/100mL、酶解温度80.66℃、pH7.65、XynB/AguA加酶量60/9U/g,此时还原糖释放量为17.82mg/mL。利用木聚糖酶和葡萄糖醛酸酶共同作用木聚糖4h所得低聚木糖中还原糖质量浓度为17.91mg/mL,木二糖质量浓度为13.66mg/mL。     

内生真菌β-D-葡萄糖醛酸苷酶固定化及其性质研究

以海藻酸钠为载体、戊二醛为交联剂,对内生真菌Chaetomium globosum S108的高选择性β-D-葡萄糖醛酸苷酶的固定化及部分特性进行了研究。结果表明:β-D-葡萄糖醛酸苷酶的最佳固定化条件为海藻酸钠1.5%、戊二醛1.5%、添加酶量3 500 U、Ca Cl2浓度2%,交联时间30 min。β-D-葡萄糖醛酸苷酶固定化后,其最适温度提高5℃,最佳pH值由6.0~6.8拓展为5.2~7.6,热稳定性和pH稳定性明显改善;米氏常数(Km)明显增大,而最大反应初速度(Vmax)明显减小。固定化酶重复操作15次,其相对酶活仍保持71%。     

茶皂素β-D-葡萄糖醛酸酶水解物的结构分析

茶皂素有较强的溶血性,但经β-D-葡萄糖醛酸苷酶水解后溶血性降低。 该研究利用正丁醇和乙酸乙酯分别对茶皂素及其 β-D-葡萄糖醛酸苷酶酶解产物进行萃取纯化,采用超高效液相-质谱鉴定酶解前后茶皂素各组分含量的变化,从而分析其结构变化。结果表明,酶解后乙酸乙酯提取物中糖苷型茶皂素从75.06%降为5.24%,苷元型组分从6.76%增至67.05%。正丁醇提取物中糖苷型茶皂素从51.61%降为34.98%,从而推断可能是β-D-葡萄糖醛酸苷酶酶解后,茶皂素亲水性的糖基与疏水性的配基分离,两亲性下降,从而使其溶血性降低。     

大肠杆菌中β-葡萄糖醛酸酶活性的测定

目的:测定大肠杆菌β-葡萄糖醛酸酶在不同培养基配方及不同培养时间的酶活。方法:利用对硝基酚-β-D-葡萄糖醛酸苷作为酶反应底物,在波长为405nm下比色,检测酶反应所释放的对硝基酚的量,以测定液体培养基中β-葡萄糖醛酸酶活性。研究结果表明,培养基配方2酶活性较高,对pH缓冲能力强,适合于产β-葡萄糖醛酸酶。     

β-葡萄糖醛酸酶提取及其活性研究

β-葡萄糖醛酸酶(β-G)是大肠杆菌(E.coli)的特异酶,利用酶-底物法测定β-G活性,确定了β-G的最佳发酵培养基:胰蛋白胨1%、淀粉5%、NaCl 0.5%,、酵母膏0.5%、pH 7.2～7.4;最佳发酵培养条件:通气量50 mL/250 mL三角瓶,转速110 r/min,并用硫酸铵分级沉淀法对β-G进行提取研究。     

毕赤酵母高效表达重组β-葡萄糖醛酸苷酶的诱导方法研究

将甘草酸生物转化合成GAMG已成为国内外医药和食品行业研究的热点。该文在前期构建毕赤酵母(pichia pastoris)工程菌GS115-GUS的基础上,对重组毕赤酵母工程菌发酵条件进行了研究。通过单因素及正交试验建立工程菌最佳表达β-葡萄糖醛酸苷酶的诱导产酶方法:重组毕赤酵母GS115-GUS菌株在液体YPD培养基中活化24 h后,接种到BMGY中富集菌体,OD600达到6.0时,按照1∶1(V/V)的接种比率接入到pH为6.0的BMMY培养基中,加入1.5%诱导剂甲醇诱导产酶,且每隔24 h添加一次。该诱导产酶条件简单、易行、科学、合理,毕赤酵母高效表达GAMG的酶活高达1.97×103 U/mL,研究结果达到预期目标,为进一步研究重组酵母工程菌产β-葡萄糖醛酸苷酶的发酵水平、β-葡萄糖醛酸苷酶生物催化甘草酸制备GAMG以及工业化生产奠定基础。     

酶法改变甘草苷糖醛酸基提高其甜度的研究(Ⅰ)——能水解甘草苷糖醛酸基酶的微生物的选择与产酶的研究

以酶法改变甘草苷糖醛酸基提高其甜度为目标,研究了９种新菌株能产水解甘草苷糖醛酸基的β－葡萄糖醛酸苷酶产率。结果：细菌甘Ｅ－１、霉菌甘Ｍ－３和甘Ｍ－６等产β－葡萄糖醛酸苷酶较好,产率分别为５６．７３Ｕ／ｍｌ、４２．５２Ｕ／ｍｌ和３１．２６Ｕ／ｍｌ,产酶最佳培养时间分别为细菌１８ｈ和霉菌４８ｈ。酶解甘草苷的最佳反应条件为：ｐＨ６,反应时间为１２ｈ,反应温度为４０℃。     

共表达木聚糖酶和木糖还原酶生产木糖醇的研究

运用PCR技术扩增出短小芽孢杆菌木聚糖酶A基因,构建分泌型重组质粒pET22-xynA,并构建木糖还原酶重组质粒pET28-xyl1。利用双抗生素抗性将pET22-xynA和pET28-xyl1在E.coliBL21(DE3)plysS中共表达,鉴定了木聚糖酶和木糖还原酶的活性。此外,还对其利用木聚糖生产木糖醇做了初步研究,为将来直接应用玉米芯等农副产品生产木糖醇奠定了基础。     

