东北市售鸡肉中空肠弯曲杆菌的分离鉴定、分型及耐药性分析

为了揭示东北地区市售鸡肉中空肠弯曲杆菌的污染情况、种群特征及耐药性。采集东北地区市售鸡肉样品1 000份,分离鉴定空肠弯曲杆菌。通过多位点序列分型技术分析空肠弯曲杆菌的遗传多样性。利用K-B琼脂扩散法检测该致病菌对8种抗生素的耐药性。结果表明:1 000份样品中共分离出62株空肠弯曲杆菌,污染率为6.2%;62株空肠弯曲杆菌被分为14个序列型(Sequence Type,ST),其中ST5和ST1为该种群的优势ST;耐药性分析结果显示,62株空肠弯曲菌对环丙沙星、复方新诺明和头孢噻肟具有高度的敏感性。     

多位点序列分型技术以及在乳酸菌分类鉴定中的应用

多位点序列分型(Multi-Locus Sequence Typing,MLST)技术是通过测定同种细菌管家基因(housekeeping gene)的序列,来确定等位基因的差异,进而比较分析菌株之间进化关系的一种分子分型方法。该方法在细菌生物学基础研究方面已经发挥了重要的作用,本文主要阐述MLST技术的方法和其在乳酸菌分类鉴定中的应用。     

马乳酒样乳杆菌ZW3多位点序列分型

该研究采用多位点序列分型方法将马乳酒样乳杆菌ZW3与其他同种或近源乳杆菌菌株进行细致的分类鉴定,同时确定马乳酒样乳杆菌ZW3特定的生物遗传标签,使用多位点序列分型方法对马乳酒样乳杆菌ZW3菌株与9株同种或近源乳杆菌一起进行多位点序列分型研究。该研究选取了7个管家基因(rpo A、Hsp60、Leu S、rps B、gly K、pyr G、fus A)对这10株同种或近源乳杆菌菌株进行分型,最终得到8个序列型,马乳酒样乳杆菌ZW3单独拥有一个序列型ST8。这7个基因中,除pyr G外其余6个基因存在连锁不平衡现象,发生过轻微的基因重组现象,发生的变异通常为中性选择。马乳酒样乳杆菌ZW3与马乳酒样乳杆菌an3、shan3、shan4、shan5之间的遗传距离很近,与另外5株菌之间的遗传距离较远。该研究中选取的这7个管家基因可以将马乳酒样乳杆菌ZW3与其他同种或近源乳杆菌菌株进行区别,马乳酒样乳杆菌ZW3菌株的识别有助于在商业制品中确定其特定的益生功能。     

婴幼儿配方乳粉加工环境中蜡样芽孢杆菌多位点序列分型

以分离自婴幼儿配方乳粉加工环境中蜡样芽孢杆菌为研究对象,利用多位点序列分型(MLST)技术对蜡样芽孢杆菌的多样性和系统进化关系进行探究。结果表明,84株蜡样芽孢杆菌共分成24个ST型,分别是ST-24、ST-26、ST-32、ST-62、ST-144、ST-374、ST-999、ST-1119、ST-1243、ST-1284、ST-1333、ST-1334、ST-1335、ST-1336、ST-1337、ST-1338、ST-1339、ST-1340、ST-1341、ST-1342、ST-1343、ST-1344、ST-1345及ST-1347,其中ST-999(22.62%)、ST-1343(15.48%)、ST-1335(7.14%)与ST-1345(7.14%)是该婴幼儿配方乳粉加工环境中的优势ST型。同时发现了3个新的等位基因pur-242,pyc-198,ilv-276与14个新的ST型ST-1333、ST-1334、ST-1335、ST-1336、ST-1337、ST-1338、ST-1339、ST-1340、ST-1341、ST-1342、ST-1343、ST-1344、ST-1345和ST-1347。系统发育分析表明24个ST型与B.cereus、B.anthracis和B.thuringiensis这三个种显示了更近的系统发育关系,与蜡样芽孢杆菌群体中的另外8个种的亲缘关系较远。     

