烟草野火病研究概况

本文从地理分布、经济损失、症状、寄主范围、病原学、流行学和防治学方面对烟草野火病的研究概况进行了综述。      

烟草野火病菌特异性检测引物筛选及应用

烟草野火病是山东烟区主要的细菌性病害之一,为了能够对该病害进行精确、快速的分子鉴定,本研究从NCBI基因组数据库中下载了假单胞菌属25个不同菌种和127个丁香假单胞菌属不同致病变种的全基因组数据,利用Mauve 2.3.1进行全基因组比对,获得丁香假单胞菌烟草致病变种特异性区段。在此基础上利用Primer Premier 6.0进行引物设计,筛选出了一对丁香假单胞菌烟草致病变种的特异性检测引物40429。利用7株山东不同烟区的烟草野火病菌和4株分别来自于贵州、湖北、福建及云南的烟草野火病菌进行了该引物的适用性验证,结果表明该引物均可扩增得到大小为203 bp的单一目的条带。说明该引物对于烟草野火病菌的检测具有良好的适用性,可以用于野火病菌的分子鉴定。     

几个烟草种质材料对野火病的抗性研究

通过用针刺结合无针头注射法,在温室条件下对烟草野生种Nicotiana longiflora,普通烟草(N.tabacum)中的白肋烟品种Ky14,烤烟品种Kutsaga110、Speight G-140、中烟90和云烟85,杂交组合(Speight G-140×Ky14)F1、(中烟90×Ky14)F1和(云烟85×Ky14)F1进行烟草野火病菌的接种,对这几个烟草种质材料对野火病的抗性进行了鉴定.结果表明,N.longiflora对野火病免疫,(云烟85×Ky14)F1、(中烟90×Ky14)F1和(Speight G-140×Ky14)F1高抗野火病,Ky14和Kutsaga110抗野火病,Speight G-140、中烟90和云烟85易感野火病.     

中微量元素对烟草野火病的控制效果及其对烟草生物学性状的影响

通过设计小区试验,选择适当的时间对烟草必需的8种矿质营养元素(钙、铁、硼、锰、锌、钼、铜、镁)进行叶面喷施,研究了不同营养元素对烟草野火病的控制作用及其对烟草生物学性状的影响。结果表明,处理3(H3BO3)和处理6(Na2MoO4)对烟草野火病具有较好的防控效果分别为60.14%和71.76%;同时它们具有促进烟草叶面积增加的作用。     

防治烟草野火病的药剂测定与筛选

采用常规平板纸碟法,室内测定了12种药剂对烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)的皿内抑菌效果,结果表明,50%福美双可湿性粉剂、25%休菌清乳油、72%农用链霉素可溶性粉剂和10%浸种灵乳油对P.syringae pv.tabaci具有良好的抑菌效果。对不同药剂进行优化组合复配,采用同样的常规平板纸碟法测定其抑菌效果,结果表明,复配组合药剂的抑菌效果比单剂的抑菌效果有不同程度的提高,其中以农用链霉素+福美双、新植霉素+铜高尚、福美双+浸种灵、农用链霉素+硫酸铜和铜高尚+浸种灵等5种复配组合的抑菌效果较好。本研究可以为生产上烟草野火病的防治提供基础数据和参考。     

烟草野火病拮抗生防菌的筛选、鉴定与应用

为筛选出烟草野火病拮抗生防菌,开发防治烟草野火病的新型生物农药,降低烟叶农药残留,提高烟叶的安全性,从烟田采集的健康烟草叶片经平板划线法分离和纯化后得到287个细菌分离物,从中筛选到14个对烟草细菌性野火病有抑制作用的拮抗生防菌,测得其中具有较强抑制作用的菌株抑菌带宽度为9.3 mm,经16S rDNA序列鉴定,该菌属于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。烟草叶片经该拮抗菌液诱导后接种,叶片内主要防御酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)活性均显著增强。防效测定表明:施用生防剂后接种野火病菌的处理,拮抗菌株防治效果达97.54%,对照农用链霉素防治效果为41.44%。先接种野火病菌后施生防剂的处理,拮抗菌株防治效果达51.40%,对照农用链霉素防治效果为50.69%。说明该拮抗菌株的预防效果高于当前生产上使用的农用链霉素,且其预防效果优于治疗效果。     

