矢车菊素-3-葡萄糖苷对骨骼肌细胞脂蛋白脂肪酶活性的影响

富含矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-g)的花色苷提取物可抑制肥胖,但其作用机制不明。骨骼肌细胞脂蛋白脂肪酶(LPL)活性与肥胖相关,LPL使骨骼肌中的β-脂肪酸氧化增强,从而加速清除体内循环的甘油三酯(TG),抑制TG流向脂肪组织积聚而导致肥胖。本实验建立稳定的骨骼肌细胞分离培养方法,通过花色苷Cy-3-g干预骨骼肌细胞,研究Cy-3-g对细胞LPL活性的影响及其作用机制。结果表明：Cy-3-g通过激活一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)上调骨骼肌细胞LPL活性,提示Cy-3-g具有潜在的调节机体脂代谢作用,与含Cy-3-g的花色苷提取物的肥胖抑制作用密切相关。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷通过AMPK抑制成熟脂肪细胞脂蛋白脂酶活性

通过矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-g)干预成熟脂肪细胞,研究Cy-3-g对细胞脂蛋白脂酶(LPL)活性的影响及其作用机制。结果表明:Cy-3-g通过激活一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)抑制成熟脂肪细胞的LPL活性,提示Cy-3-g具有潜在的调节机体脂代谢作用,与含Cy-3-g的花色苷提取物的肥胖抑制作用密切相关。     

黑米花色苷矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞炎症损伤的保护作用

单核细胞介导的炎症反应在动脉粥样硬化发生和发展过程中起关键作用。花色苷是一种具有多种生物学活性的多酚类黄酮化合物,富含于各种深色的蔬菜、水果及谷类中,其中矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g）是花色苷中重要的单体,本研究旨在探讨黑米来源的Cy-3-g对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人单核白血病细胞（Tohoku hospital pediatrics-1,THP-1）炎症损伤的作用及可能的分子机制。采用乙醇-盐酸溶液浸提、大孔树脂吸附洗脱等步骤得到黑米花色苷粗提物,然后用中压液相层析联合紫外检测提取得到纯化的Cy-3-g（纯度>96.5%）。用不同质量浓度（0、0.10、0.25μg/mL和0.50μg/mL）Cy-3-g与THP-1细胞共孵育4 h,然后加入LPS（质量浓度50 ng/mL）与细胞继续孵育48 h,用酶联免疫吸附试验法测定培养液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、IL-10和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac...     

矢车菊素-3-葡萄糖苷干预丙烯酰胺细胞毒性的体外模型筛选

丙烯酰胺是食品热加工过程中形成的一种内源性化学污染物,能引起细胞毒性。矢车菊素-3-葡萄糖苷作为一种果蔬中广泛存在的花色苷,具有显著的抗氧化活性。目前应用花色苷进行AA细胞毒性的干预尚无系统性研究。为了筛选适用于AA细胞毒性干预的细胞模型,对体外培养的Hep G2、L02、Caco-2、BHK-21及MDA-MB-231等细胞,通过不同浓度AA和Cy-3-glu培养,采用结晶紫染色法测定不同时间的细胞存活率,最终确定AA最适的作用时间为24 h,适宜作用浓度分别为2.5 mmol/L和5.0 mmol/L;Cy-3-glu的最适预处理时间为4 h。筛选出适合Cy-3-glu干预的AA诱导的细胞模型为MDA-MB-231细胞。通过Cy-3-glu抑制细胞内活性氧生成和谷胱甘肽的降低并验证,10~100μmol/L Cy-3-glu预处理表现出显著的AA毒性的保护作用,为毒性干预研究提供模型基础。     

