绿色荧光蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的表达

目的探讨异源基因在枯草芽孢杆菌中表达的可行性。方法以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的穿梭质粒为基本骨架,在大肠杆菌中完成含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组表达质粒的构建,通过酶切鉴定筛选阳性克隆,采用电转化的方法,将重组质粒转入枯草芽孢杆菌进行表达,通过检测GFP的存在,评价枯草芽孢杆菌对异源基因的表达。结果重组表达质粒pGJP-GFP酶切鉴定结果与预期片段大小相符。绿色荧光蛋白可在枯草芽孢杆菌中表达,且表达蛋白具有较好的生物学活性。结论利用枯草芽孢杆菌的自身启动子,可以实现外源基因在枯草芽孢杆菌中的表达。     

枯草芽孢杆菌液体深层培养过程研究

枯草芽孢杆菌是一种可产生抗逆内生孢子的杆状细菌,在自然界广泛存在。它可改善动物肠道菌群、提高消化酶活性,被越来越多地研制成饲用微生态制剂。枯草芽孢杆菌是应用最广泛的产酶微生物,其可以用于生产淀粉酶、蛋白酶、葡聚糖酶、5’-核苷酸酶、碱性磷酸酶等。枯草芽孢杆菌的培养有固体培养和液体深层培养等方式,各具特点。目前生物发酵生产的主要方式是机械化程度较高的液体深层发酵培养。对枯草芽孢杆菌液态培养的过程进行了跟踪研究。     

枯草芽孢杆菌等生物农药对寒地水稻稻瘟病的防治效果

[方法]采用室内稻瘟病菌丝抑制率测定及田间防治效果试验,测定了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等7种生物农药对寒地水稻稻瘟病的防治效果。[结果]菌丝抑制率4%春雷霉素WP 85.3%,1000亿芽孢/g枯草芽孢杆菌WP、15%过氧乙酸AS与40%稻瘟灵EC相同,达到100%;田间防效好的药剂是4%春雷霉素WP、1000亿芽孢/g枯草芽孢杆菌WP;增产效果分别为9.9%～21.9%、21.7%～28.1%。[结论]1000亿芽孢/g枯草芽孢杆菌WP、4%春雷霉素WP是黑龙江省绿色稻米安全防病的首选药剂。     

枯草芽孢杆菌对黑土中可培养微生物的生态效应

研究了微生物农药枯草芽孢杆菌对东北黑土中可培养微生物的生态影响.其动态变化表明:低质量分数枯草芽孢杆菌对细菌总数没有明显影响,较高质量分数枯草芽孢杆菌町促进细菌总数的显著增加,其中质量分数在3200 mg/kg时,枯草芽孢杆菌对细菌的刺激强度最高,为对照的11倍.枯草芽孢杆菌对土壤中的放线菌也有刺激作用,刺激强度最高时,放线菌数量可增至对照的8.3倍左右.枯草芽孢杆菌对真菌的敏感性较低,只有质量分数高达3200 mg/kg时,才对真菌产生明显刺激作用,最高刺激强度为同时期对照的29倍.     

微生物菌剂防治白菜根肿病的应用研究

针对白菜根肿病对现有防治药剂产生耐药性,开展了微生物菌剂防治白菜根肿病的田间小区研究。试验选用枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌等2种微生物菌剂和氟啶胺、75%(质量分数)百菌清、40%(质量分数)五氯硝基苯等3种药剂,共设6个处理,每个处理重复3次,通过田间调查,获取不同处理的防治效果试验数据。结果表明:枯草芽孢杆菌+有机肥处理的防治效果达到81.52%,解淀粉芽孢杆菌+有机肥处理的防治效果达到75.00%;不同药剂、微生物菌剂处理的白菜生物产量和经济产量显著提高,增产幅度为10%～30%。枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌结合有机肥施用,对抑制根肿病的发生、侵染及致病具有较好的作用。     

隔夜茶水抑菌活性的研究

采用滤纸片扩散法测定不同浓度的一道茶、二道茶在浸泡12 h后对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、青霉四种微生物的抑制作用。一道茶、二道茶对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌有较明显的抑制作用,一道茶的抑制作用大于二道茶,对黑曲霉、青霉没有抑制作用。一道隔夜茶水对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别为0.063 g/mL、0.077 g/mL。本实验证实了隔夜茶水的抑菌作用,为其变废为宝提供理论依据。     

