豆豉纤溶酶分离及其特性的研究

采用硫酸铵分级沉淀、SephadexG-100凝胶过滤层析,从豆豉粗酶液中提取纤溶酶。分离后的纤溶酶样品在SDS-PAGE电泳中有一个活性峰呈单一条带,分子量为35kDa,活性回收率为22.5%,纯化倍数为11.7;另一活性峰呈三条带,需进一步分离。特性研究表明:在pH7.0左右,温度40℃时,酶活力最高;该纤溶酶不耐热,其纤溶活性可被Mn2+、Mg2+以及Na2SO3激活,Ca2+以及乙醇、明胶对酶活力具有较强的抑制作用;NaCl浓度低于10%,酶活力能够基本保持稳定。      

豆豉纤溶酶功能性研究

该文对豆豉枯草杆菌的筛选、发酵及纤溶酶提取、活性测定、理化性质、动物溶栓药效试验进行综述并介绍纤溶酶应用前景。     

豆豉纤溶酶的研究进展

豆豉纤溶酶是由豆豉枯草芽孢杆菌分泌的一种具有强烈纤溶作用的丝氨酸蛋白酶.该文对豆豉枯草杆菌的筛选、发酵、酶的提取、活性测定、理化性质以及动物溶栓药效试验进行了综述.     

豆豉纤溶酶研究进展及前景

对近年来豆豉纤溶酶的研究与开发进展进行了综述，重点介绍了产酶菌种的分离、培养、酶的分离纯化、酶的理化特性以及进一步研究开发的前景。     

豆豉纤溶酶的研究进展

本文主要介绍了豆豉纤溶酶菌种的筛选、发酵、理化性质、提取、活性测定以及应用前景。     

红河传统发酵豆豉中高纤溶活性菌株的分离筛选及其纤溶酶基因分析

运用脱脂乳固体培养基及纤维蛋白固体培养基的两步分离筛选法,从云南红河传统发酵豆豉中分离筛选具有高产豆豉纤溶酶活性的菌株,同时对它们的豆豉纤溶酶基因进行克隆分析,以期为新型功能性豆豉的研发提供备选菌株及理论依据。研究结果表明,两步分离筛选法能有效地从云南红河传统发酵豆豉中筛选到高产豆豉纤溶酶的菌株Bacillus subtilis LC-2-1,对该高产菌株的豆豉纤溶酶成熟肽基因分析及预测结果表明,菌株B subtilis LC-2-1确实能分泌一种由825个碱基编码275个氨基酸残基且分子量约为27.4kDa的豆豉纤溶酶,与纳豆激酶及其他豆豉纤溶酶相比差异显著,同源性仅为85.1%。同时其豆豉纤溶酶活性分析结果则表明,菌株B subtilis LC-2-1所产纤溶酶活性较高,可达79.84 U/mL。因此,本研究结果将为新型且具有溶血栓功能发酵豆豉的研发提供备选菌株及理论依据。     

豆豉纤溶酶的研究进展

从豆豉中筛选出的产豆豉溶栓酶的菌株分别有枯草芽孢杆菌（Bacillus subtiilis）和解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。其发酵工艺有固体发酵和液体发酵。豆豉纤溶酶的酶学性质包括酶的分子量、酶的等电点、酶的稳定性、酶的最适反应温度和pH值、各种抑制剂对酶活性的影响等。酶的分离纯化要根据具体实际情况，对过滤、离心、盐析、超滤、凝胶过滤和层析分离等提取方法进行不同组合。酶活的测定包括琼脂糖—纤维蛋白平板法、纤维蛋白块溶解时间法、血清板法、肽底物法、酶联免疫吸附法。     

豆豉纤溶酶研究概况及进展

豆豉纤溶酶是从我国传统发酵食品豆豉分离得到一种具有强烈纤溶作用丝氨酸蛋白酶。该文对豆豉纤溶酶产生菌筛选与诱变、发酵工艺、酶分离纯化、理化性质、分子生物学研究进行综述;同时还简介豆豉纤溶酶活性测定方法和抗栓、溶栓作用,并对其应用前景进行展望。     

