桶装胀罐番茄酱中腐败菌分离纯化及鉴定研究

从胀罐番茄酱中分离出12株菌,并对这12株菌进行传统形态学、生理生化特性鉴定,得出在这12株菌株中有4株芽孢杆菌,3株酵母菌,3株链球菌,2株霉菌。经过反证实验得出导致番茄酱胀袋的主要微生物是芽孢杆菌,酵母菌和霉菌,并通过16S rDNA序列分析及构建系统发育树对优势菌群芽孢杆菌鉴定为4个种,分别为:枯草芽孢杆菌,短小芽孢杆菌,凝结芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌。确定了导致桶装番茄酱胀袋的腐败菌。     

中温酱牛肉中腐败菌的分离鉴定与防腐剂对其抑制作用

将真空包装中温酱牛肉置于25 ℃条件下贮藏,对其中的腐败细菌进行分离和鉴定,并通过管碟法分析肉制品中常用的7种防腐剂对这些菌株的抑菌作用。结果表明,从细菌总数平板上共分离出9株菌落形态不同的微生物菌株,根据形态学、生理生化特征和16S rRNA基因序列分析,发现其由5株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、3株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）和1株蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）组成。乳酸钠、葡萄糖酸-δ-内酯、双乙酸钠和乳酸链球菌素（Nisin）对9株腐败菌普遍具有较明显的抑菌活性,而山梨酸钾、亚硝酸钠和脱氢乙酸钠抑菌效果相对较差。     

新疆特色果蔬中乳酸菌分离鉴定及其抑菌活性

利用MRS,M17等4种培养基对采自新疆不同地区的8种水果中的乳酸菌进行分离鉴定,根据16S rRNA基因序列确定菌株的系统进化关系,并利用牛津杯法筛选具有抑菌活性的乳酸菌。共分离疑似乳酸菌90株,rep-PCR指纹图谱分型选出15株代表菌株,经16S rRNA基因序列分析,它们分别隶属于乳杆菌属(Lactobacillus)8株、明串珠菌属(Leuconostoc)6株、乳球菌属(Lactococcus)1株,共3个属,8个种。利用牛津杯法筛选出8株对枯草芽孢杆菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用的乳酸菌,为乳酸菌作为生物防腐剂应用到食品工业中奠定基础。     

利用16S rDNA序列及tuf-RFLP鉴定蒙古国发酵乳中的乳酸菌

运用16S rDNA序列分析和tuf-RFLP技术对采于蒙古国扎布汗省的25份发酵乳样中分离出的110株乳酸菌进行鉴定。首先将分离的110株乳酸菌的16S rRNA基因进行扩增,测序并构建系统发育树,初步鉴定为41株嗜热链球菌,40株瑞士乳杆菌,11株德氏乳杆菌保加利亚亚种,2株发酵乳杆菌,1株乳明串珠菌,2株肠膜明串肠膜亚种,1株乳酸乳球乳酸亚种和12株属于干酪族的菌株。由于干酪乳杆菌族的16S rDNA序列差异很小,故采用tuf-RFLP技术对这12株进行了进一步的验证,通过分离菌株与模式菌株tuf-RFLP图谱的比较分析,结果表明这12株菌均为干酪乳杆菌。     

1株分泌细菌素屎肠球菌ZJ19的筛选和鉴定

从浙江大学医学院附属妇产科医院的健康初生婴儿粪便中分离获得76株乳酸菌,通过琼脂平板扩散法筛选到1株乳酸菌菌株,该菌不仅对革兰氏阳性菌,如单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有抑菌活性,同时对大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血性杆菌等阴性菌也有较好的抑菌活性。通过排除有机酸、过氧化氢等的干扰后,该菌发酵液离心后的上清液仍有较强的抑菌活性,用蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶分别处理后该上清液均失去抑菌活性,由此确定该乳酸菌产生的抑菌活性物质具有蛋白质属性,为1种细菌素。该细菌素具有热稳定性,在pH 3.75,121℃热处理30 min,抑菌活性仍保持在80%以上。经过生理生化试验和16S rDNA序列分析,鉴定菌株为屎肠球菌,命名为Enterococcus faecium ZJ19。     

