毛用酸性蛋白酶的性质及应用

对诱变菌株固态发酵后所得到酸性蛋白酶的一些性质、保存条件进行了研究。相比于市售的酸性蛋白酶,自制酶在羊毛的降解处理中具有较好的效果。该酶的最适作用pH值是3．5,作用温度是40℃。pH值若高于5．0,酶活力急剧下降。温度高于70℃,酶活力基本上完全丧失。和市售的酸性蛋白酶相比,用该酸性蛋白酶处理氧化预处理后的羊毛,可以得到较大的减量率和较好的细度。     

草鱼消化道粗蛋白酶的部分性质

用丙酮脱脂然后用磷酸盐缓冲溶液从草鱼肠道中提取一种主要含有酸性蛋白酶和碱性蛋白酶的粗蛋白酶。该粗酶水解血红蛋白的最适pH=3～4，水解酪蛋白的最适pH值有2个，分别为pH4．4和PH10．3。水解牛血红蛋白的最适作用温度为37℃，水解酪蛋白的最适作用温度为45℃。酸性蛋白酶在50℃保温30min后只有大约20％的最初活性被保留，而要使碱性蛋白酶丧失80％的最初活力需要在60℃保温30min。     

酶解乳蛋白制取乳源肽的研究

用酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶对牛乳蛋白进行水解，研究了水解工艺，并通过正交试验对工艺进行了优化。结果为：酸性蛋白酶水解牛乳蛋白的最佳工艺条件是：水解温度50℃，时间120min，pH值3．0，加酶量8．0％；中性蛋白酶水解温度50℃，时间90min，pH值7．0，加酶量1．60％；碱性蛋白酶水解温度60℃，时间105min，pH值9．0，加酶量8．0％。中性蛋白酶水解物苦昧最小，最适宜作食品。     

酶法制取JA澄清剂的研究

采用纤维素酶和酸性蛋白酶对甲壳质进行酶解改性,并对实验条件进行了比较筛选。确定最适生产工艺条件：底物浓度为1％。纤维素酶用量为25μ／g,酸性蛋白酶用量为50μ／g,pH4．0-4．5．水解温度为45℃,转化时间4-5h,而且双酶水解明显优于单一酶的作用。     

水酶法提取花生水解蛋白的研究

采用水酶法从冷榨花生饼中提取水解蛋白。以溶出的蛋白质浓度为指标,研究了提取花生蛋白的酶解工艺及条件。结果表明,先用碱性蛋白酶水解再用中性蛋白酶水解效果优于单一酶,碱性蛋白酶最适条件为：温度为55℃,pH值为9．0,加酶量为0．8％,水解时间为3h;中性蛋白酶最适条件为：温度为50℃,pH值为6．5,加酶量为0．3％,水解时间为1．5h。此条件下,蛋白提取率可达90．29％。     

水酶法提取花生水解蛋白的研究

采用水酶法从冷榨花生饼中提取水解蛋白。以溶出的蛋白质浓度为指标,研究了提取花生蛋白的酶解工艺及条件。结果表明,先用碱性蛋白酶水解再用中性蛋白酶水解效果优于单一酶,碱性蛋白酶最适条件为：温度为55℃,pH值为9．0,加酶量为0．8％,水解时间为3h;中性蛋白酶最适条件为：温度为50℃,pH值为6．5,加酶量为0．3％,水解时间为1．5h。此条件下,蛋白提取率可达90．29％。     

酸性蛋白酶和纤维素酶联合水解蘑菇柄蛋白的研究

对蘑菇柄蛋白采用纤维素酶与酸性蛋白酶双酶联合水解处理,探索出最适工艺条件为先加纤维素酶,温度50℃,pH 4.5,固液比1∶9,酶用量9.0%,水解时间4 h;后加酸性蛋白酶:温度42℃,pH 3.2,酶用量9.0%,水解时间3 h。双酶联合水解后蘑菇蛋白水解率可达51%。     

紫贻贝酶解条件的研究

本试验主要测定了紫贻贝的基本组分，并利用中性蛋白酶酸性蛋白酶和碱性蛋白酶对紫贻贝酶解，制备蛋白水解液，采用凯氏定氮法和甲醛电位滴定法计算酶解液的水解度，结合酶解液的感官评价和水解度筛选最适合酶和确定酶解的最佳工艺条件。主要结论如下：紫贻贝中基本组分是粗蛋白含量为9．5％，粗脂肪的含量为6．2％，灰分的含量为2．9％，水分的含量为83．2％；中性蛋白酶的最佳酶解条件：时间3h，pH值7，温度50℃，酶的添加量0．3％，此条件下水解度为39．43％；酸性蛋白酶的最佳酶解条件：时间2h，pH值4，温度50℃，酶的添加量0．3％，此条件下水解度为39．43％；碱性蛋白酶的最佳酶解条件：时间3h，pH值8，温度45℃，酶的添加量0．4％，此条件下水解度为46．51％；在最佳酶解条件下，碱性蛋白酶对紫贻贝的酶解效果明显的好于其它两种蛋白酶，但经感官评定，碱性蛋白酶酶解液苦味和氨味较重，不符合海鲜调味品的风味要求，中性蛋白酶和酸性蛋白酶酶解液的苦味和氨味比较轻，适合作为紫贻贝水解的外加酶，综上分析，选择中性蛋白酶和酸性蛋白酶作为紫贻贝水解的外加酶。     