N-乙酰-半胱氨酸干预壬基酚对小鼠Sertoli TM4细胞的损伤作用

目的：研究N-乙酰-半胱氨酸（N-acetyl-cysteine,NAC）对壬基酚（nonylphenol,NP）诱导的小鼠Sertoli TM4细胞氧化损伤及凋亡的干预作用。方法：以Sertoli TM4细胞为对象,实验分为对照组、NP组（20 μmol/L NP处理）、NP＋NAC组（5 mmol/L NAC预处理4 h后20 μmol/L NP处理24 h）、NAC组（5 mmol/L NAC处理4 h后换正常培养基培养）,采用噻唑蓝法检测细胞存活率;流式细胞术检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量和细胞凋亡情况;试剂盒法检测超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力、过氧化氢酶（catalase,CAT）活力、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量及Caspase-3相对活力;Western blot法检测细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）磷酸化情况。结果：与对照组相比,20 μmol/L NP处理24 h能显著降低细胞存活率（P＜0.05）,同时诱导细胞内ROS生成,下调SOD和CAT活力,增加MDA含量,诱导Sertoli TM4细胞凋亡,增加Caspase-3相对活力,促进ERK、JNK蛋白磷酸化激活;与NP组相比,NAC预处理能够明显削弱NP引起的细胞内ROS生成,使SOD、CAT活力下调,MDA含量增加,Sertoli TM4细胞凋亡,Caspase-3相对活力增强,激活ERK、JNK信号通路。结论：NAC具有干预NP对小鼠Sertoli TM4细胞损伤的作用,这可能与NAC抑制NP诱导的细胞氧化应激和凋亡以及阻断ERK、JNK信号通路的激活相关。     

5’-磷酸腺苷（5’-AMP）体外抗氧化作用的研究

目的：研究5’-磷酸胞苷（5’-AMP）清除活性氧自由基能力及对体外氧化损伤脾细胞的损伤修复能力;方法：采用化学比色法测定5’-AMP清除羟自由基和DPPH自由基的能力,建立H2O2氧化损伤体外培养脾细胞模型,用MTT法检测5’-AMP的修复作用,以评价5’-磷酸腺苷（5’-AMP）的体外抗氧化能力;结果：5’-磷酸腺苷具有剂量依赖性的清除羟自由基和修复脾细胞氧化损伤的能力,但是5’-AMP的DPPH清除能力比较弱。20mmol／L5’-AMP的羟自由基清除能力高达53．009％,而DPPH清除率为17．190％;10mmol／L5＇-AMP清除羟自由基和DPPH自由基的能力分别相当于7．5mmol／L Vc和0．02mm01／LVc;与对照组相比,添加0．5,1,5,10mmol／L5’-AMP均能极显著（P〈0．01）地修复H2O2诱导的脾细胞氧化损伤,其中10mmol／L5’-AMP作用最强;结论：5’-磷酸腺苷具有显著的抗氧化作用。     

蓝靛果花色苷对高脂血症大鼠肝脏LDLR、ABCG1及ABCA1基因表达的影响

目的：研究蓝靛果花色苷对高脂血症大鼠肝脏低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor, LDLR）、三磷酸腺苷结合盒转运体G1（ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1）及ABCA1基因表达的影响。 方法：选择2 月龄雄性Wistar大鼠60 只,将大鼠随机分为6 组,分别为基础饲料对照组（ND,1.2 g/（kg·d mb） 生理盐水灌胃）、高脂模型对照组（HFD,1.2 g/（kg·d mb）生理盐水灌胃）、阳性对照组（10 mg/（kg·d mb） 辛伐他汀片灌胃）,蓝靛果花色苷低、中、高剂量组（HFD＋L、HFD＋M、HFD＋H,分别给予4.0、40.0、 120.0 mg/（kg·d mb）的花色苷灌胃）,持续28 d。实验结束后,测定血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、 甘油三酯（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密 度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、载脂蛋白A（apolipoprotein A,Apo-A）及载 脂蛋白B（Apo-B）等血脂指标水平。取大鼠肝脏,利用实时荧光定量聚合酶链式反应测定大鼠肝脏组织中 LDLR、ABCG1、ABCA1 mRNA表达量,Western blot检测LDLR蛋白表达水平。结果：蓝靛果花色苷干预后, 与HFD组相比,花色苷均能不同程度地降低高血脂大鼠血清中TC、TG、LDL-C、Apo-B的含量（P＜0.05或 P＜0.01）,显著升高HDL-C及Apo-A的含量（P＜0.05或P＜0.01）。花色苷各剂量组LDLR蛋白和mRNA水平均增 高,与HFD组比较差异有显著性（P＜0.05）,ABCA1 mRNA和ABCG1 mRNA的表达水平也高于HFD组,尤其是花 色苷中、高剂量组差异明显（P＜0.05）。结论：40.0 mg/（kg·d mb）蓝靛果花色苷具有明显的调节血脂作用,其 作用机制可能是通过上调肝脏LDLR和ABC家族基因的表达,进而调节胆固醇逆转运过程。     

