玉米中转基因成分的定性PCR检测

利用改良 CTAB 法提取玉米产品的基因组 DNA,应用 PCR 检测方法,并以玉米特异性内源基因 IVR 为内参,花椰菜花叶病毒 35S 启动子(CaMV35S 启动子)、农杆茵胭脂碱合成酶终止子(NOS终止子)为靶基因检测玉米中是否存在转基因成分.实验结果表明,有些玉米样品中存在转基因成分,表明市场上存在未经标识的转基因玉米及其加工品.     

多重PCR方法检测食品中转基因成分

根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止子（NOS）的序列，设计合成了两对不同的引种和相对应的两种荧光双链探针（FDCP），分别建立了多重PCR，应用FDCP的实时荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法，并利用该套方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测，发现13份样品有6份检出35S启动子、NOS终止子，其余7份样品的检测结果为阴性，表明作者建立的多重PCR方法能有效检测出35S和NOS成分，其中多重PCR法具有灵敏度高、特异性好的特点，多重荧光PCR法则更为简便、快速、准确。     

玉米转基因成分的非同源模板竞争定量PCR检测

建立了玉米转基因成分中35S启动子非同源模板的竞争定量PCR检测系统.竞争定量PCR的关键问题是内标物的制备.实验中非同源模板的构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严紧型扩增,回收预期DNA片段并将其构建到T-easy载体上.通过调整非同源模板浓度使竞争物PCR产物亮度与1%GMO玉米的亮度相同,从而确定转基因玉米的检出限为1%.然后以确定的内标物浓度与不同含量的GMO玉米样品进行竞争定量PCR反应,以此进一步确定样品中GMO的含量范围.     

玉米转基因成分的非同源模板竞争定量PCR检测

建立了玉米转基因成分中35S启动子非同源模板的竞争定量PCR检测系统．竞争定量PCR的关键问题是内标物的制备．实验中非同源模板的构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严紧型扩增，回收预期DNA片段并将其构建到T-easy载体上．通过调整非同源模板浓度使竞争物PCR产物亮度与1％GMO玉米的亮度相同，从而确定转基因玉米的检出限为1％．然后以确定的内标物浓度与不同含量的GMO玉米样品进行竞争定量PCR反应，以此进一步确定样品中GMO的含量范围．     

转基因食品的快速PCR鉴定

用十六烷基-二甲基-乙基-溴化铵(CTAB)法快速高效地从样品中提取了可供分析的基因组DNA，经PCR扩增，鉴定了含有35S启动子和NOS终止子的转基因样品，该方法的灵敏度可达0．1％，并且具有很好的稳定性。     

过量表达拟南芥高亲和性磷酸载体蛋白基因提高转基因烟草对磷的吸收（英文）

磷是所有生物生长必需的大量营养元素.酸性土壤占世界可耕地面积30%以上,在酸性土壤中,大部分磷以不溶性形式存在,很难被植物吸收和利用.为了增加植物对酸性土壤不溶性磷的吸收能力,本研究利用CaMV35S启动子在转基因烟草中过量表达拟南芥高亲和性磷酸载体蛋白（AtPTI）基因.研究结果表明在酸性土壤中生长时,转基因烟草叶片磷的含量及其生物量均高于不转基因的野生型（WT）植物（对照）.转基因植物可以正常生长、开花和结实,而WT植物的开花时间提前且不能正常结果.这些结果证实在植物中过量表达AtPTI基因是提高植物吸收酸性土壤中磷及其产量的一个有效策略.     

