霍山石斛苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及基本性质的研究

对霍山石斛(Detrdrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng)中的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase,PAL EC.4.3.1.5)进行了部分分离纯化和性质研究,取组织培养试管苗经过冰浴研磨、硫酸铵分级沉淀、DE-52阴离子交换层析,分离纯化苯丙氨酸解氨酶.经过测定,苯丙氨酸解氨酶的纯化倍数为2.33,蛋白质得率0.41%,酶得率1%.霍山石斛苯丙氨酸解氨酶在硼酸缓冲液中最适PH为8.4,PAL最适反应温度为45℃.霍山石斛苯丙氨酸解氨酶的最适底物浓度为2mmol/L,有两个Km值,即Km1为0.4425×10-2mol/L,Km2为0.847×10-4mol/L.     

反相高效液相色谱法检测鱼肉中的ATP关联物

建立同时测定鱼肉组织中6种ATP关联物的高效液相色谱方法。采用反相高效液相色谱分离模式,使用Sepax Bio-C18(250mm×4.6mm,5μm,200A。)色谱柱,以60mmol/L磷酸二氢钾、60mmol/L磷酸氢二钾组成的缓冲液(pH6.68)为流动相等比洗脱,流速0.6mL/min;紫外检测波长为254nm,带宽为16nm。6种组分在20min内基线分离,平均加标回收率在98.3%～104.1%之间,线性范围为1～400mg/L,检出限在15～40μg/L之间。该方法简便、准确,易于移植。     

高效毛细管电泳同时检测荸荠中的4种黄酮类物质

采用毛细管电泳法分析荸荠中的黄酮类化合物,测定了芦丁、槲皮素、山奈酚和绿原酸的含量。研究了缓冲液的种类、离子浓度、pH值、分离电压和运行温度等一系列电泳参数,得出优化的电泳条件为:缓冲液为20mmol/L磷酸二氢钾-20 mmol/L硼砂(pH 7.8),紫外检测波长202 nm,分离电压24 kV,运行温度30℃。在此条件下,上述4种物质在7 min内即可分离,并在3.125～100 mg/L内有良好的线性关系,相关系数R2均在0.999以上,相对标准偏差(RSD):迁移时间为0.78%～0.98%;峰面积为6.5%～8.6%。在5,10,20 mg/kg的添加水平下,4种物质的加标回收率为80%～98%。该方法简便、快速、重现性好,可推广应用于植物中4种黄酮类物质的同时检测。     

毛细管电泳法手性拆分橙皮苷对映体

通过考察电泳缓冲液pH、环糊精种类和浓度、有机溶剂浓度及操作电压和温度对分离的影响,建立了一种简便快捷的高效毛细管电泳拆分橙皮苷对映体的方法。实验结果表明,以12mmol/L的羟丙基-β-环糊精为手性选择剂,200mmol/L的硼酸/甲醇(V:V=7:3,pH9.7)为电泳缓冲溶液,23kV的分离电压,在30℃下可使橙皮苷对映体达到基线分离,分离度为1.50。分析方法快速简单。     

钛胶柱反相高效液相色谱法测定饮料中的阿斯巴甜

建立基于钛胶柱对无糖可乐中甜味剂阿斯巴甜的高效液相色谱快速测定方法。色谱条件：分离柱为Titania Sachtopore-RP柱(250mm×4.6m,5μm),柱温70℃,流动相为V[15mmol/L磷酸铵缓冲溶液,(NH4)2HPO4:NH4H2PO4＝6:4;10mmol/L氟化铵]-V(甲醇)＝70:30,流速1mL/min,检测波长217nm。线性范围为10～2500μg/mL,最低检出限为0.08μg/mL,回收率为92.5%～97.4%,相对标准偏差(n＝8)小于0.72%。本法准确度和精密度均可满足饮料中阿斯巴甜的测定要求。     

青霉素酰化酶制备光学纯β-苯丙氢酸的HPLC分析

建立了青霉素酰化酶制备光学纯β-苯丙氨酸(BPA)过程中各成分的HPLC分析方法.用Zorbax XDB-C18柱在流动相为含35%(v/v)乙腈的7mmol/L pH 3.0磷酸缓冲液(含SDS 0.68g/L),流速为1.0mL/min,柱温30℃,检测波长为210nm等条件下,四种物质苯乙酰胺、BPA、N-苯乙酰-BPA、苯乙酸可以被有效分离,且在≤0.2mg/mL浓度下,四种物质含量与出峰面积均呈良好的线性相关.用Chirobiotic T和Chirobiotic R手性柱分别对手性物质N-苯乙酰-BPA和BPA的对映异构体进行了分离检测,并确定了最佳的洗脱条件.     