紫色马铃薯花色苷改善HepG2细胞胰岛素抵抗模型糖代谢的机制

目的:观察紫色马铃薯花色苷对HepG2细胞胰岛素抵抗模型糖代谢的作用并对其机制进行初探。方法:以高浓度葡萄糖培养基为诱导因素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗细胞模型,通过葡萄糖氧化酶法、四唑盐比色实验(MTT)和蛋白质印迹法(Western blot)检测紫色马铃薯花色苷对胰岛素抵抗细胞模型的葡萄糖消耗量、细胞存活率和胰岛素信号通路的蛋白表达的影响。结果:与空白对照组相比,当诱导培养基中葡萄糖浓度为50 mmol/L时吸光度的差值最大,所以选50 mmol/L的葡萄糖培养基来建立胰岛素抵抗细胞模型;花色苷的处理胰岛素抵抗细胞的浓度为40~100 μg/mL时,葡萄糖消耗量可高达19.55 mmol/L显著(p<0.05)高于模型对照组;花色苷浓度为40~100 μg/mL时细胞存活率基本上可以保持在80%,细胞毒性较小;花色苷可以调节因高浓度葡萄糖诱导而导致的IR、IRS-1、IRS-2水平下降的情况,降低p-IRS-1的表达水平,还可以阻止GLUT-2水平的降低。结论:紫色马铃薯花色苷可以改善HepG2细胞胰岛素抵抗模型的胰岛素信号通路抑制的情况,改善胰岛素抵抗模型的糖代谢。     

蓝莓花色苷对过氧化氢所致血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的:观察蓝莓花色苷对过氧化氢（H2O2）所致血管内皮细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:人静脉血管内皮细胞EVC-304经不同浓度蓝莓花色苷（10、20、40μg·m L-1）预培养24 h后,加入100μmol/L H2O2再进行培养12 h。MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测EVC-304细胞凋亡的变化,Western blot法检测细胞内激活型Caspase-3、细胞色素C（Cyto c）、Bax和Bcl-2蛋白表达变化。结果:同正常组相比,H2O2损伤组细胞存活率显著降低（p<0.01）,细胞凋亡率显著升高（p<0.01）,激活型Caspase-3、细胞质中Cyto c表达水平,Bax/Bcl-2比值升高（p<0.01）。与H2O2损伤组相比,20μg·m L-1和40μg·m L-1蓝莓花色苷处理组细胞存活率明显升高（p<0.01）,凋亡细胞率明显下降（p<0.01）,细胞内激活型Caspase-3,Cyto c表达,Bax/Bcl-2比值下降（p<0.01）。结论:蓝莓花色苷对H2O2所致血管内皮细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与保护线粒体功能相关。      

