免疫印迹法对四种海虾主要过敏原的鉴定

以凡纳滨对虾、中国明对虾、刀额新对虾以及虾蛄4 种海虾为研究对象,对这4 种海虾过敏原蛋白组分进行研究。首先利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对4 种海虾过敏原组分进行分析,然后经免疫印迹鉴定其主要过敏原。结果显示：凡纳滨对虾的主要过敏原为99、33、19、14kD 的蛋白质组分;中国明对虾的主要过敏原为39、33、28kD 的蛋白质组分;刀额新对虾的主要过敏原为33kD 和24kD 的蛋白质组分;虾蛄的主要过敏原为56kD 和48kD的蛋白组分。     

凡纳滨对虾过敏原结构与性质的研究进展

凡纳滨对虾是一种营养价值高且具有致敏性的水产品,其引发的过敏反应逐渐引起研究者的重视。本文综述了凡纳滨对虾中4 种分子质量在20～80 ku范围的过敏原蛋白（即原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌球蛋白轻链以及肌浆结合蛋白）的性质、分子组成、空间结构及其各蛋白的致敏表位等诸多方面,这些将十分有益于更好了解这些过敏原蛋白的致敏机理以及降低过敏原性。     

凡纳滨对虾主要过敏原鉴定及酶法消减技术的研究

以凡纳滨对虾为研究对象,用免疫印迹法检测其主要过敏原蛋白组分;用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对凡纳滨对虾水溶性蛋白水解,消减过敏原。并且通过间接酶联免疫吸附实验和致敏豚鼠全身免疫实验对过敏原消减情况进行检测,确定酶法消减过敏原条件。结果表明,凡纳滨对虾的主要过敏原为99、33、19kD 以及14kD 的蛋白质组分。胰蛋白酶最佳水解条件为：pH8.0,酶与底物比1:100(m/m,下同),45℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;木瓜蛋白酶最佳水解条件为pH6.5,酶与底物比1:100,60℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;菠萝蛋白酶最佳水解条件：pH7.5,酶与底物比1:100,55℃,底物质量浓度5g/100mL,水解时间3h。并且胰蛋白酶水解产物和木瓜蛋白酶水解产物对致敏豚鼠的全身免疫实验安全性很好。     

果糖和木糖在美拉德反应中对虾类过敏原活性影响的研究

目的：研究果糖和木糖在美拉德反应中对虾类过敏原活性的影响。方法：选取果糖和木糖两种还原糖,在一定的条件下与虾类过敏原反应,通过检测虾类过敏原蛋白的分子量、赖氨酸含量及免疫活性的变化,研究美拉德反应对虾类过敏原免疫活性的影响。结果：木糖和果糖在与虾类过敏原反应后使得其分子量增高,并且作用时间越长,分子量增加越多;但赖氨酸含量的变化没有明显的规律性;酶联免疫的结果显示美拉德反应12h时果糖能够使虾过敏原活性增加44%,但随着时间的延长,虾过敏原的活性回复到初始的水平;而木糖对虾过敏原的免疫活性的影响在10%以内。结论：果糖和木糖在美拉德反应中不能有效降低虾过敏原的免疫活性。     

牡蛎精氨酸激酶稳定性及同源性分析

目的鉴定从牡蛎中提取的天然蛋白精氨酸激酶(arginine kinase,AK),并了解其基本性质及同源性。方法利用硫酸铵盐析、阴离子交换从牡蛎中分离纯化出蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和圆二色(CD)光谱确定相对分子质量和二级结构,并研究其稳定性;用生物信息学软件对牡蛎AK和其他11种甲壳类、软体类动物过敏原的AK氨基酸序列进行比对,分析它们之间的同源性。结果分离纯化得到的相对分子量为40 kDa的天然蛋白为牡蛎AK,AK既不耐热也不耐强酸。牡蛎AK与软体类动物过敏原AK氨基酸序列的同源性较高,与甲壳类动物氨基酸序列的同源性在55%～60%之间。结论从牡蛎中提取得到天然AK,基本了解牡蛎AK的稳定性和同源性,并为牡蛎AK致敏性和致敏机制的全面研究打下基础。     