固体发酵生产豆豉纤溶酶的研究

对细菌型豆豉的生产工艺作了深入研究。分析了影响豆豉纤溶酶产量的诸多因素，包括大豆浸泡水量、时间、大豆破碎程度、碳源、离子强度、蒸煮时间等。并对豆豉提取物的功能性进行了研究，如溶栓作用、抗氧化作用、抑菌作用等。     

豆豉纤溶酶生产菌发酵液功能性研究

豆豉是中国的一种传统食品,为证实其具有多种保健功能,对豆豉纤溶酶生产菌发酵液的抑菌作用、抗氧化性及溶栓活性进行了研究.试验结果表明：抑菌作用试验中,pH值在4.0～10.0之间均有抑菌活性,且抑菌效果基本保持稳定,当温度在4～80℃之间变化时,粗酶液的抑菌活性变化不很大,具有一定的热稳定性;抗氧化试验中,豆豉纤溶酶生产菌的发酵培养基和发酵液离心后的上清液都具有一定的抗氧化作用,其量不同抗氧化性也不同;溶栓作用试验中,豆豉纤溶酶在pH值4.0～10.0范围内都较稳定,酶活在碱性条件下比酸性条件下高,最适pH值为7.0,豆豉纤溶酶在冷藏和室温保存中较稳定,随着温度增高,酶活降低,豆豉纤溶酶粗酶液在贮存期中溶栓作用较为稳定。     

豆豉纤溶酶的功能及应用前景

豆豉纤溶酶源于中国传统发酵食品豆豉,具有溶解血栓等功能,是一种可以作为潜在溶栓药物的纤维蛋白酶。对豆豉纤溶酶的研究现状和应用前景进行综述,为开发新型溶栓药物指明了方向。     

豆豉溶栓酶的研究新进展

豆豉溶栓酶是豆豉中的某些微生物在发酵过程中产生的一种碱性丝氨酸蛋白酶.跟传统的一些溶栓药物相比,它不仅具有很强的溶血栓能力,还具有安全性好、成本低、口服有效等优点,极有可能开发为新一代的溶栓剂.论文重点对金属离子以及酶抑制剂对豆豉溶栓酶的理化性质影响、豆豉溶栓酶高产菌种选育方法、溶栓酶生物活性及酶制荆产品开发等最新研究成果进行了综述.为深入研究豆豉溶栓酶的特性,进一步开发豆豉溶栓酶产品提供了科学研究基础.     

豆豉营养评价及其粗纤溶酶活性检测

试验检测了收集到的不同豆豉的蛋白质、水分、总糖含量等,了解各种豆豉的营养价值;并通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测定了各种豆豉纤溶酶的活性,分析了影响豆豉纤溶酶粗酶液活性的因素。结果显示,豆豉样品DC-H8的营养价值较高;试验确定豆豉纤溶酶粗酶液的提取方法:取一定量的豆豉,保持豆豉整粒,加5倍体积的生理盐水,于4℃浸提16h,离心、过滤后测定酶活,豆豉样品DC-H8的纤溶酶活性最高,为285.759 IU/mL。     

豆豉纤溶酶活性检测及其纯化研究

通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测定收集到的豆豉中纤溶酶的活性,实验结果显示,采集于贵州南明蔡家关的豆豉样品DC-H8的纤溶酶活性最高,达到了285.759IU/mL.以该豆豉样品为研究对象,对其中的纤溶酶进行了纯化研究,实验确定的最佳纯化方案为:取一定体积的豆豉纤溶酶粗酶液,在低温(4℃)下,加入4％的活性炭粉末脱色35min;在分段盐析中,首先选择15％饱和度的硫酸铵除去杂蛋白,再用75％饱和度的硫酸铵使纤溶酶充分沉淀分离;最后用葡聚糖凝胶G-50层析分离纯化纤溶酶,收集具有较高纤溶活性的组分,得到了纯化的酶液.最终得到的豆豉纤溶酶酶液纯化倍数达到了27.74倍,活性回收率69.7％,比活力达到了13946.1IU/mg.     