蓝靛果花色苷对高脂血症大鼠肝脏内与胆固醇代谢相关基因的作用

目的：研究蓝靛果花色苷对高脂血症大鼠肝脏肝X受体（liver X receptor α,LXRα）、B族I型清道夫受 体（scavenger receptor class B, type I,SR-BI）、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G5（ATP-binding cassette transporter G5,ABCG5）、过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ）及胆固醇7α-羟化 酶（cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7a1）基因表达的影响。方法：选择2 月龄雄性Wistar大鼠60 只,将大鼠随机分为 6 组,其中10 只给予普通饲料,其余50 只给予高脂饲料。30 d造模成功后,分别建立基础饲料正常对照组（ND, 灌胃1.2 g/（kg·d）生理盐水）、高脂模型对照组（HFD,灌胃1.2 g/（kg·d）生理盐水）、阳性对照组（灌 胃10 mg/（kg·d）辛伐他汀片）和蓝靛果花色苷低（HFD＋L）、中（HFD＋M）、高（HFD＋H）剂量组（分别灌 胃4.0、40.0、120.0 mg/（kg·d）蓝靛果花色苷）,持续28 d。利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测大鼠肝脏组 织中LXRα、SR-BI、ABCG5、PPARγ及CYP7a1 mRNA的表达情况。结果：经蓝靛果花色苷干预后,与HFD组相比： 蓝靛果花色苷各剂量组肝脏中SR-BI、ABCG5 mRNA表达几乎不受影响,且无显著性差异（P＞0.05）;HFD＋M、 HFD＋H组LXRα、CYP7a1 mRNA表达升高且差异极显著（P＜0.01）;HFD＋L、HFD＋M、HFD＋H组 PPARγ mRNA表达降低且差异极显著（P＜0.01）。结论：蓝靛果花色苷通过提高高脂血症大鼠肝脏内LXRα、 CYP7a1 mRNA表达,降低PPARγ mRNA表达来调节高脂血症大鼠的血脂水平,预防动脉硬化的发生。 关键词：蓝靛果;蓝靛果花色苷;高脂血症大鼠;肝X受体;B族I型清道夫受体;三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G5; 过氧化物酶体增殖物激活受体γ;胆固醇7α-羟化酶     

不同形态硒与VE联用对H_2O_2诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:研究不同形态硒化合物(有机硒:L-硒甲基硒代半胱氨酸;无机硒:亚硒酸钠)单独使用及其与VE联合使用后对H_2O_2诱导人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)产生氧化应激损伤的保护作用。方法:采用体外细胞培养方法,将HUVECs随机分为7组:对照组、H_2O_2组、L-硒甲基硒代半胱氨酸(L-Se-methylselenocysteine,L-Se MSC)组、亚硒酸钠(sodium selenite,SS)组、VE组、L-Se MSC+VE联用组、SS+VE联用组。经不同样品干预处理后,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测HUVECs存活率;检测各组细胞内脂质氧化终产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性的变化。结果:各处理组HUVECs存活率之间没有显著差异;与H_2O_2组比较,0.1 mg/L亚硒酸钠、10 mg/L VE处理能使HUVECs内MDA生成量显著减少,SOD和GSH-Px活性显著升高,并且亚硒酸钠和VE联合使用在细胞水平上具有显著的协同作用,而L-Se MSC组与对照组无显著差异。结论:亚硒酸钠和VE均可保护由H_2O_2诱导引起的HUVECs氧化损伤,提高HUVECs抗氧化能力,并且亚硒酸钠和VE联用具有明显的协同抗氧化作用。     

广西牡蛎活性肽抑制卵巢癌淋巴结定向高转移细胞增殖及对运动迁移能力的调控作用

目的：研究广西牡蛎活性肽对卵巢癌淋巴结定向高转移细胞（SKOV3-PM4）的增殖及运动迁移能力的抑制作用。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT）法测定广西牡蛎活性肽作用24 h后对细胞增殖的抑制作用。细胞经不同质量浓度的广西牡蛎活性肽处理后,采用细胞计数法和集落形成实验测定细胞增殖能力;细胞划痕实验和Transwell小室测定细胞体外运动和侵袭迁移能力。结果：MTT实验结果显示牡蛎活性肽质量浓度在5～80 mg/L范围内抑制SKOV3-PM4的增殖,24 h的半数抑制浓度（inhibitory concentration 50%,IC50）为35.36 mg/L。细胞划痕实验表明无细胞毒性的质量浓度为4 mg/L的牡蛎活性肽能抑制SKOV3-PM4的增殖能力,牡蛎活性肽作用SKOV3-PM4细胞后其侵袭、迁移能力降低,与空白对照组比较差异显著（P＜0.05）。结论：从牡蛎中分离出的小分子多肽在一定质量浓度下对SKOV3-PM4细胞的生长增殖、运动迁移具有抑制作用。     