高效毛细管电泳-紫外检测法分离测定微波复合酶法大豆蛋白水解物中的多肽

以高效毛细管电泳(HPCE)无胶筛分方式(MEKC)对微波复合酶法大豆蛋白水解物中的多肽成功地进行了分离和检测,以100mmol/L Tris/HCl(pH8.5) 0.1%SDS 0.1%PEO为缓冲液,运行电压10kv。文章对分离的机理作了探讨,并对实验中出现的现象作了讨论。     

高效毛细管电泳法测定酱油中5′-单磷酸核苷酸

建立高效毛细管电泳同时分离测定酱油中两种核苷酸鸟嘌呤-5′-单磷酸(GMP)和次黄嘌呤-5′-单磷酸(IMP)的方法。电泳条件:以50μm×60.2cm(有效长度50cm)未涂敷石英毛细管为分离柱,30mmol/L硼砂+30mmol/L碳酸钠+60mmol/L羟丙基-β-环糊精为分离缓冲溶液,50mmol/L醋酸溶液为样品介质,检测波长为254nm。GMP及IMP的校正峰面积与质量浓度在5～100mg/L范围内具有良好线性关系,线性相关系数分别为0.9998和0.9997,检出限均为2mg/L,定量限均为5mg/L。用该法测定了9种酱油,并与文献报道的高效液相色谱法的结果进行比较,结果满意。     

基于蜂蜜中氨基酸的毛细管电泳指纹图谱构建

通过以细菌纤维素(Bacterial cellulose,BC)为流动相添加剂,提高毛细管电泳的分离能力,构建基于蜂蜜中氨基酸的指纹图谱。系统考察了电泳缓冲液种类、离子强度、pH值、分离电压及BC添加量对氨基酸分离效果的影响。结果表明:以30 mmol/L,p H 9.8硼砂-磷酸盐缓冲液为电泳缓冲液,BC添加量为0.5%,25 kV作为分离电压时,17种常见氨基酸的异硫氰酸荧光素的衍生物能在25 min内实现基线分离。最优电泳条件下,17种氨基酸的异硫氰酸荧光素的衍生物在相应浓度范围内线性关系良好,相关系数大于0.993,检测限为2.5×10~(-4)μmol/L~30.0×10~(-4)μmol/L。精密度试验表明:17种氨基酸衍生物峰面积相对标准偏差(Relative standard deviations,RSDs)(n=11)分别为1.84%~5.50%(日间,n=5)和0.94%~3.10%(日内,n=11)。洋槐蜜中17种氨基酸添加回收率在81.10%~96.15%,RSDs(n=3)小于8.22%。     

青霉素酰化酶制备光学纯β-苯丙氨酸的HPLC分析

建立了青霉素酰化酶制备光学纯β-苯丙氨酸(BPA)过程中各成分的HPLC分析方法。用ZorbaxXDB-C18柱在流动相为含35%(v/v)乙腈的7mmol/LpH3.0磷酸缓冲液(含SDS0.68g/L),流速为1.0mL/min,柱温30℃,检测波长为210nm等条件下,四种物质苯乙酰胺、BPA、N-苯乙酰-BPA、苯乙酸可以被有效分离,且在≤0.2mg/mL浓度下,四种物质含量与出峰面积均呈良好的线性相关。用ChirobioticT和ChirobioticR手性柱分别对手性物质N-苯乙酰-BPA和BPA的对映异构体进行了分离检测,并确定了最佳的洗脱条件。     

芡种壳乙酸乙酯提取物的毛细管电泳法分离

芡植株各组织器官中均含有丰富的酚类物质,其中以实种壳中多酚含量最高(183.037mg/g,干基),其次为块根、叶及芡果皮。为分析芡种壳乙酸乙酯提取物的化学成分,采用高效毛细管电泳(HPCE)法对芡种壳乙酸乙酯提取物进行分离,并以标准物为对照,对其主要成分进行初步定性。结果显示,HPCE法可用于芡种壳乙酸乙酯提取物(EAE)中多酚类物质的分离,其分离条件为:弹性石英毛细管柱(总长42.5cm,有效长度34cm),电泳缓冲液由200mmol/L硼酸、5.4mmol/Lβ-CD、10mmol/LKH2PO4和27.5%乙腈组成,检测波长230nm,压力进样50mbar,5s,电压20kV,柱温20℃。初步分析认为,芡种壳乙酸乙酯提取物中基本不含儿茶素、表儿茶素和芦丁,含少量绿原酸组分。     