低压静电场结合气调包装对凡纳滨对虾冰温贮藏期品质的影响

为了延长凡纳滨对虾冰藏（（－1±1）℃）货架期,并延缓贮藏期间的品质劣变,通过比较不同贮藏条件下凡纳滨对虾的菌落总数、挥发性盐基氮含量、pH值、K值、汁液流失率、白度、感官评分及流变学特性的变化,研究低压静电场（2.5 kV、50 Hz）结合气调包装（体积分数75% CO2＋25% N2）对冰温下凡纳滨对虾的保鲜效果。结果表明：冰温下低压静电场结合气调包装相较于仅冰温、低压静电场结合冰温和气调包装结合冰温贮藏,对凡纳滨对虾的保鲜效果最好,能明显抑制冰温贮藏期微生物引起的腐败变质,对不良感官特性有所改善,且能延缓核苷酸的降解,货架期可达14 d,比空白组（普通空气、低温贮藏）延长了8 d;该条件下凡纳滨对虾色泽和感官评分良好,汁液流失率在整个贮藏过程中均低于3%,虾肉的软化在贮藏后期也有所延缓。因此,低压静电场可作为一种新技术用于提升凡纳滨对虾的保鲜。     

虾类主要过敏原及其检测技术的研究进展

虾是一种肉质鲜美,富含蛋白质的食物,但作为主要致敏原之一,可引起不同程度的过敏反应。该文介绍虾类的过敏机制,虾类主要过敏原（原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌球蛋白轻链、肌质钙结合蛋白、丙酮酸激酶、血蓝蛋白）,并综述了近几年虾过敏原检测技术的研究进展,主要包括免疫学方法、色谱与质谱联用技术、分子生物学方法和传感器技术。对虾过敏原检测技术未来的发展进行展望,以期为进一步的研究提供参考。     

凡纳滨对虾在二氧化碳麻醉无水保活过程中呼吸代谢及免疫的变化

为了研究凡纳滨对虾在二氧化碳麻醉无水保活过程中呼吸代谢及免疫的变化,本文分析了未处理(对照)、无水保活和复苏3种状态下,凡纳滨对虾葡萄糖(Glu)、乳酸(LD)及鳃中3种糖酵解关键酶、有氧代谢和无氧代谢关键酶、免疫相关酶及血淋巴细胞总数(THC)变化。结果显示:无水保活中对虾Glu浓度低于对照组,LD浓度则显著高于对照组;己糖激酶(HK)、果糖磷酸激酶(PFK)和丙酮酸激酶(PK)这3种糖酵解关键酶活力均高于对照组;反映有氧代谢水平的琥珀酸脱氢酶(SDH)活力低于对照组,反映无氧代谢水平的乳酸脱氢酶(LDH)则相反;对虾THC随着保活时间延长显著低于对照组(p<0.05),超氧化歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活力先低于对照组后高于对照组。复苏后,HK、PK、SOD和POD恢复到对照组水平,Glu、LD、PFK、SDH、LDH和THC均与对照有显著差异。无水保活过程中,凡纳滨对虾糖酵解加快以及无氧代谢加强,同时体液免疫功能正常发挥作用,无水保活8 h未造成其代谢及免疫功能紊乱。本研究结果可为对虾类无水保活技术提供理论依据。     

4-己基间苯二酚对凡纳滨对虾3 种腐败菌的抑菌活性及虾品质的影响

为研究4-己基间苯二酚（4-hexylresorcinol,4-HR）的抑菌活性及对虾品质的影响,通过体外及接菌实验分别评价了其对来源于凡纳滨对虾的麦芽糖肉食杆菌（Carnobacterium maltaromaticum）、腐败希瓦氏菌（Shewanella putrefaciens）和杀鲑气单胞菌（Aeromonas salmonicida）的抑菌活性及其对凡纳滨对虾冷藏期间品质变化的影响。牛津杯法和抑菌生长曲线显示4-HR能够显著抑制这3?种腐败菌的生长。通过对比处理前后腐败希瓦氏菌的电导率和流式细胞术分析,发现其抑菌机理可能与增强细菌膜通透性有关。将0.25?mg/mL的4-HR溶液涂膜于凡纳滨对虾上,发现在冷藏期间（4?℃）凡纳滨对虾的黑变程度较低而白度值较高,表明0.25?mg/mL?4-HR能有效抑制凡纳滨对虾的黑变。但涂膜4-HR的凡纳滨对虾适冷菌总数和挥发性盐基氮值仅在贮藏的前4?d低于未涂膜的对照组;而到贮藏终点时,涂膜4-HR的凡纳滨对虾适冷菌总数较对照组高0.14（lg（CFU/g））。结果表明尽管4-HR对3?种腐败菌具有良好的体外抑菌活性,但在凡纳滨对虾贮藏过程中4-HR优先作为防黑变剂抑制对虾黑变。     