高效降胆固醇降甘油三酯乳酸菌的分离鉴定和功能分析

筛选出高效降胆固醇降甘油三酯(Triglyceride,TG)菌株,为新型药物、保健食品的研制提供优良菌株。从6种西北特有样品中筛选分离出乳酸菌,采用磷硫铁比色法测定菌株降胆固醇能力,并测定菌株降甘油三酯能力,通过抑菌实验、耐酸、耐胆盐及小鼠体内毒性试验研究菌株各项性能,利用生理生化及16S rDNA法对菌株进行鉴定。结果表明,本试验筛选出3株高效降胆固醇降甘油三酯乳酸菌,其中菌株ZL010降胆固醇、降甘油三酯效果最强,蛋黄中胆固醇的降解率为73.65%,高纯度胆固醇降解率为40.06%,甘油三酯降解率为5.10%。3株菌都具有很好的抑菌、耐酸、耐胆盐能力,菌株经生理生化及16S rDNA鉴定ZL005为耐久肠球菌(Enterococcus durans),ZL010为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),ZL016为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)。小鼠毒性试验表明,菌株无毒副作用,小鼠各脏器一切正常,菌株可用于降脂降胆固醇保健药品及功能食品的制备。     

哈族传统乳制品中乳酸菌多样性及抑菌性研究

从新疆阿勒泰地区哈萨克族传统发酵乳制品中分离得到11株乳酸菌,采用生理生化特性和16S rDNA序列同源性分析,对其进行鉴定。通过纸片法筛选,大多数乳酸菌对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aerugonosa)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)这5株指示菌有抑菌效果,其中1株干酪乳杆菌(TNG2)和4株瑞士乳杆菌(NS2-a,TNS1-1,NS1-1和NS2-1)对5株指示菌均有抑菌效果。     

抑制芽孢杆菌乳酸菌的筛选鉴定及其抗菌物质的分离纯化

从朝鲜族辣白菜中分离筛选得到1株对芽孢杆菌具有广谱抑菌活性的菌株JLY-7,该菌株发酵液对蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌等食品中常见的腐败性和致病性芽孢杆菌具有较强的抑制作用。对菌株JLY-7进行形态学特征、生理生化特征及16S rRNA序列分析,鉴定其为植物乳杆菌。利用正丁醇萃取、凝胶过滤层析(Sephadex LH-20)和半制备液相色谱纯化等手段对该菌株所产抗菌物质进行分离纯化,得到单一活性抑菌组分,经高分辨电喷雾电离质谱确定该抗菌物质的分子量为694.129 Da。通过蛋白酶处理结果表明,该抗菌物质对常见的蛋白酶均非常敏感。本研究可为乳酸菌抗菌物质控制食品中芽孢杆菌奠定理论基础。     

利用16S rRNA序列鉴定分离自芽菜中的芽孢杆菌

从宜宾芽菜中分离优势菌群,选取4株芽孢杆菌,分别为B1、B2、B3、B4.对4株菌的16S rRNA基因经PCR扩增测序,将测序结果同该属内菌株的16S rRNA序列作多序列比较,并建立芽孢杆菌属的系统发育树.结合细菌形态学生理生化特性鉴定结果,结果表明菌株B1、B3为枯草芽孢杆菌,菌株B2为解淀粉芽孢杆菌,菌株B4为乙酰微小杆菌.     