烟草野火病发生与防治的研究进展

综述了烟草野火病的症状、发生流行规律和影响因素;烟草野火病的发生对烟叶结构的破坏、对烟叶光合特性和对烟株体内主要物质代谢的影响;对烟株体内防御酶活性的影响;烟草野火病的防治手段和措施;对烟草野火病的深入研究提出了建议.     

非杀菌性化学物质诱导烟草抗野火病的初步研究

测定了水杨酸、草酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、腐殖酸钾、磷酸氢二钠等7种化学物质对烟草野火病菌的室内抑菌效果和对烟草植株的诱抗作用。结果表明，供试的7种化学物质对烟草野火病菌均没有直接杀伤作用，其中水杨酸和草酸对烟草植株抗野火病有较好的诱导效果。     

黑龙江省烟草野火病菌生理小种鉴别寄主的筛选

为明确黑龙江省烟草野火病菌生理小种的分化情况,采用针刺接种法,将黑龙江省主要烟区采集的15个烟草野火病菌菌株接种到28个供试烟草品种上,通过对发病率的差异性分析和聚类分析来测定供试烟草品种的抗性表现,从而建立了一套鉴定烟草野火病菌生理小种的鉴别寄主体系,并将15个供试菌株划分为Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ4个生理小种.     

烟草野火病菌生物学特性研究

研究了烟草野火病茵的部分生物学特性，涉及致病性、菌株的保存与复壮、生长曲线及O.D.600值与CFU／mL之间关系、病菌毒素的产生等诸方面。研究发现用甘油溶液保存病菌4年后仍具有较强的致病力，并且通过复壮可使致病力进一步增强：不同菌株的产毒能力存在明显的差异，以致病力强的菌株产毒能力为更强；改用对病菌更敏感的鼠伤寒沙门氏菌为指针成功地测定了烟毒素的活性。     

双抗体夹心酶联免疫方法检测丁香假单胞杆菌斑点致病变种病菌

丁香假单胞杆菌斑点致病变种病菌可以引起十字花科细菌性黑斑病,是侵染萝卜、白菜、花椰菜等农作物的重要病害之一。以灭活的丁香假单胞杆菌斑点致病变种病菌(NCPPB1820)为免疫原免疫小鼠,通过杂交瘤细胞技术,筛选最终获得6株产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞。将辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)与抗体偶联,作为检测探针,分别将6种单克隆抗体作为包被抗体,进行两两配对筛选。结果表明,所制备的抗体特异性较好,对水稻细菌性谷枯病菌、水稻细菌性条斑病菌、玉米细菌性枯萎病菌、丁香假单胞菌丁香致病变种均没有交叉反应。以6号抗体作为检测抗体(6-HRP),以1号抗体作为包被抗体,建立酶联免疫分析法获得了最佳的敏感度。检测丁香假单胞杆菌斑点致病变种的最低检测限为1.5×105cfu/m L,定量限为4.12×105cfu/m L。基于双抗体夹心的酶免疫方法特异性好,便捷,可以实现对丁香假单胞杆菌斑点致病变种病菌高通量测定。     