凡纳滨对虾肝胰腺组织化学过程参数的优化

鉴于肝胰腺组织在凡纳滨对虾生长和免疫方面的重要生理意义,以及与对虾冷藏期间品质劣变的密切相关性,本研究通过比较不同条件下石蜡切片对凡纳滨对虾肝胰腺组织HE染色结果的影响,确定其组织化学适宜参数。凡纳滨对虾肝胰腺用Carnoy固定液在室温下固定12 h,用70%,80%,95%及无水乙醇Ⅰ各脱水30min,再继续用无水乙醇Ⅱ脱水40 min,二甲苯40 min透明2次,充分浸蜡后切片(8μm),将切片经苏木精染色40 min,盐酸乙醇分化1 s,伊红复染5 min。显微观察结果显示:细胞染色均匀,细胞核呈蓝紫色,细胞质呈紫红色,背景清晰。     

高体积分数CO2气调包装对冷藏凡纳滨对虾品质的影响

为研究高体积分数CO2气调包装对凡纳滨对虾品质的影响,以空气包装为对照,分别采用100% CO2、80% CO2＋20% N2和50% CO2＋10% O2＋40% N2气调包装对虾,并在（4±1）℃条件下贮藏10 d,期间每2 d测定对虾细菌总数及其挥发性盐基氮值、肌肉纤维长度、硬度、多酚氧化酶活性、白度、感官评分的变化。结果表明：在冷藏条件下,高体积分数CO2气调包装能有效抑制细菌的生长繁殖和多酚氧化酶的活性,且CO2体积分数越高抑制效果越明显;但100% CO2处理的对虾与80% CO2组相比,其样品挥发性盐基氮值较高,肌肉纤维长度和硬度均较小,感官品质较差;50% CO2组对虾白度较低,与空白对照组差异不明显。因此,所选取高体积分数CO2气调包装中,80% CO2组的保鲜效果最佳,能有效延长凡纳滨对虾的冷藏货架期至8 d。     

超高压结合酶法消减南美白对虾虾肉中的过敏原

以虾肉为原料,研究超高压对酶法消减南美白对虾虾肉过敏原的强化作用。将南美白对虾去头、去尾、去壳、去肠线后用匀浆机匀浆,制成虾肉酱,分别采用超高压法、超高压处理后再用木瓜蛋白酶水解、超高压条件下直接酶解的方法消减其过敏原,用间接酶联免疫吸附法检测过敏原消减效果,确定消减过敏原的条件。结果表明：采用超高压法处理,其最佳条件为：压力200Mpa、温度40℃、保压时间35min,此条件下产物与抗体反应的OD492nm值为0.1986;先超高压处理再用木瓜蛋白酶水解,其水解的最佳条件为：底物质量浓度10g/100mL、温度60℃、酶与底物质量比1:200,此条件下产物与抗体反应的OD492nm值为0.0487;超高压条件下直接用木瓜蛋白酶处理,其最佳条件为：压力300Mpa、温度40℃、保压时间35min,产物与抗体反应的OD492nm值为0.0516。由此可见,超高压处理对南美白对虾过敏原有消减作用,先超高压处理再用木瓜蛋白酶水解和超高压条件下直接酶处理对过敏原的消减效果更好。     

鸡胸软骨Ⅱ型胶原免疫活性肽的制备及其性质

以水解度为指标,优化了中性蛋白酶酶解鸡胸软骨Ⅱ型胶原的条件,在此基础上制备不同水解度Ⅱ型胶原酶解复合物,并以淋巴细胞增殖率为指标对其免疫活性进行研究。结果表明,中性蛋白酶的酶解能力最强,其最佳酶解条件为：酶解温度50 ℃、pH 7.5、底物质量浓度25 mg/mL、加酶量40 U/mg、酶解时间150 min。当Ⅱ型胶原在水解度为18%时,其对淋巴细胞的增殖活性达到58.69%。Ⅱ型胶原酶解复合物的质量浓度对淋巴细胞的增殖率也有显著影响,当其质量浓度达到1 mg/mL时,对淋巴细胞增殖能力达到最大。免疫活性较高的Ⅱ型胶原酶解复合物的分子质量主要分布于1 000～180 D范围内,占其总含量的75.21%。     