无抗性选择标记的植酸酶基因转化DNA的构建

构建了无抗性选择标记植酸酶基因的转化片段DNAphyAⅡ。两侧设置了高等植物基因组DNA保守序列CAATbox，TATAbox和polyA的DNA片段（DNAphyAⅡ，5‘-CAATbox-TATAbox-CaMV35S-phyA Ⅱ-GUS-Nos-Tem-polyA-3‘)，为提高转化率奠定了分子基础，此外DNAphyAⅡ中植酸酶蛋白编码基因phyA Ⅱ前后的启动子和终止子序列，确保了phyA Ⅱ会得以正确表达。     

无抗性选择标记的植酸酶基因转化DNA的构建

构建了无抗性选择标记植酸酶基因的转化片段DNAphyAⅡ 。两侧设置了高等植物基因组DNA保守序列CAATbox,TATAbox和polyA的DNA片段 (DNAphyAⅡ ,5’ CAATbox TATAbox CaMV3 5S phyAⅡ GUS Nos Tem polyA 3’) ,为提高转化率奠定了分子基础 ,此外DNAphyAⅡ 中植酸酶蛋白编码基因phyAⅡ前后的启动子和终止子序列 ,确保了phyAⅡ会得以正确表达     

SEC2在莱茵衣藻中的表达及免疫学活性分析

通过将金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)肠毒素C2(staphylococcal entero-toxin C2,SEC2)基因进行定点突变,获得具有超抗原性的减毒C2基因序列sec2t,把该基因插入含Hsp 70A-RBCS2启动子和RBCS2终止子的pH124载体上,构建莱茵衣藻表达载体pH124sec2t,采用"珠磨法"将该载体转入细胞壁缺陷型莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)CC-849中,经含10μg/mL Zeomy-cin的抗性平板筛选、PCR及RT-PCR分析,获得转基因莱茵衣藻Tran-sec2t.Southern blot和Western blot分析表明,sec2t基因已整合入莱茵衣藻核基因组中,且能表达相对分子质量为26 kDa(1 Da=1 u)的目的蛋白.分别以CC-849和Tran-sec2t两种藻细胞培养液(每毫升106个细胞)喂食Balb/c小鼠,并用流式细胞仪检测分析小鼠CD3+、CD4+和CD8+细胞,结果发现,可表达减毒超抗原SEC2T的转基因莱茵衣藻Tran-sec2t能刺激小鼠T淋巴细胞的产生;与对照相比,CD4+与CD8+细胞数目比值有所降低,但CD3+和CD8+细胞有明显提高.研究结果有助于利用转基因藻生产抗肿瘤制剂和动物免疫增强剂.     

番茄果实特异性启动子驱动下的乙肝表面抗原S基因的植物表达载体的构建

将番茄果实特异性启动子通过PCR的方法扩增出来,然后将其替代了pBIN438的CaMV35S启动子,并将乙肝表面抗原的S基因连接到载体上,以获得番茄果实特异性表达乙肝表面抗原的高效植物表达载体。     

大豆LEA蛋白Em的表达可提高大肠杆菌和烟草耐盐性

将大豆Em（LEA1）基因构建到原核表达载体pET28-Em中．转化大肠杆菌，经SDS—PAGE电泳及电喷雾质谱鉴定．结果显示，经IPTG诱导的重组菌可表达约18kDa的特异蛋白．这种蛋白具有良好的可溶性和热稳定性．在含800m mol／L NaCl培养基中，含空载体的对照菌生长迟滞期约为50h，含Em基因的重组菌生长迟滞期为32h，表明大豆Em蛋白的表达可提高大肠杆菌对盐胁迫的适应能力及耐盐性．在此基础上，构建了含Em基因的真核表达载体pBI—Em．再利用根癌农杆菌介导法将该基因转入烟草．PCR及RT-PCR结果显示，大豆Em基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中，并能正常转录．转化率为53％．转Em基因烟草植株在含有质量分数1．5％NaCl的培养基中生长状况好于对照植株，叶片的叶绿素含量高于对照植株的叶片．结果表明，大豆Em基因的表达可提高大肠杆菌和转基因烟草的耐盐性．     

霉变玉米电子鼻识别及其传感器阵列优化

收集了玉米样品40份,利用电子鼻技术对样品进行模式识别,并对电子鼻传感器阵列进行优化.结果表明,电子鼻能够对正常与霉变样品进行区分.在优化传感器阵列后,主成分分数较优化前的84.36%提高至97.54%.对测试集的判别采用4种算法(Euclid、Malahanobis、Kohonen和DFA)进行判别,电子鼻判别率较优化前均有不同程度的提高,其中Kohonen法判别率可达90.63%.     