不同磷源对枯草芽孢杆菌生长的影响

以枯草芽孢杆菌为培养对象,通过固体和液体培养基中不添加磷、以磷酸盐形式添加磷源、以湿法净化磷酸形式添加磷源、以热法磷酸形式添加磷源,验证不同磷源对枯草芽孢杆菌生长的影响。结果表明:枯草芽孢杆菌培养48h后,不添加磷源、添加磷酸盐、添加热法磷酸、添加湿法净化磷酸培养基中枯草芽孢杆菌直径分别为7.579mm、10.021mm、11.051mm、11.363mm,比不添加磷源的分别增大2.244mm、3.472mm、3.784mm;发酵液中OD值分别为2.452、2.561、2.563、2.556,比不添加磷源的分别增加0.141、0.111、0.104。结论:培养基中添加磷源对枯草芽孢杆菌生长具有一定的促进作用;添加磷酸盐、热法磷酸、湿法净化磷酸都能够为枯草芽孢杆菌提供磷源,且促进效果无显著差异。     

芽孢杆菌应用于聚乳酸的降解及其降解条件的研究

采用液体培养法,将巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌应用于聚乳酸生物降解,探究降解过程中培养条件的改变,对蛋白酶活性以及薄膜降解过程的影响。结果表明：不同种类的诱导物能够提高芽孢杆菌的蛋白酶活性,巨大芽孢杆菌的最高蛋白酶活性约为23.79 U/mL,枯草芽孢杆菌的最高蛋白酶活性约为11.61 U/mL,解淀粉芽孢杆菌的最高蛋白酶活性约为21.23 U/mL。三种芽孢杆菌中,巨大芽孢杆菌对聚乳酸的生物降解影响最大。初始pH值为8.0,接种2%(V/V)种子液,1%酵母浸粉作为降解诱导物,可以有效加快巨大芽孢杆菌对聚乳酸的降解速率,5 d后降解率可达20.96%。薄膜表面存在菌生长,生物降解后出现轻微裂痕。     

新微生物杀菌剂——枯草芽孢杆菌新菌株的特性和使用方法

在生态系统的植物叶面和土壤上，存在着由各种各样微生物组成的复合体系。它们在形成的空间、时间上相互竞争，并保持生态平衡状态。作为拮抗微生物，枯草芽孢杆菌(Bacillus sp．)已在。1998年即作为农药登记，被用于防治几种作物病害。本文则主要介绍日本SDS生物技术公司筑波研究所开发的枯草芽孢杆菌新菌株(Bacillus subtilis QSF-713)及其制剂的特性和应用方法。     

一种复合生物土壤改良剂及其应用

申请(专利权)人:山东靠山生物科技有限公司申请日期:2011.09.29申请(专利)号:201110292342.1主分类号:C09K17/00(2006.01)I本发明公开了一种无公害绿色高效土壤改良剂,其原料组成为:拟康氏木霉发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液、水溶性甲壳素、黄腐酸钾、腐熟有机质。其中,拟康氏木霉和枯草芽孢杆菌是经过筛选和诱变处理获得的高效菌株,并通过液体深层发酵技术获得拟康氏木霉和枯草芽孢杆菌发酵液,再组合制成无公害绿色高效土壤改良剂。     

微生物菌剂包膜无机肥料的制备

以枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌为原料配制复合菌剂,再将复合菌剂喷涂包裹在无机肥料颗粒表面制备微生物菌剂包膜无机肥料.考察微生物菌剂包膜肥料微生物菌种的活性及其随时间的变化,并对微生物菌剂包膜肥料进行农化效果验证.结果表明,此工艺得到的微生物菌剂包膜无机肥料存放170d后,微生物菌剂包膜的复合...     

几种芽孢杆菌对温度、氨水和乙醇耐受性的研究

研究了枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌以及从土样中筛选的6种未知芽孢杆菌对温度、氨水和乙醇的耐受性。结果表明,水悬液中的芽孢在100℃处理3min后全部被杀死,土壤颗粒包裹的芽孢则需15min全部被杀死;从土样中筛选的6种未知芽孢杆菌在25％的氨水、75％的乙醇中分别浸泡7d后仍有存活。     

一株枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件优化

通过水浴处理,反复平板划线,从土壤中分离纯化出一株疑似枯草芽孢杆菌的菌株,命名为WZB。对该菌株进行形态学观察、生理生化实验和16S rDNA序列分析,最终鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。并对该菌株的发酵条件进行了初步优化,优化得到的发酵条件为:接种量3%、发酵温度34℃、初始pH值7.0、培养时间36 h,进一步为枯草芽孢杆菌菌剂开发应用奠定了基础。     