猕猴桃溃疡病菌拮抗菌筛选、鉴定及发酵条件优化

目的:从不同地区猕猴桃根际土壤中筛选拮抗猕猴桃溃疡病菌的菌株,优化其产生抑菌活性物质的发酵条件,为猕猴桃溃疡病的生物防治提供潜在的资源菌。方法:采用平板稀释法从猕猴桃根际土壤中分离获得菌株,采用抑菌圈法筛选拮抗菌;通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对其进行鉴定;并采用单因素及正交试验优化培养基组分及发酵条件。结果:从土壤中共分离到288株放线菌,其中编号为NA-TXL-1的菌株对猕猴桃溃疡病菌的拮抗效果最佳,采用预防法、治疗法进行盆栽实验,发酵原液的防治效果分别为73.06%、55.62%,初步鉴定该菌株为抗生链霉菌。其最佳发酵配方和培养条件为:乳糖30 g/L、酵母粉3 g/L、NaCl 1 g/L、K_2HPO_4 0.5 g/L、MgSO_4·7H_2O 0.5 g/L、FeSO_4 0.01 g/L,种子培养基为乳糖-酵母粉培养基,接种量为2%,起始pH值为7.0,发酵原液、上清液、重悬液分别培养5、14、5 d。结论:经鉴定,拮抗菌株为Streptomyces antibioticus。在优化的发酵条件下,该菌株对猕猴桃溃疡病菌具有更好的拮抗效果。     

Inhibition of Pseudomonas fluorescens by Hydroxycinnamic Acids and Their Alkyl Esters

Alkyl esters of six hydroxycinnamic acids and cinnamic acid were evaluated in a liquid medium for their effectiveness in inhibiting the growth of Pseudomonas fluorescens, a bacterium commonly implicated in food spoilage. Compounds were tested at concentrations of 0–250 ppm, using turbidity as a measurement of growth. At 125 ppm, esters of p-coumaric and caffeic acids were more inhibitory than either methyl or propyl paraben. Methyl esters of methoxylated cinnamic acids were much less inhibitory than the methyl esters of the corresponding positional hydroxylated cinnamic acids. The results indicate that esters of certian of these naturally occurring hydroxycinnamic acids may be useful as food additives to extend shelf life by inhibiting microbial growth.     

面包乳杆菌ZHG2-1对荧光假单胞菌群体感应的淬灭作用

以紫色杆菌CV026为指示菌株，验证面包乳杆菌ZHG2-1群体感应淬灭活性，检测其对荧光假单胞菌生物膜、致腐因子表型以及相关基因表达水平的影响，探究面包乳杆菌ZHG2-1对荧光假单胞菌群体感应的淬灭机制。结果表明:菌株ZHG2-1无细胞上清液对荧光假单胞菌AHLs的降解活性为100%。在亚抑制质量浓度(1.0，2.0，3.0 mg/mL)下，菌株ZHG2-1粗提物对荧光假单胞菌生物膜的抑制率和清除率分别为在9.66%~31.32%和28.62%~62.82%范围，对胞外多糖、蛋白酶、脂肪酶、生物胺等致腐因子抑制率在7.23%~100%范围，并呈质量浓度依赖性。扫描电镜结果表明亚抑制质量浓度的菌株ZHG2-1粗提物处理使其生物膜量显著减少，细菌菌落处于分散状态。qRT-PCR结果显示，菌株ZHG2-1粗提物对荧光假单胞菌群体感应基因rhlI和rhlR分别下调0.93和0.99，aprX、algA、orm、flgA、ldcA等生物膜和致腐基因的表达水平也被显著抑制，说明面包乳杆菌ZHG2-1通过干扰荧光假单胞菌群体感应基因的表达，影响其生物膜和腐败因子的产生。本研究结果为开发水产品新型生物防腐剂提供理论依据。     

生防镰刀菌(Fusarium sp.)对烟草列当的防效

为了减轻列当对烟草的危害,利用自主分离纯化并繁殖的生防镰刀菌(Fusarium sp.)进行了烟田列当防治试验.结果表明,烟田土壤先用硫磺调节酸碱度后再穴施生防菌,然后在列当寄生前期分3次向土壤中喷施生防菌的效果最好,可推迟列当出土时间3d,生防菌对列当的寄生率为31.20％,对烟田列当的防治效果达62.44％,同时烟田其他病害发生情况最轻,烟叶产量为4895 kg/hm2,上中等烟比例达89.89％,比对照提高33.95％.