AQC柱前衍生化RP-HPLC法测定大蒜中蒜氨酸含量

建立了一种快速、可靠的检测大蒜中蒜氨酸(alliin)的方法。采用6- 氨基喹啉基-N- 羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)试剂,在pH8.5 的缓冲液中对大蒜中蒜氨酸进行柱前衍生,使用Waters Symetry C18 分析柱(150mm ×3.9mm,5μm),以pH5.5 的0.02mol/L 磷酸二氢钾- 乙腈 (75:25,V/V)为流动相,流速为0.8ml/min,激发波长为250nm,发射波长为395nm 时荧光检测。蒜氨酸在1～16mg/L 范围内浓度与峰面积线性关系良好,线性相关系数为0.99,检测限为1mg/L,回收率>95%。     

高效毛细管电泳法快速测定乳制品中三聚氰胺

建立高效毛细管电泳快速测定乳制品中三聚氰胺含量的方法。样品用100mmol/L 醋酸提取,以150mmol/L磷酸二氢钠为分离缓冲液,以未涂敷石英毛细管(20cm(有效长度)× 50μm)为分离柱,于235nm 波长处检测,采用峰面积外标法定量。实验研究缓冲溶液的浓度、分离溶液pH 值及样品前处理条件对三聚氰胺准确定量的影响。方法检出限为0.06mg/L,定量限为0.2mg/L,线性范围为0.2～200mg/L,线性相关系数r=0.9998。1.0、10mg/L 添加水平的平均加标回收率分别为93.0% 及84.3%。该方法简单快速,6min 之内即可完成一次样品分析(预清洗2min,分离4min)且试剂消耗少、环境友好及检测准确,适合于各类乳制品中三聚氰胺的常规测定。     

用高效液相色谱(HPLC)法测定饮料中维生素C的含量

建立了一种饮料中Vc的反相高效液相色谱 (HPLC)测定法。高效液相色谱系统采用Shim packVP ODSC 18柱 ,甲醇 /磷酸二氢钾缓冲液 =75 /2 5 (V/V)作流动相 ,流速为 1 0ml/min ,检测波长为 2 6 6nm。Vc在浓度 0 0 5 0～ 0 30 0mg/ml内有良好的线性关系 ,线性回归方程为y =4845 5 716 96 3x 772 6 0 10 (R =0 9999)。分析方法中回收率平均为 99 2 3%,标准偏差s =0 0 0 18,变异系数CV =1 90 %。Vc的最低检测限为 2 5 0× 10 7mg。     

高效毛细管电泳用于检测黄花菜中4 种活性物质

使用高效毛细管电泳法,对黄花菜中活性化合物芦荟大黄素、山柰酚、绿原酸和槲皮素进行检测。在最佳电泳条件为10 mmol/L Na2B4O7-H3BO3缓冲溶液、pH 9.15、紫外检测波长224 nm、30 kV的外加电压条件下进样5 s,4 种物质在6 min内实现了分离,4 种物质的线性范围分别为0.02～0.21、0.01～0.90、0.01～0.99、0.01～0.90 mg/mL,线性相关系数在0.997 6～0.999 6之间,检出限分别为2.45×10－5、1.41×10－5、1.78×10－5、8.63×10－6 mg/mL（RSN=3）,平均回收率在97.5%～101.2%之间,相对标准偏差不大于4.76%。实验结果表明该方法快速准确,适合用于黄花菜中活性物质的检测。     

CE和HPLC测定水源水体中微囊藻毒素方法比较

利用毛细管电泳（capillary electrophoresis,CE）仪结合紫外-可见光二极管阵列检测器检测技术建立水体中痕量微囊藻毒素的检测新方法。通过与GB/T 20466-2006《水中微囊藻毒素的测定》高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）方法对比分析,进行2 种检测技术的评价。CE检测条件为：毛细管柱（60 cm×75 μm i.d.）,有效长度为44 cm,分离缓冲溶液为12 mmol/L硼酸盐（pH 9.0）,分离电压25 kV,检测波长238 nm,压力6 895 Pa流体动力学进样;优化后的HPLC检测条件为：C18色谱柱（250 mm×4.6 mm i.d.,5 μm）,甲醇-磷酸盐缓冲溶液（60∶40,V/V）为流动相,检测波长238 nm,柱温度35 ℃,流速1 mL/min。结果表明：CE对3 种微囊藻毒素MC-RR、MC-LR和MC-YR的检出限分别是0.16、0.20 μg/mL和0.24 μg/mL,HPLC对3 种微囊藻毒素的检出限分别为0.020、0.079 μg/mL和0.052 μg/mL,这2 个方法的灵敏度相差1 个数量级;加标回收率分别92.5%～106.0%和99.6%～102.5%,CE对应的保留时间和峰面积的精密度相对标准偏差为0.53%～0.64%和2.67%～3.29%;HPLC法的保留时间和峰面积精密度相对标准偏差为0.16%～0.53%和0.80%～1.53%。检测同一水样中微囊藻毒素含量,CE检测结果和HPLC结果之间差异不显著（P＞0.05）。     