两种脱毛蛋白酶活力的研究

本文对两种常用的脱毛蛋白酶（2709碱性蛋白酶与A．S1398蛋白酶）在不同pH值、温度等条件下的活力变化情况进行了研究。结果表明：2709蛋白酶的活力最适pH值为9．5～10，A．S1398蛋白酶为7．5～8．0且2709酶的pH值适应范围更广，对pH值的敏感度更低；两种酶活力的温度变化曲线具有相似性，温度越高，它们的活力衰减得也越快；两种蛋白酶受Mn抖强激活，Cu^2＋、Cr^3＋、Fe^2＋、Zn^2＋等离子则对其有抑制作用；表面活性剂如洗衣粉、平平加和JFC等对两种酶具有一定的激活作用。     

复合酶水解牛肉的研究

研究了以牛肉为原料，选择复合蛋白酶(Protamex)和复合风味酶(Flavourzyme)分步水解牛肉蛋白。通过对影响牛肉水解因素的考察，得出Protamex酶的最适水解条件为：前处理加热温度90℃，加热时间10min，加酶量2％，反应温度55℃；，pH值6．0，固液比1：5，反应时间为6h，此条件下的水解度为12．57％。为了提高牛肉的水解度，采用双酶水解，其工艺条件为1先用Protamex水解6h，然后用Flavourzyme再水解6h，Flavourzyme的水解条件为加酶量6．0％，反应温度50℃，其它条件与Protamex相同，在此条件下水解度可达24.62％。     

哈尔滨地区生鲜牛乳中嗜冷菌数量与蛋白酶酶活力关系的测定

对嗜冷菌产生的蛋白酶的活性进行了研究。原料生奶经过4℃贮藏,在贮藏0,12,20,28,36,44,48,52 h分别对牛奶取样测定嗜冷菌数量和其酶的活力,实验结果表明,在4℃下贮存44~48 h时嗜冷菌数量最多,蛋白酶活力最强。     

乳清蛋白酶解条件优化

用二次回归正交旋转组合设计对乳清蛋白酶解条件进行优化,建立酶法水解乳清蛋白的水解度与水解温度、水解时间、加酶量等三因素的正交回归模型。结果表明:在反应温度57℃、加酶量8 214U/g·蛋白条件下酶解114min,可获得中性蛋白酶水解乳清蛋白的最大水解度11.72%,与模型值基本相符。     

中性和碱性蛋白酶协同酶解大豆分离蛋白研究

采用中性和碱性蛋白酶协同酶解大豆分离蛋白制备大豆多肽,采用茚三酮分析法测定酶解液中氨基氮含量以判断其酶解效率。影响大豆分离蛋白酶解主要因素有中性与碱性蛋白酶用量比、酶解pH值、酶解温度、酶解时间,通过单因素和优化酶解条件正交试验分析,筛选出酶解最适实验条件:中性蛋白酶与碱性蛋白酶用量比为1∶3、温度55℃、pH 8.5、酶解时间6 h;在此条件下酶解,氨基氮含量为15.86 mg/g。     

杆菌属蛋白酶基因的结构及其应用

本文介绍了杆菌属中蛋白酶基因的结构及其在工业、科学研究中的广泛应用。杆菌属中的蛋白酶基因具有典型的“ｐｒｅ┐ｐｒｏ┐成熟酶前体”编码特征。其中ｐｒｅ┐序列编码信号肽，ｐｒｏ┐序列编码一段为蛋白酶形成具有生物活性的合适构象所需的肽链。ｐｒｅ┐与ｐｒｏ┐序列都在蛋白酶前体从细胞中分泌出来后被切去。具有相同性质的蛋白酶即使来源于不同菌种，在基因结构上仍具有很高的同源性；而性质不同的蛋白酶，即使来自同一菌种，它们在氨基酸组成，在ｐｒｅ┐、ｐｒｏ┐序列上都存在着很大差异。克隆的蛋白酶基因可用以构建具有蛋白酶高表达活性的基因工程菌，也可被用来研究蛋白酶的结构与性能的相互关系，还可被用于构建具有特殊功能的克隆载体。     