糖结合单元-绿色荧光蛋白探针的制备及应用

利用RF克隆方法将全基因合成的来自约氏梭菌Clostridium josui家族28糖结合单元CjCBM28的编码基因与绿色荧光蛋白编码基因融合,构建了探针CjCBM28-GFP的大肠杆菌表达载体,表达载体被热激转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并进行了诱导表达。利用亲和层析法纯化出的CjCBM28-GFP与预处理及未预处理的玉米秸秆在30℃温育3h,荧光显微镜观察结果表明,CjCBM28-GFP探针对预处理木质纤维素的结合能力强于未经预处理的样品。研究结果可用于测定预处理木质纤维素所暴露的结晶和非结晶纤维素含量,分析不同方式预处理的木质纤维素的水解程度。     

影响农杆菌介导植物遗传转化的因素

农杆菌介导的基因转化是一种使外源DNA转移到目的植株的天然系统,通过植物表达载体上DNA的加工与转移将外源DNA转运到植物细胞中的转基因方法.介绍了该方法在转化过程中的影响因素,包括转基因受体、外源基因供体、共培养条件、植物培养基的成分和外植体培养条件等.     

外源DNA通过花粉管通道法导入玉米的研究

利用花粉管通道技术,以抗虫的胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)为供体,以8个品种玉米为受体,进行外源DNA直接导入,获得了大量的转基因植株,通过对抗性植株的初步分子鉴定,证实外源CpTI基因存在并整合入玉米基因组中。     

杂交型DNA电化学生物传感器研究进展

杂交型DNA电化学生物传感器是一类利用核酸互补配对杂交原理检测和分析特定DNA序列的电化学生物传感器。由于其具有快速简便、选择性好、灵敏度高等优点,在临床医学、遗传工程、环境检测、食品安全监测和生物科学等领域有着重要的应用价值。简述了杂交型DNA电化学生物传感器的一般原理,对共价键结合法、自组装法、生物素-亲和索法、电聚合法以及吸附法等单链DNA的固定方法和DNA杂交信号的直接和间接电化学转换机制的近期研究进展进行了深入探讨,并对其在医疗检测和转基因植物检测等基因检测方面的最新应用和发展趋势进行了论述。     

氯氰菊酯在玉米及土壤中的残留分析

采用GC-ECD测定了氯氰菊酯在玉米及其土壤中的残留动态和最终残留量。结果表明,喷施10%(质量分数)氯氰菊酯乳油,土壤中的原始沉积量为0.314 mg.kg-1,半衰期3 d,植株中的原始沉积量4.59 mg.kg-1,半衰期1.74 d。收获期玉米籽粒中的最终残留量低于方法检出限(0.001 mg.kg-1)。     

改性玉米粉面条品质特性研究

对玉米粉、改性玉米粉和小麦粉所制得面条的蒸煮特性及质构特性进行了分析比较.结果表明,改性玉米粉面条硬度、弹力均与小麦粉面条接近,其咀嚼度达到小麦粉面条的86％以上,改性玉米粉面条拉伸力达到小麦粉面条的50％,根据破碎特性分析得出改性玉米粉面条的韧性达到小麦粉面条的70％.改性玉米粉面条的蒸煮损失率和断条率均低于小麦粉面条,但与玉米粉相比,改性玉米粉所制得的面条品质特性得到显著提升.     

农杆菌介导法获得抗病毒病转基因大白菜

为获得抗芜菁花叶病毒病的大白菜植株,用携带TuMV-cp基因的农杆菌R1000和EHA105转化大白菜子叶和下胚轴,PCR、PCR-Southern检测证实TuMV-cp基因已导入并整合到大白菜的基因组中.RT-PCR检测表明TuMV-cp在转录水平上获得了稳定表达.TuMV-cp基因在转基因植株T1代中获得了稳定的遗传.抗病性鉴定结果表明转基因植株T1代较非转基因植株对TuMV的抗性增强,获得了抗病毒病的转基因大白菜植株.