钛胶RP-HPLC法同时测定5 种维生素

采用钛胶反相色谱柱,建立高效液相色谱法同时测定5 种维生素：烟酸、生物素、烟酰胺、叶酸和钴胺素含量的检测方法。研究5 种维生素的保留行为与磷酸缓冲盐pH值、缓冲盐类型及浓度、柱温和流速的关系,得出了最优色谱条件：于波长210 nm处检测生物素和钴胺素,于波长270 nm处检测烟酸、烟酰胺和叶酸,磷酸盐pH 7.0,浓度5.0 mmol/L,柱温50 ℃,流速0.8 mL/min。分析5 种维生素保留的热力学参数焓、熵和吉布斯自由能。烟酸、生物素、烟酰胺、叶酸和钴胺素标准曲线线性良好（R2＞0.999 0）;烟酸、生物素、烟酰胺、叶酸和钴胺素的检出限分别为6、10、20、22、8 ng/mL;5 种物质的相对标准偏差均低于1.36%;加标回收率范围为92.30%～107.20%。方法的精密度和准确度均可满足高效液相色谱法的测定要求。     

牛奶中氯霉素的纳米纤维固相萃取快速前处理方法

将纳米纤维固相萃取柱应用于氯霉素检测的前处理,建立牛奶中氯霉素检测的快速前处理方法。在样液中加入高氯酸沉淀蛋白,离心后取上清液调节pH值至中性后直接过柱,100μL甲醇洗脱得洗脱液,取20μL注入高效液相色谱仪检测。流动相为甲醇:Na2HPO4-柠檬酸缓冲液(1:2,V/V,pH3.8),流速1.0mL/min,紫外检测波长277nm。优化高氯酸体积分数、上清液的pH值、盐质量浓度、洗脱剂用量。在最优条件下,方法定量线性范围为0.05～10μg/mL。方法回收率为92.3%～105.3%,日内RSD为2.5%～8.9%,日间RSD为11.7%。与C18固相萃取柱相比,本方法操作简便,效率高,且精密度高,回收率好,是一种可靠并且相对高效环保的方法,可应用于牛奶中氯霉素的检测。     

高效毛细管电泳法在黄酮类化合物分析检测中的应用

建立一种高效毛细管电泳(HPCE)法测定黄酮类化合物含量的方法。电解质溶液以20mmol/L 硼砂- 硼酸溶液(pH8.4)作为缓冲液,在25℃、20kV 压力条件下进行电泳,245nm 波长处检测,线性关系良好,在10min 内黄酮类化合物完全分离,符合定性研究和定量测定的要求。该方法具有较好的分离效果和良好的精密度,可应用于黄酮类化合物的测定。     

糙米中砷形态检测方法的对比研究

目的比较液相色谱-原子荧光光谱法(highperformance liquid chromatography atomic fluorescence spectrometry,HPLC-AFS)和液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(high performance liquid chromatography inductively coupled plasma mass spectrometry, HPLC-ICP-MS)两种方法对糙米中砷形态的测定。方法糙米样品经0.15 mol/L硝酸溶液提取,分别采用HPLC-AFS联用仪,流动相为15 mmol/L的磷酸二氢氨缓冲溶液(pH=6.0),经CNWSep AX阴离子交换色谱柱分离检测;同时,采用HPLC-ICP-MS联用仪,流动相为含5 mmol/L己烷磺酸钠、20 mmol/L柠檬酸的缓冲溶液(pH=4.3),经安捷伦ZorbaxSB-Aq反相色谱柱分离检测。结果两种方法检测4种砷形态在5.0～100.0 ng/mL范围内线性良好,相关系数均在0.999以上; HPLC-AFS法的检出限分别为2.3、0.6、1.0和1.1 ng/mL,加标回收率在85.1%～106%之间,相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)均小于5%; HPLC-ICP-MS法的检出限分别为0.1、0.1、0.1和0.2 ng/mL,加标回收率在82.8%～106%之间,相对标准偏差(RSD)均小于5%。结论两种方法都可以满足糙米中4种砷形态的检测,在实际情况中可根据需要选择相应的检测方法。