鸡汤中一株耐热菌的分离与鉴定

实验室自制肉制品(鸡肉汤)中分离得到一株耐热菌,进行菌落形态、生理生化特征鉴定,并采用Biolog快速鉴定结合16S r DNA序列分析两种方式鉴定,16S r DNA序列分析结果表明此菌株属于芽孢杆菌属,Biolog快速鉴定结果显示此菌株属于芽孢杆菌属中的枯草芽孢杆菌。因此导致鸡汤高温加热后仍腐败变质的菌株为枯草芽孢杆菌。     

蜂胶对肉制品中主要腐败菌的抑菌效果研究

对胀袋西式火腿中的优势腐败菌进行分离,并通过16SrRNA基因序列分析对分离菌株进行鉴定,综合分析确定各菌株分别为枯草芽抱杆菌、短小芽抱杆菌与生孢梭状芽抱杆菌;以分离菌株为目标菌,进行蜂胶抑菌实验.结果表明:蜂胶对分离菌株及菌株混合液均有明显抑菌效果,并确定最低抑菌浓度为:枯草芽孢杆菌(0.1g/100mL)、短小芽抱...     

香蕉植株上乳酸菌的分离鉴定、系统发育及抑菌特性分析

为分析香蕉（Musa nana Lour.）植株上乳酸菌的多样性,扩大植物源乳酸菌菌种库,并为今后的青贮饲料发酵业和食品发酵工业等提供植物源乳酸菌,本研究运用经典乳酸菌筛选法与分子生物学相结合方法从香蕉植株上分离纯化乳酸菌,并对其进行生理生化实验、生长速率测定实验和产酸速率测定实验;根据以上实验结果选出代表性菌株,对其进行测序、同源性分析和系统发育树的构建;利用其发酵产物对大肠杆菌（Escherichia coli）、沙门菌（Salmonella）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和单核细胞性李斯特菌（Listeria monocytogenes）等食品中常见的致病菌进行抑菌实验。结果表明：从香蕉植株上6?个部位共筛出44?株乳酸菌疑似菌株,5?株代表性菌株中有3?株（WFr6-4、WSt6-4、WL7-3）为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,1?株（WFl5-3）为戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）,1 株（WR7-1）为酪黄肠球菌（Enterococcus casseliflavus）。代表菌株都能够明显抑制致病菌,其中WL7-3抑菌效果最好。由此可见,在香蕉植株上乳杆菌属为优势菌种,乳酸菌种类较为多样,而且抑菌效果较好。     

新鲜哈密瓜汁中可培养细菌的分离鉴定及系统发育分析

采用稀释平板法从新鲜哈密瓜汁中分离出48株可培养细菌,通过传统的形态特征鉴定,将其归为10个类群。利用细菌通用引物PCR扩增10个类群代表菌株的16S rRNA基因,并进行序列测定。将获得的序列通过Blast在GenBank数据库中搜索相关菌株的同源性序列,采用Clustal1.81软件比对,用Mega4.1软件构建系统发育树。系统发育分析结合表型特征研究表明,新鲜哈密瓜汁中可培养细菌以芽孢杆菌属为优势微生物类群,主要为枯草芽孢杆菌Bacillus sub-tilis,其次为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis、苏云金芽孢杆菌Bacillus mojavensis。此外还有铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa、洋葱伯克霍尔德氏菌Burkholderia cepaciastrain、鲍曼不动杆菌Acinetobacter baumannii,以及肠球菌属Enterococcussp、克雷伯氏菌属Klebsiellasp的菌株。     

浓香型皇台大曲可培养细菌群落结构及其产淀粉酶的研究

采用稀释平板法,从浓香型皇台大曲中分离纯化出73株细菌菌株,经PCR扩增其16S rDNA并测序,比对分析发现这些纯化的细菌菌株中有23株16S rDNA序列各异的可培养细菌,这些菌株分别为Bacillus licheniformis16株、Bacillus subtilis2株、Bacillus amyloliquefaciens1株、Bacillus cereus1株、Bacillus atrophaeus1株、Bacillus sonorensis1株和Brevibacillus sp.1株;采用透明圈法和液态发酵法对大曲中可培养细菌产淀粉酶性能进行检测,结果表明Bacilluslicheniformis、Bacillus subtilis和Bacillus cereus的一些菌株产淀粉酶的活性较高,其中,Bacillus licheniformis的数量最多,是重要的白酒酿造功能菌。     

Rapid identification and classification of bacteria by 16S rDNA restriction fragment melting curve analyses (RFMCA)