耐热木聚糖酶对面包老化作用探讨

研究了纯化的耐热木聚糖酶对面包老化的影响作用,探讨了耐热木聚糖酶影响面包老化的动力学。研究证明,适量添加耐热木聚糖酶的面包品质得到了明显改善,并且老化速度变缓,老化速率常数相比对照组下降幅度高达48%。耐热木聚糖酶对面包老化的影响作用显著。     

嗜热真菌耐热木聚糖酶对面包品质的改善

研究了纯化的耐热木聚糖酶对面包品质及老化的影响，探讨了耐热木聚糖酶影响面包发酵及烘烤过程的作用机理。适量添加木聚糖酶的面包体积显著增加且面包芯的组织结构优良，同时老化变缓：本试验条件下，添加纯酶1．5mg／kg为最适酶添加量，体积增加43％，硬度减小44％，老化速度放缓近一半。     

大肠杆菌生产重组极耐热木聚糖酶的诱导条件及其酶学性质

构建重组菌(JM109/pTrc 99A xylIV)作为极耐热木聚糖酶的生产菌株,研究了IPTG诱导时间、IPTG浓度、重组菌生长的不同阶段加IPTG和温度对重组菌生产极耐热木聚糖酶的影响以及它的酶学性质.结果表明,IPTG诱导8h后极耐热木聚糖酶的表达量基本维持不变,0.5～5mmol/L浓度的IPTG诱导重组菌表达极耐热木聚糖酶的效果基本相同;当重组菌生长到OD600为1.2左右时加IPTG诱导最好,诱导温度对极耐热木聚糖酶表达水平的影响不大.重组耐热木聚糖酶的最适反应pH值为5.4～5.8,重组极耐热木聚糖酶的最适反应温度大于100℃,重组极耐热木聚糖酶在pH值4.2～7.5都比较稳定,重组极耐热木聚糖酶的温度稳定性好,在90℃下保温2h后残存酶活还有90%.     

绵毛嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)木聚糖酶对面包品质的改善

研究了绵毛嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)W205耐热木聚糖酶的添加量对面包品质及老化的影响。结果表明,添加2·5~5mg/kg纯酶为较适酶添加量。在此添加量下,面包比容增加17%,面包瓤硬度与高径比略为下降,面包内部质构明显提高,老化速率放缓。     

酶解花生壳制备低聚木糖的研究

以花生壳为原料,在固液比1∶20,H_2SO_4浓度为1.0%,120℃条件下处理30min,木聚糖提取率为40.1%。利用木聚糖酶降解木聚糖制备低聚木糖,确立了酶解工艺条件:50℃,pH4.8,加酶量2%(相对固体花生壳原料).搅拌速度80r/min,反应时间24h。在上述反应条件下,低聚木糖得率为81.2%。     

海栖热袍菌木聚糖酶B的分子改造、高效表达及其在啤酒中的应用

研究海栖热袍菌木聚糖酶B(TmXynB)的定向进化、高效表达和应用.构建突变文库后经两轮筛选,获得一个在酸性高温下具有高比活力的突变体(mTmXynB).突变体mTmXynB的最适pH值和最适温度为5.5和90?℃,较野生型的最适pH值和最适温度分别下降了0.5和10?℃,对小麦阿拉伯木聚糖的比活力由529?U/mg提...     

以玉米芯为原料酶法制备低聚木糖的研究

以玉米芯为原料,在固液比1：10,NaOH 质量浓度4%,50℃条件下处理24h,木聚糖提取率为91．0%。利用木聚糖酶降解木聚糖制备低聚木糖,确立了最佳酶解工艺条件为：50℃,pH 4．8,木聚糖底物质量浓度 3．0%,每克底物的木聚糖酶用量为50IU,反应时间0．5h。在上述反应条件下,产品平均聚合度为3．61,低聚木糖得率为91．2%。该研究结果在可再生半纤维素资源利用方面具有重要的意义。     

F/10和G/11木聚糖酶家族的不同热稳定性机制

应用生物信息学方法分析了木聚糖酶初级序列中20种氨基酸同其最适温度之间的关系,发现在F/10家族中有正相关作用的氨基酸是W,负相关作用的是 A,D,H,S;理论上最高最适温度是119 8 ℃在G/11家族中有正相关作用的氨基酸是L,D,P,Y,负相关作用的是 H;理论上最高最适温度为105 6 ℃.惊奇地发现在不同家族中 D起不同的作用,这只能从它们各自不同的蛋白质空间结构上进行解释.从初级序列基础上证明了木聚糖酶的不同蛋白质家族有不同的热稳定性机制.     

以Bacillus pumlis.木聚糖酶水解玉米芯制备木寡糖

木聚糖酶对 Birch wood,Oat spelt和自制玉米芯木聚糖的水解结果表明,不同来源的木聚糖对木聚糖酶水解的影响非常明显,硬本属的 Birch wood的水解效果较好,自制玉米芯木聚糖的水解效果优于同属于禾本科的 Oat Spelt。自制玉米芯木聚糖的水解结果表明,可溶性木聚糖能够被木聚糖酶有效水解而不溶性木聚糖几乎不被水解,长链木聚糖比短链木聚糖更容易被木聚糖酶水解。采用HPLC对自制玉米芯木聚糖水解液的组成进行分析,结果表明,水解液中低聚木糖的主要成分为木二糖、木三糖和木四糖,占水解液中总糖的80％以上。