蓝莓叶片原生质体的制备

文章以北陆蓝莓叶片为材料,研究酶液配比浓度、酶解时间、温度、pH值以及甘露醇浓度对蓝莓叶片原生质体制备的影响。结果显示,以2.0%纤维素酶＋0.8%果胶酶为酶液组合,0.60 mol/L甘露醇为渗透压稳定剂,酶液pH值为5.8,温度（26±1）℃,黑暗条件下酶解8 h,此后以1 000 r/min,离心6 min,所得蓝莓叶片原生质体的产量与活力最优。试验材料由辽东学院农学院蓝莓养殖基地提供。     

红豆杉原生质体制备和培养研究

采用不同浓度的纤维索酶和果胶酶混合液对红豆杉种子的胚进行了处理,采用3％ 0.5％(m／v)的纤维索酶 果胶酶混合液效果好．得到了红豆杉胚原生质体;同时采用了B5、V-KM、MS3种培养基对所得到的原生质体进行了初步培养;实验结果表明．采用V-KM附加椰子汁(含天然植物激素)培养基培养胚性原生质体效果较好,并研究了植物激素的浓度和光照强度等对愈伤组织的诱导的影响,表明采用IAA和NAA对愈伤组织生长效果较好,光照强度在1000lx生长效果较好.     

柄蓝状菌原生质体的制备与再生条件优化

为了建立以聚乙二醇/氯化钙（PEG/CaCl2）原生质体介导的柄蓝状菌（Talaromyces Stipitatus）高效的遗传转化系统,分别从材料选择,真菌菌龄,不同的渗透压稳定剂,酶的不同种类配比,酶的浓度,酶解时间及不同再生方式对柄蓝状菌EMM原生质的制备与再生条件进行优化。结果表明:以柄蓝状菌EMM 接种生长48 h的菌丝为制备材料,1 mol/L MgSO4作为渗透压稳定剂,菌丝在温度为30 ℃,浓度为50 mg/mL的裂解酶溶液中酶解3 h,得到的原生质体先用再生培养基孵化培养12 h,然后再与PDA培养基混合铺板,以上组合条件下原生质体的释放量可达8.73×108 /mL,再生率可达17.7％。     

解脂亚罗酵母原生质体的制备与再生条件

使用纤维素酶和蜗牛酶复合酶液进行处理,并用β-巯基乙醇预处理,采用甘露醇作为渗透压稳定剂,考察菌龄、酶质量浓度、酶解温度和酶解时间对解脂亚罗酵母原生质体形成和再生的影响。实验得出结论:对于原生质体形成率影响因素来说,理论的最佳形成条件为:菌龄36 h,酶质量浓度为2.5mg/m L,酶解温度为25℃,酶解时间为8 h;对于原生质体再生率影响因素来说,理论的最佳再生条件为:菌龄48 h,酶质量浓度为2 mg/mL,酶解温度为25℃,酶解时间为8 h。而综合形成率和再生率共同影响因素顺序为:菌龄酶质量浓度酶解温度酶解时间,最佳制备条件为:菌龄36 h,酶质量浓度2mg/mL,酶解温度25℃,酶解时间8 h。     

酿酒酵母原生质体菌株的筛选

实验研究酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae) 原生质体的分离再生及再生菌株的构建 ,以蜗牛酶、纤维素酶、溶壁酶的去壁效果最好 ,而新生酶、几丁质酶的去壁效果较差。 2种以上的酶液混合使用能提高去壁效果。酶解液浓度在 0 .1 %～ 2 %内原生质体释放量随酶解液的浓度升高而上升。酶解液 pH值在 5 .0～ 7.0时原生质体的产量较高 ,渗透压稳定剂以柠檬酸 -磷酸缓冲液( pH6.0 ,内含 0 .8mol/L山梨糖醇 )处理原生质体释放量最高。而培养基对原生质体释放量的影响不明显。通过原生质体融合技术 ,获得融合子HG112 ,对HG112 进行以葡萄糖为基质的发酵试验 ,结果显示该融合子乙醇含量达 7.9% (体积比 ) ,比亲本QT提高 4 9.7% ,该技术可用于筛选优良菌株     

酿酒酵母原生质体菌株的筛选

实验研究酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）原生质体的分离再生及再生菌株的构建，以蜗牛酶、纤维素酶、溶壁酶的去壁效果最好，而新生酶、几丁质酶的去壁效果较差。2种以上的酶液混合使用能提高去壁效果。酶解液浓度在0.1％－2％内原生质体释放量随酶解液的浓度升高而上升。酶解液pH值在5.0－7.0时原生质体的产量较高，渗透压稳定剂以柠檬酸－磷酸缓冲液（pH6.0，内含0.8mol/L山梨糖醇）处理原生质体释放量最高。而培养基对原生质体释放量的影响不明显。通过原生质体融合技术，获得融合子HG112，对HG112进行以葡萄糖为基质的发酵试验，结果显示该融合子乙醇含量达7.9％（体积比），比亲本QT提高49.7％，该技术可用于筛选优良菌株。     