淡豆豉纤溶酶的分离纯化

淡豆豉浸提液经过硫酸铵沉淀、CM-Sepharose-FF离子交换色谱和Sephacryl S-200凝胶过滤等步骤，得到豆豉纤溶酶，经SDS-PAGE表明豆豉纤溶酶为单一谱带。推断DCFE没有亚基，以单体形式存在。经过纯化，豆豉纤溶酶的回收率为3．7％，纯化倍数35．5倍，比活达到10898IU／mg。SDS-PAGE凝胶电泳和Sephacryl S-200凝胶过滤测定的DCFE相对分子质量分别为30．2kDa和31．OkDa，两种方法测定的分子量相近，说明该酶为单体酶。     

豆豉纤溶酶等微生物源纤溶酶的研究与应用进展

豆豉纤溶酶是从我国传统发酵食品豆豉中分离得到一种具有溶解血纤维蛋白作用的蛋白酶。该文对近五年以豆豉纤溶酶为代表的微生物源纤溶酶的产生菌株筛选诱变与基因克隆表达、发酵工艺优化、酶的分离纯化、纤溶酶功能研究与相关制剂及保健品的开发方面的研究进行综述,对当下国内外对纤溶酶的研究现状进行分析探究,对其应用前景与发展方向进行展望,并对纤溶酶的研究方向提出建议。     

豆豉纤溶酶产生菌的筛选及诱变

从豆豉中筛选出一株产纤溶酶活力为295.34 U/mL的菌株DXR25,经鉴定为芽孢杆菌属,DXR25经过紫外线、60Co、硫酸二乙酯(DES)、亚硝基胍(NTG)诱变,筛选得到突变株DXR7,其产酶活力为55.42.是出发菌株的2.2倍,最后对DXR7进行了10代的培养,结果表明,该突变株具有稳定的遗传性能.     

提高细菌型豆豉纤溶酶活性的生产工艺优化

以用枯草芽孢杆菌DC-2为发酵菌株,以纤溶酶活性为指标,对提高细菌型豆豉的纤溶酶活性关键技术进行了研究.主要探讨了装料量、大豆含水量、种龄、接种量、发酵温度和发酵时间等因素对酶活力的影响.结果表明,能够提高细菌型豆豉的关键技术参数为:100 L容器中装入含水量为80％的大豆40 kg,然后添加2％葡萄糖,接入2％的种龄为24 h的种子液,33℃培养72 h.在此发酵条件下,豆豉浸提液的最大纤溶酶活力提高了270 IU/mL.     

富含纤溶酶豆豉冻干粉的消化性质及抗血栓作用

为研究富含纤溶酶豆豉冻干粉口服的抗血栓作用,以豆豉冻干粉提取液酶活的变化测定模拟胃肠液对该冻干粉的影响,以血块的溶解率测定冻干粉的体外抗血栓作用,并初步确定其中的抗血栓物质。同时还测定了该冻干粉连续灌胃对大鼠凝血系统的影响。结果表明,该冻干粉受模拟胃液影响较大,酶活残留56·21%,在模拟肠液中较稳定,残留酶活大于82·86%。5%豆豉冻干粉提取液对血块的溶解率达40·84%±3·76%,而经热处理的提取液仅为12·48%±2·43%。该冻干粉能延长大鼠血浆凝血酶时间(TT),对活化部分凝血活酶时间(APTT)及凝血酶原时间(PT)无影响。因此,富含纤溶酶豆豉冻干粉宜制成肠溶制剂,具有体内外抗血栓作用,其抗血栓物质主要为豆豉纤溶酶。