The aim of this work was to evaluate restriction fragment melting curve analyses (RFMCA) as a novel approach for rapid classification of bacteria during food production. RFMCA was evaluated for bacteria isolated from sous vide food products, and raw materials used for sous vide production. We identified four major bacterial groups in the material analysed (cluster I-Streptococcus, cluster II-Carnobacterium/Bacillus, cluster III-Staphylococcus and cluster IV-Actinomycetales). The accuracy of RFMCA was evaluated by comparison with 16S rDNA sequencing. The strains satisfying the RFMCA quality filtering criteria (73%, n=57), with both 16S rDNA sequence information and RFMCA data (n=45) gave identical group assignments with the two methods. RFMCA enabled rapid and accurate classification of bacteria that is database compatible. Potential application of RFMCA in the food or pharmaceutical industry will include development of classification models for the bacteria expected in a given product, and then to build an RFMCA database as a part of the product quality control.     

利用16S rDNA序列分析鉴定一株产抗菌物质的微生物菌株

从桃子上分离纯化得到1株产抗菌物质的菌株,命名为fmb3菌,通过抑菌实验发现该菌对革兰氏阳性菌蜡样芽孢杆菌、革兰氏阴性菌大肠埃希菌和真菌扩展青霉等3种常见食品病原菌具有显著的抑菌效果。利用16SrDNA分析对该菌作了系统进化鉴定,首先提取fmb3菌基因组DNA,根据不同种属的细菌的16SrDNA序列两端的保守性设计通用引物,对fmb3菌16SrDNA片断进行PCR扩增,对扩增得到的目标片段测序,并且利用NCBIBLAST对测序结果进行比对,构建系统进化树进行分析,初步确定该菌属于枯草芽孢杆菌。     

醋醅中细菌菌株的分离鉴定及系统学分析

对取自陕西省的醋醅中分离得到的菌株进行16S rRNA基因序列的系统学分析.通过聚合酶链式反应(PCR)的扩增,结合16S rRNA基因序列的同源性分析,比较未成熟醋醅样品与已成熟醋醅样品中细菌组成的差异,并构建两者的系统发育树.结果表明,未成熟醋醅样品呈现较高的细菌多样性,并且在设定一个假定阈值后,2个醋醅样品中的优势种群均为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),仅在数量上存在差异.     

防治十字花科作物根肿病的油菜内生细菌分离与鉴定

为探寻对十字花科根肿病有生防作用的菌株,从油菜根内组织分离内生细菌,通过根肿菌孢子裂解、盆栽防病试验证明其功能,并经形态学、生理生化和16S RNA基因序列鉴定其分类地位。研究结果表明,从油菜品种KTl004和Y05-84-5-1根部分离出51株内生菌,其中YN201305和YN201310对十字花科根肿病菌有明显裂解和抑制作用。盆栽试验表明,应用浓度10^7 CFU／mL的菌液,在播种时和播种后每间隔5d浇灌1次,共浇灌4次。45d苗龄调查结果,二者对大白菜品种鸿源83的根肿病防治效果分别达65．12％和77．92％。经鉴定,YN201305为短小芽孢杆菌,YN201310为枯草芽孢杆菌。     

氨基酸液生产过程中污染茵的鉴定

从氨基酸液中分离出8株菌,命名为ZH．1—zH一8。7株属十细菌,1株属于霉菌。利用16SrDNA区序列分析并结合彤念学、生邪学特征对细菌菌株进行鉴定。其中,ZH-4为Psychrobacter,ZH-5为Lysinibacilus,ZH-6为Acrococcusviridians,ZH-7为Bacilluspumilus;ZH．3与Planococcus citrcus,ZH-2与Kocuriapalustris,ZH-1与Bacilluspumflus可能为近缘种,有待进一步鉴定。牛弹牛化鉴定结粜与模式菌株相吻合的菌株为ZH-2～ZH-7。18SrDNA区序列分析结合形态学特征鉴定ZH一8为Pcnicillium。ZH-1-ZH-8存GcnBank的登录号依次为JQ819720-JQ819726,JX192597。