蛹虫草无性型原生质体制备条件的研究

以蛹虫草无性型为材料,通过液体培养获得菌丝体,经不同浓度的蜗牛酶、纤维素酶在不同条件下酶解处理菌丝体获得原生质体．实验结果表明：以培养6d的蛹虫草菌丝体为材料,0．5mol／L甘露醇溶液为稳渗剂,蜗牛酶浓度为1％,纤维素酶浓度为0．5％,两种酶混合的体积比为1：2,pH6．5,35℃条件下酶解3h,可得原生质体产量最高为1．36×10^8个／mL．这一研究结果为蛹虫草通过原生质体技术进行菌株的遗传改良提供了重要的理论依据．     

适合膜片钳电流测定的金铁锁原生质体制备技术

以金铁锁愈伤组织为材料,利用传统酶解法和快速酶解法,对金铁锁原生质体的制备分离技术进行比较和研究,记录全细胞电流,获得高质量的原生质体材料.结果表明,采用传统酶解法,2％纤维素酶R-10+1％果胶酶Y-23的混合酶液酶解7h,可以获得大量原生质体;采用快速酶解法,1.2％纤维素酶RS+0.5％果胶酶Y-23的混合酶液酶...     

制备条斑紫菜原生质体的工具酶研究

通过比较自制的4种海螺酶(分别取自单齿螺、锈凹螺、短滨螺和石鳖)及国产的纤维素酶、果胶酶等对条斑紫菜细胞壁的降解效果,探索经济高效制备条斑紫菜原生质体的工具酶,并进一步研究了最佳酶解条件。结果表明,单独使用海螺酶及市售的纤维素酶、果胶酶制备紫菜原生质体的效果都不好,而用单齿螺酶与质量分数为1.5%的纤维素酶制成的混合酶液(体积比1∶1)效果最佳,在25℃,pH为6.5时酶解能力最强,酶解时间以1 h为宜,酶解率可达80.4%。温度和酸碱性过高、酶解时间过长都会造成紫菜细胞的死亡。加入2 mol/L的葡萄糖作为渗压剂可使制备的原生质体成活率从65.0%提高到80.7%。     

蓝莓种子组织培养技术的研究

为提高蓝莓种子发芽率,试验在蓝莓组织培养技术已取得的成果基础上,就低温处理、物理方法处理和培养基配方对蓝莓种子萌发的影响做进一步研究,进而筛选出有利于蓝莓种子萌发的最佳组合：低温储藏八周、采用种子刻分播种、使用1/3 MS＋NAA 0.05 mg/L＋ZT 0.5 mg/L配方的培养基。     

采后预温处理对蓝莓腐烂率影响试验

以蓝梅为研究对象,进行贮前不同温度的预处理,观察和计算果实在不同预处理温度下的外观变化及腐烂率;并对果实腐烂率、预处理温度和处理时间进行多元线性回归和相关性分析。结果表明,以贮前50℃预热处30 m in和5℃预冷处理30 m in的果实腐烂率最低。     

竹叶中有效成分的分离研究

采用梯度洗脱及柱色谱法对竹叶中的有效活性成分重点为黄酮进行了分离研究、提纯。试验中所用色谱柱填料为本实验室自制，其色谱柱长298mm，内径10mm，脱洗体系为乙醇-水溶液。试验在提取分离黄桐的同时得到了叶绿素，现时从竹叶中分离出了多糖成分。研究表明不同的竹叶其黄酮含量不同，磁竹、白家子竹不含黄酮类化合物，而大竹叶与小竹叶均含有黄酮类化合物，且大竹叶和较内采小竹叶黄酮分别为1.56%、4.07%。     

超声波辅助提取莴笋叶中黄酮类物质工艺的研究

在单因素试验基础上,采用正交试验法．对超声波辅助提取莴笋叶中黄酮类物质的工艺进行了优化．确定其最佳提取工艺为：90％乙醇作为浸提剂,超声功率500W,超声时间50min,液料比4mL／g．在此条件下。黄酮类物质的提取率为0．35％．     

利用原生质体融合和诱变育种技术选育高酶活菌株

以白曲霉(Aspergillus kawachii )基因工程菌TR12和黑曲霉(Aspergillus niger)34309为出发菌株，分别用纤维素酶和纤维素酶、溶菌酶的混合酶液制得了两个亲本的原生质体。在研究了培养时间、培养方法、酶解时间、酶解液的配比等条件对原生质体产量影响的基础上，以PDG诱导进行了原生质体的融合，并进行了紫外线照射的诱变育种。通过比较在菌落外观、颜色及形态上与白曲霉和黑曲霉菌株的不同，以及进行分离培养和液态培养摇瓶筛选，获得了一株具有较高酶活力的新菌株，其耐酸性α-淀粉酶活性和糖化酶活性分别达到91．2u／ml和3216．2u／ml的水平。     

乙醇-水体系中黄酮类化合物的浸取工艺研究

研究了乙醇-水体系浸取银杏叶中黄酮类化合物的工艺条件,通过分光光度法测定黄酮的含量并计算它的浸出率.根据黄酮类化合物浸出率的计算结果,选用70%乙醇溶液作为提取剂,并通过正交试验给出了黄酮类化合物的最佳浸出条件:浸取温度为70℃,固液比为1∶20,浸取剂pH为8.在此条件下,银杏叶中黄酮类化合物的浸出率可达到92.2%.     

微波法提取银杏叶黄酮最佳工艺的研究

对微波法提取银吉叶中黄酮类物质进行研究，用175W微波强度处理5min后，以体积分数80％的乙醇，在70℃提取1h，得到提取物的黄酮类物质质量浓度比未经微波处理的高出18．8％。