超高压结合酶法消减南美白对虾虾仁的致敏性

以南美白对虾虾仁为原料,研究超高压结合酶法对虾仁致敏性的消减效果。将南美白对虾去头、尾、壳、肠线后,采用超高压法和超高压结合酶法消减其致敏性,用间接酶联免疫吸附法检测致敏性消减效果,确定消减条件。结果表明：采用超高压法处理最佳条件为压力600 MPa、温度40 ℃、保压时间30 min,此条件下消减率为45.66%;超高压结合胰蛋白酶法最佳条件为压力200 MPa、温度40 ℃、保压时间30 min、胰蛋白酶加酶量3 000 U/mg,此条件下消减率为95.27%。由此可见,超高压法对虾仁致敏性有消减作用,超高压结合酶法对虾仁致敏性消减的效果更好。     

菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum）软体部位含氮物的组成及其分布

从食品原料学角度出发,为系统阐述菲律宾蛤仔的工艺学特性,以含氮物质为出发点,蛋白质为重点,对其各个软体解剖部位的质量组成、一般化学组成、含氮物分布及蛋白质组分等进行了分析讨论。结果表明：菲律宾蛤仔可食部分占原料20%左右,各个软体组织（足、闭壳肌、外套膜、水管、鳃、内脏团）含有水分74.01%～80.07%,其他化学组成为干基,粗蛋白29.19%～43.46%、总糖12.46%～30.75%、粗脂肪1.61%～6.84%和灰分6.69%～11.10%;各组织部位的含氮组分分布比例依次为：非蛋白氮14.7%～26.42%、水溶性蛋白12.55%～19.17%、盐溶性蛋白34.83%～50.4%、碱溶性蛋白17.49%～25.06%及基质蛋白2.19%～10.23%;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示：菲律宾蛤仔软体部位不同组织、不同组分的蛋白图谱有所差异。水溶性蛋白分子质量较小,在100 kD以下;盐溶性蛋白种类丰富,在200、100、45、35、20 kD附近有明显条带;碱溶性蛋白仅在200、100、45 kD附近有4 条明显条带;基质蛋白分子质量分布范围较宽,主要集中在200 kD以上和45 kD区域。     

牛乳酪蛋白检测方法研究进展

牛乳含有丰富的蛋白质,是比较理想的营养物质,但也是常见的过敏原之一。酪蛋白是牛乳中含量最高的蛋白,常作为牛乳过敏检测的主要参考指标之一。其检测方法主要包括基于免疫学的方法、聚合酶链式反应技术（polymerase chain reaction,PCR）、毛细管电泳分析、色谱法、质谱法等,本文就其检测方法的原理、特性及实际应用进行综述,并对未来检测的发展方向进行展望。     

利用高效液相色谱-飞行时间质谱和高效液相色谱-三重四级杆质谱检测南美白对虾的过敏原

为检测南美白对虾的过敏原,并寻找表征过敏原的特征肽段,采用测序级胰蛋白酶对南美白对虾的蛋白进行酶解,经高效液相色谱-飞行时间质谱的分离检测和数据库检索,并建立了三重四级杆多反应监测(MRM)快速检测表征过敏原肽段的方法。结果表明,南美白对虾中共检测出7种过敏原,分别为原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌球蛋白轻链、血蓝蛋白亚基L1、血蓝蛋白亚基L2、血蓝蛋白亚基L3、肌钙蛋白C1,对应的肽段条数分别为214、16、84、145、225、163和93条。MRM结果显示,该方法灵敏度高、选择性好,为分析南美白对虾过敏原提供了参考。     

利用低温聚合酶链式反应技术提高大豆超氧化物歧化酶活性

目的：利用低温聚合酶链式反应对大豆超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）的活性进行改良。方法：将6 种在较低退火温度下扩增出的超氧化物歧化酶基因插入到表达载体pREP5N上,构建pPM1、pPM2、pPM3、pPM4、pPM5、pPM6表达载体,转入大肠杆菌后得到工程菌,诱导其在大肠杆菌中进行蛋白表达,并进行酶活力测定,筛选高酶活力菌株。结果：将已克隆的目的基因序列与已知的大豆MnSOD基因序列比对分析,一致性平均为86.57%,氨基酸序列同源性平均为82.58%。对已获得的6 种工程菌进行蛋白质提取,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示表达产物的分子质量约为26 kD。经1%差异水平分析,改良后的SOD酶活力均有极显著提高,平均比对照菌株的酶活力提高1.95 倍。结论：本实验证明低温聚合酶链式反应是改变酶活性的一种有效方法,为超氧化物歧化酶在生产中的应用提供了技术支持。