成都市海产品中副溶血性弧菌耐药特征及多位点序列分型

目的了解成都市不同种类的海产品中副溶血性弧菌的污染程度、耐药情况、毒力基因分布、基因分型情况,为成都市食源性副溶血性弧菌流行及其风险评估提供基础数据。方法参照GB 4789. 7—2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》,从不同种类的海产品中分离副溶血性弧菌疑似菌株,通过生化试验及16S r DNA测序进行准确鉴定;采用纸片扩散法对分离株进行药敏试验,通过聚合酶链式反应(PCR)检测与其致病性相关的2个毒力基因,对分离株进行多位点序列分型分析。结果从采集的380份海产品中共104份样品检出副溶血性弧菌,总检出率为27. 4%。药敏试验表明,97. 1%(101/104)的分离株具有耐药性,其中对氨苄西林的耐药率最高(95. 2%,99/104)。分离株trh基因携带率为12. 5%(13/104),tdh基因携带率为1. 0%(1/104); 104株分离株共分为38个ST型,其中ST1801、ST392、ST413型分离率较高,分离株未出现流行克隆群。结论流通过程中不同种类海产品副溶血性弧菌污染率、耐药情况、毒力基因分布存在差异,可能与养殖环境、运输条件等有关。     

我国婴儿配方粉来源的克罗诺杆菌脉冲场凝胶电泳分子分型和多位点序列分型研究

目的探讨我国婴儿配方粉污染克罗诺杆菌的主要分子分型特征,分析不同地区间菌株亲缘相关性,为我国克罗诺杆菌引起的疾病溯源提供技术支撑。方法采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)两种方法,对全国19个省/自治区/直辖市婴儿配方粉来源的49株克罗诺杆菌进行分型研究。结果 49株克罗诺杆菌PFGE分型得到38个带型,未发现有明显的优势分型和聚集现象。MLST共获得15个已知序列型(ST型)和2个新ST型,ST4、ST1和ST64为优势型别,分别占菌株总数的20.4%(10/49)、18.4%(9/49)、10.2%(5/49)。PFGE型和MLST型结果分析表明,具有相同PFGE型的菌株也有相同的MLST型,而相同MLST型却不一定具有较高的亲缘关系。结论我国婴儿配方粉来源的克罗诺杆菌图谱具有高多态性和离散性,据此预测我国婴儿配方粉污染克罗诺杆菌导致婴儿患病以散发为主,出现多人患病的暴发事件几率较低。     

全球副溶血弧菌环境菌株的基于碱基序列和肽链序列的多位点序列分型

为了了解来自全球的副溶血弧菌环境菌株的群组结构和克隆复合体构成,利用PubMLST公共数据的数据,筛选其中具有完整序列分型（sequence type,ST）及肽序列型（peptide sequence type,pST）的来自全球的副溶血弧菌环境菌株数据,进行亚群分析和克隆复合体分析,并分别构建了基于ST型和pST型的最小生成树。结果表明,从数据库中共筛选到具有ST型及pST型的来自全球的副溶血弧菌环境菌株数据886 条,共含有663 个ST型,以ST3型为最多,但也仅含27 条菌株信息。其中,有436 条菌株数据来自中国（包括大陆、香港和台湾）,覆盖了410 个ST型,每个ST型含1～4 条菌株数据,这436 条菌株数据又可分为128 个pST型,其中pST1型为最多,达116 条菌株数据。利用eBURST软件对数据进行分析,共发现了73 个组,483 个单体。STRUCTURE软件分析显示来自全球的副溶血弧菌环境菌株的适宜亚群数为4,各亚群内的样品平均距离为0.981 7。综上结果表明,来自全球的副溶血弧菌环境菌株具有高度多态性,可更细分为4 个亚群,MLST分型时以ST3型为多,AA-MLST分型时以pST1型为主。     

嗜热链球菌多位点序列分型及其特性测定

本文旨在研究嗜热链球菌多位点序列分型方法的可行性。利用多位点序列分型技术,对实验室保藏的8株和全基因组公布的6株嗜热链球菌进行基因分型,并分析菌株的同源性,最后测定8株嗜热链球菌的产酸速率和蛋白质水解等表型特征。结果显示8株实验室菌株分属于4种基因型,6株全基因组菌株分属于5个基因型;菌株亲缘关系远近不一,其中分离自中国的ND03、MN-ZLW-002和0#具有较高同源性,分离自新疆酸奶的09086、09087和09088具有较高同源性,分离自内蒙古酸奶的菌株09067、09078和09079与分离自法国酸奶的JIM8232具有较高同源性,分离自法国发酵剂的s4与分离自法国酸奶的CNRZ1066具有较高同源性;8株实验室菌株的产酸速率和蛋白质水解具有菌株特异性,且表型特性与基因分型基本一致。多位点序列分型可对嗜热链球菌进行有效分型。     