叶酸代谢抑制剂对小鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响

采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、细胞形态分析法及诱导分化法结合油红O染色法研究叶酸代谢中二氢叶酸还原酶抑制剂甲氨喋呤（methotrexate,MTX）、甲氨苄啶（trimethoprim,TMP）和乙胺嘧啶（pyrimethamine,PTM）对OP9小鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响,探讨叶酸代谢与脂质合成的关系。MTT实验结果显示,在一定浓度范围内,3 种叶酸抑制剂均能抑制OP9细胞增殖,并呈现一定的剂量-效应依赖关系。且3 种叶酸抑制剂在高浓度时对OP9细胞有毒性作用。倒置显微镜观察和油红O染色检测结果显示,TMP在500～1 000 μmol/L浓度范围内对OP9细胞分化为脂肪细胞具有抑制作用。荧光定量聚合酶链式反应分析表明,TMP会使叶酸代谢途径中二氢叶酸还原酶和亚甲基四氢叶酸脱氢酶的转录水平发生下调,这可能是TMP抑制脂肪细胞诱导分化的原因。     

丙烯酰胺对睾丸间质细胞R2C活性及孕酮合成功能的影响

目的：研究丙烯酰胺（acrylamide,AA）对体外培养的睾丸间质细胞R2C生长及孕酮合成功能的影响。方法：用浓度为0.25、0.5、0.75、1、2、4、6 mmol/L的AA作用于R2C细胞24 h,四甲基偶氮唑蓝（methylthiazolyl tetrazolium,MTT）法获得IC25、IC50及IC75的AA作用浓度。用以上3 种浓度的AA处理R2C细胞24 h,观察细胞形态。AA作用于R2C细胞4 h后,通过彗星实验（Comet assay）检测细胞DNA的损伤程度;放射免疫法（radioimmunoassay,RIA）测定AA处理R2C细胞4 h和24 h后的孕酮合成量。结果：AA能抑制R2C细胞活性,其IC25、IC50、IC75分别为1.140、1.925、3.250 mmol/L;3 种浓度的AA能不同程度地影响R2C细胞生长形态;作用4 h对R2C细胞DNA有损伤作用;各浓度组作用24 h后均能降低R2C细胞的孕酮合成量。结论：AA能影响R2C细胞增殖及孕酮合成能力。     

α-硫辛酸和乙酰左旋肉碱改善炎症细胞因子介导胰岛细胞功能障碍的作用

目的:探讨α-硫辛酸(α-lipoic acid,LA)和乙酰左旋肉碱(acetyl-L-carnitine,ALC)改善炎症细胞因子介导胰岛细胞功能障碍的效果并探讨机制。方法:大鼠胰岛素瘤RIN-m5f细胞用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)联合作用(TII)48 h造成损伤模型。LA和ALC干预48 h后噻唑蓝法检测胰岛细胞的活力情况,荧光细胞技术法检测细胞的形态学,流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)表达水平,放射免疫法检测胰岛素分泌情况,Western blotting检测细胞凋亡相关和胰岛素分泌相关蛋白表达情况。结果:TII作用48 h可使RIN-m5f细胞活力明显下降,凋亡增加;并降低基础状态下和高糖刺激状态下胰岛素分泌水平;增加ROS水平,增加一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性,增加一氧化氮(nitrogen monoxide,NO)水平,促进NF-κB向细胞核转位;TII还可增加RIN-m5f细胞内促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达,抑制抗凋亡蛋白I-κB、Bcl-2表达,增加线粒体细胞色素c释放。而LA、ALC可改善TII诱导的RIN-m5f细胞凋亡,提高基础状态和高糖刺激状态下胰岛素分泌水平;抑制NF-κB向细胞核转位、降低细胞NO水平;降低Bax、Caspase-3表达,增加抗凋亡蛋白I-κB、Bcl-2表达,抑制线粒体细胞色素c释放;LA与ALC联合作用效果强于单独作用。结论:炎症细胞因子作用48 h可通过ROS-cytochrome c-NF-κB-NOS-NO通路最终引起胰岛β细胞的凋亡,进而影响胰岛素分泌;LA和ALC联用可抑制炎症细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡,促进胰岛素分泌。     