高产中/碱性蛋白酶的枯草芽孢杆菌W1菌株的筛选及条件优化

为了筛选高产蛋白酶活性细菌,以大豆及其发酵制品为目标样品,采用酪蛋白平皿筛选到一株既可产中性蛋白酶又可产碱性蛋白酶的细菌菌株W1,经形态学及16S rDNA基因序列分析鉴定为枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp. Subtilis),其产中性蛋白酶和碱性蛋白酶活力分别为28.99 U/mL和33.19 U/mL。通过单因素试验对其产蛋白酶的培养条件进行初步优化,并在此基础上以总蛋白酶活力为指标对其产蛋白酶条件进一步进行正交试验优化,最佳条件为培养基初始pH 9.0,接种量4%,培养温度35℃,培养时间48 h,此条件下中性蛋白酶活力为40.39 U/mL,碱性蛋白酶活力为52.02 U/mL,总蛋白酶活力为92.41 U/mL,优化后相应酶活力分别提高了39.3%、56.7%和48.6%,这将为枯草芽孢杆菌W1菌株蛋白酶的酶学性质研究提供帮助,同时也是对蛋白酶活性枯草芽孢杆菌资源库的丰富。     

pH值渐变条件下双酶协同水解猪皮制备胶原蛋白寡肽的研究

本文研究了在没有外加碱的pH渐变条件下,用枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)和黑曲霉酸性蛋白酶(3000U/g)双酶协同水解从猪皮胶原蛋白制备寡肽水解物的可行性。考察了单酶单因素水解条件、双酶加入方式对猪皮降解率和蛋白质水解度的影响,并在此基础上通过正交试验进一步优化出双酶一次性投料方案下水解猪皮的最佳条件:水解温度为60℃,碱性蛋白酶加入量为25μl/g蛋白,酸性蛋白酶加入量为4%(g/g),底物浓度为60g/L,水解时间为12h。在上述最佳条件下,新鲜猪皮的降解率可达94.7%,蛋白质的水解度可达17.7%,水解物中分子量小于1000(10个氨基酸以下的肽)的寡肽选择性达到了42.5%。结果表明,在不外加碱的条件下,采用双酶协同水解方法能够显著提高猪皮降解率,特别是蛋白质水解度。     

中性蛋白酶芽孢杆菌BX-4产酶条件及部分酶学性质

采用稀释平板分离法从土壤中分离到一株产中性蛋白酶芽孢杆菌BX-4．通过单因素碳、氮源以及正交试验确定了最佳产酶培养基配方，同时还研究了起始pH值、金属离子、接种量对产酶的影响以及温度、pH值、金属离子以及表面活性剂对酶稳定性的影响；以最佳培养基为发酵培养基，于37℃、160r／min振荡培养48h，酶活达2519．35U／mL；该酶最适作用温度为55℃，最适作用PH值为7．5，在pH7．5缓冲体系中，55℃反应60min后仍有50％的酶活力，Ca^2＋和表面活性剂对酶有一定的激活作用，但激活作用不明显。     

复合酶分步酶解法提取牛骨胶原蛋白工艺的研究

以牛骨胶原蛋白初步酶解产物为研究对象,以水解度为指标,采用甲醛滴定法监测深度酶解的进程,对比分析不同的酶解条件对水解度的影响,确定了中性蛋白酶和风味蛋白酶分步水解的酶解条件。通过正交试验结果表明:采用中性蛋白酶和风味蛋白酶加酶量分步水解牛骨蛋白的最佳条件为物料比1∶750,起始pH值是6.5,先用中性蛋白酶55℃酶解3h后,再用风味蛋白酶于55℃继续酶解2h。此时水解度达到63.6%。     

巴西松子中蛋白酶的分离纯化及酶学性质

在单因素试验基础上,通过正交试验研究pH值、提取时间和料液比3个因素对巴西松子中蛋白酶活力的影响,得出巴西松子中蛋白酶的最佳提取缓冲液为pH9.0的硼酸-硼砂缓冲液、提取时间为60min、料液比为1:8(m/V);采用(NH4)2SO4沉淀、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析分离纯化巴西松子中的一种蛋白酶,结果表明:纯化后蛋白酶比活力提高到了8.61倍,回收率为21.65%。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明:该蛋白酶分子质量为33kD。酶学性质结果表明:该蛋白酶最适pH值为9.0,属碱性蛋白酶;反应的最适温度为50℃;金属离子Mn2+对该蛋白酶活性有强烈的激活作用,而Ca2+、Mg2+和Cu2+对酶活性有抑制作用。     

酶解鲽鱼下脚料的工艺优化

以鲽鱼下脚料为原料,采用不同蛋白酶对鲽鱼下脚料进行酶解。以水解度作为评价指标,比较不同蛋白酶的水解能力,筛选最佳酶,并对其水解工艺进行优化。结果表明:对鲽鱼下脚料水解效果较好的是中性蛋白酶和风味蛋白酶,中性蛋白酶水解鲽鱼下脚料的优化条件为:酶用量0.1%,pH值6.0,温度50℃,酶解时间4.5 h。风味蛋白酶水解鲽鱼下脚料的优化条件为:酶用量0.05%,pH值6.0,温度50℃,酶解时间5.0 h。二者复合的工艺条件为:中性蛋白酶/风味蛋白酶=2/1(添加量为0.15%),pH6.0、酶解时间4.5 h,温度50℃,在此条件下水解度可达44.56%。