枯草芽孢杆菌液体发酵培养基成分优化研究

通过实验对枯草芽孢杆菌产孢培养基成分中的碳源、氮源、无机盐、生长因子等成分进行筛选与优化,以确定适合枯草芽孢杆菌产芽孢的最佳培养基配方。多次试验的结果表明,通过优化培养基配方,芽孢产率得到提高。通过对碳源、氮源以及无机盐的筛选与优化,实验最终确定枯草芽孢杆菌的最佳产孢培养基的配方为:蛋白胨10 g,硫酸铵2.5 g,牛肉浸出粉3 g,氯化钠5 g,磷酸氢二钾2 g,聚乙烯醇5 g,蒸馏水1000 m L。     

米糠渥堆发酵过程中代谢产物和菌群变化研究

米糠是很好的发酵饲料原料,但其固态发酵过程中的菌群及其代谢产物变化却少有报道。本文以全脂米糠为单一发酵原料,分别接种发酵乳杆菌MRS8、枯草芽孢杆菌ZLK1或地衣芽孢杆菌BL50,研究发酵过程中乳酸、乙酸、乙醇等代谢产物及其菌群的变化情况。发酵起始时,米糠中乳杆菌科占比在80%以上,随着发酵启动,空白组中肠杆菌科增殖很快,但乳酸含量变化最小。发酵乳杆菌MRS8组乳酸升高最快,两天达到最大值。枯草芽孢杆菌ZLK1组乳酸含量随着发酵时间延长持续升高。研究表明:外加益生菌株发酵可以提高米糠发酵的乳酸含量,幵降低有害菌的丰度。     

田基黄总黄酮提取物的抑菌性能研究

用抑菌圈法考察了田基黄总黄酮浓度、pH和处理温度对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌活性.结果表明,总黄酮提取物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌都具有良好的抑菌活性,最小抑菌浓度分别为3.125,6.25,1.562 5 μg/mL.总黄酮浓度为12.5 μg/mL的田基黄提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌分别在pH为8,7～8和5抑菌活性最大.总黄酮提取液具有较强的耐热性能,在20℃和80℃加热处理30 min后对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈分别为12.8,10.2,11.3 mm和12.0,10.0,10.8 mm.     

荞麦七提取物的体外抑菌活性研究

以铜绿假单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌为受试菌,通过最小抑菌浓度测定、抑菌圈的判断、生长曲线的绘制及菌液电导率的测定等方法,研究了荞麦七的4种提取物(水提物、蒽醌、鞣质、黄酮)的体外抑菌活性。结果表明:荞麦七水提物对枯草芽孢杆菌及铜绿假单胞菌抑制作用较强;荞麦七蒽醌对金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌抑制作用较强;荞麦七鞣质对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌抑制作用较强;荞麦七黄酮对大肠杆菌抑制作用最强。     

曼陀罗总生物碱抑菌活性的初步研究

采用MIC和纸片法考查了曼陀罗提取物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和酵母菌的抑菌性能。结果表明,曼陀罗对4种受试菌株都有抑菌活性;100℃时,水提物对大肠杆菌的抑菌效果最好,最大抑菌圈为14.72 mm;pH值为8时,曼陀罗水提取对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和酵母菌的抑菌性最好,最大抑菌圈分别为15.46、13.47、12.26和11.22 mm。曼陀罗水提取对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和酵母菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为8、8、4、6 mg/m L。     

吸收光谱在细菌细胞吸附亚甲基蓝能力检测中的应用

通过吸收光谱法初步研究金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、肠球菌、大肠杆菌以及感受态大肠杆菌对光敏剂亚甲基蓝(Methylene Blue,MB)的吸附能力。MB(终浓度2184μM)分别与金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、肠球菌、大肠杆菌和感受态大肠杆菌菌液37℃孵育45分钟并洗涤三次后,离心分别测定上清液和细菌细胞的吸收光谱。结果表明:三种革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和肠球菌)对光敏剂MB的吸附能力大于革兰氏阴性菌大肠杆菌;感受态大肠杆菌对光敏剂MB的吸附能力大于大肠杆菌。     

200亿芽孢/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂的研制

以枯草芽孢杆菌B99-2为研究对象,通过对填料、润湿剂、分散剂、稳定剂、UV保护剂的筛选,确定了枯草芽孢杆菌可湿性粉剂的最佳配方.最佳配方为填料硅藻土10%,分散剂PVA 7.2%,润湿剂D425 4.8%,稳定剂CMC-Na 2.0%,保护剂FWA 0.1%.测定结果表明:枯草芽孢杆菌可湿性粉剂芽孢含量达2.0×1010cfu/g,悬浮率79%,润湿时间48 s,热贮分解率23.6%,产品各项指标均达到国家标准.