壬基酚致NCTC1469细胞的损伤作用及活性氧水平、谷胱甘肽含量变化

目的：探究壬基酚对NCTC1469细胞的损伤作用及细胞内活性氧类、还原型谷胱甘肽含量的影响。方法：通过体外细胞实验,用不同质量浓度壬基酚作用NCTC1469细胞24 h;CCK-8法检测细胞存活率;测定药物作用后培养液上清中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）和谷草转氨酶（aspartate transaminase,AST）活性及细胞内还原型谷胱甘肽含量;流式细胞仪检测细胞内活性氧类水平。结果：壬基酚可显著抑制NCTC1469细胞增殖及促进活性氧类生成（P＜0.05）,呈一定剂量依赖性;培养液上清液中LDH、ALT活性在壬基酚浓度大于0.1 μmol/L处理组中,与自然释放对照组相比显著升高（P＜0.05）;且壬基酚在高剂量（1、10、100 μmol/L）能明显增加培养液上清中AST活性（P＜0.01）;壬基酚呈剂量依赖性降低细胞内还原型谷胱甘肽含量,与空白对照组比较有显著差异（P＜0.05）。结论：推测壬基酚可能通过上调细胞内活性氧类水平,下调胞内还原型谷胱甘肽含量,引起氧化应激反应,从而对NCTC1469细胞产生损伤作用。     

液相色谱-质谱法快速检测4 种乳源低聚糖

建立一种乳样经简单预处理后采用超高效液相色谱-串联质谱同时检测4 种重要的乳源低聚糖方法。牛乳及人乳经过脱脂、脱蛋白后经amide液相色谱柱用0.1%氨水-乙腈溶液梯度分离,采用质谱检测。2 种唾液酸乳糖标准品的标准曲线在0.78～50.00 mg/L范围内线性良好（R2＞0.990）,2 种岩藻糖乳糖标准品的标准曲线在1.56～100.00 mg/L范围内线性良好（R2＞0.990）。加标回收率在80.00%～100.00%之间,重复性、精密度实验所得相对标准偏差均小于5.00%。     

海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用及其机制

目的：探讨不同质量浓度的海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用。方法：分别以质量浓度为5、10、20、30 mg/mL的海带多糖处理Bel-7402细胞,48 h后观察海带多糖对细胞增殖的抑制情况,Annexin V-FITC试剂盒检测细胞凋亡状况,酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测Caspase-3活性,Western blotting法检测细胞内Caspase-3和甲胎球蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）表达量。结果：海带多糖对Bel-7402细胞的增殖有明显抑制作用,最佳抑制剂量为30 mg/mL;随着海带多糖质量浓度的升高,细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）,海带多糖处理组Bel-7402细胞内的Caspase-3表达水平同正常对照组细胞相比呈上升趋势,差异具有统计学意义（P＜0.05）;AFP蛋白表达水平呈下降趋势。结论：海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖具有抑制作用,其机制可能是激活Caspase-3,引起细胞凋亡和AFP蛋白表达水平下降所致。     

亚甲基蓝对冈田酸所致SK-N-SH细胞分化神经元损伤的保护作用

目的：考察亚甲基蓝（methylene blue,MB）对冈田酸（okadaic acid,OA）所致分化神经元损伤的保护作用,并探究其作用机制。方法：采用全反式维甲酸诱导SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞分化为成熟神经元细胞;OA诱导分化神经元损伤模拟阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease,AD）神经元损伤;磺酰罗丹明B法检测MB对神经元细胞活性的影响;Giemsa染色法观察细胞形态变化;Western blotting检测突触素蛋白、磷酸化tau蛋白（p-tau）的表达水平。结果：全反式维甲酸可浓度依赖性抑制SK-N-SH细胞增殖,10 μmol/L全反式维甲酸处理SK-N-SH细胞7 d后,细胞突触明显伸长,出现典型神经元特征;以40 nmol/L OA构建AD模型;MB可浓度依赖性抑制分化的SK-N-SH细胞活性,与OA组相比,随着MB浓度增加,细胞轴突长度与胞体长度比值增大,细胞突触变长,MB改善了OA所致的细胞突触损伤,突触素蛋白表达量明显升高（P＜0.01）,p-tau（Ser262）蛋白水平明显降低（P＜0.01）。结论：MB对OA所造成的分化SK-N-SH神经元细胞突触损伤有保护作用,可防止AD中tau蛋白的过度磷酸化。