1株具有拮抗空肠弯曲杆菌作用的唾液乳杆菌的研究

对分离自泡菜、发酵奶酒以及新鲜婴儿粪便的11株乳酸菌(已证明其发酵上清液对空肠弯曲杆菌生长具有明显抑制作用)进行研究。经对其人工胃、肠液的耐受能力测定,表明这11株乳酸菌通过胃肠道后均能存活。经对全部乳酸菌抑制共培养空肠弯曲杆菌生长能力的测定及其抑菌物质的鉴定,得到对共培养空肠弯曲杆菌生长具有强烈抑制作用的1株唾液乳杆菌ZX5,该菌发酵上清液的抑菌物质很可能为有机酸、过氧化氢及细菌素类物质。测定该株唾液乳杆菌抑制空肠弯曲杆菌黏附及侵袭HT-29细胞的能力,结果表明ZX5可将空肠弯曲杆菌对HT-29细胞的黏附及侵袭率降低38%~55%。其中,以排阻作用最为明显。     

出入境动物源性食品中单增李斯特菌的多位点序列分型分析

对出入境动物源性食品中分离的单增李斯特菌进行多位点序列分型（mutilocus sequence typing,MLST）分析,了解其序列型分布特点及不同菌株之间的亲缘关系。提取单增李斯特菌基因组DNA,选择其7 个管家基因进行聚合酶链式反应扩增并测序。将测序结果截成标准序列的长度后上传到MLST数据库进行比对分析,获得7 个管家基因的等位基因谱和序列分型编码,并将结果采用不加权算术平均组对（unweighted pair group method usingarithmetic averages,UPGMA）法进行聚类分析。89 株单增李斯特菌共获得51 个STs,其中26 个为新获得的STs（STnew1～STnew26）;数量最多的5 个STs为ST8（9.0%）,ST121（9.0%）、ST7（5.6%）、ST87（5.6%）及新发现的STnew3（7.8%）;其中ST456、ST34、ST343、ST19、ST517、ST201、ST98、ST330和ST73为在国内首次获得。采用UPGMA算法得到的进化树可将89 株菌株分为3 大类群,分类的结果与单增李斯特菌血清学家系分类结果一致。MLST结果对了解出入境动物源性食品中分离的单增李斯特菌的亲缘关系及流行病学溯源有重要意义。     

基于多位点序列分型对新疆人及动物食品源性粪肠球菌种群进化关系解析

从母乳、奶酪、马奶、驼奶以及冷水鱼肠道中共分离得到59 株粪肠球菌。通过多位点序列分型技术分析不同来源分离株的种群结构和进化关系。结果表明,59 株分离株被划分为12 个序列型,3 个克隆复合体和3 个独特型,没有序列型被划分为高风险克隆复合体。持家基因分裂分解分析结果显示,基因重组在粪肠球菌进化过程中发挥了重要的作用。通过最小生成树分析发现,粪肠球菌遗传关系与分离地区的相关性较弱。尽管eBURST和系统发育分析表明母乳源和冷水鱼源的粪肠球菌具有一定的宿主特异性,但在奶酪、驼奶和马奶中仍然可以检测到与其密切相关的粪肠球菌克隆。结果表明,来自不同宿主的粪肠球菌将适应新的生态位,并通过生产实践和食物链传播。为减少人畜共患病的潜在风险,有必要进行持续监测。     

成人粪便中长双歧杆菌长亚种的分离鉴定及多位点序列分型分析

为了对成人粪便中分离的长双歧杆菌长亚种进行多位点序列分型分析,采用改良MRS培养基从健康成人粪便中分离的长双歧杆菌长亚种,通过生理生化试验结合16S rDNA和热应激蛋白60(heat-shock protein,hsp60)同源性分析鉴定分离株,利用同源性分析及多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术进一步分析长双歧杆菌长亚种的基因多态性。从12个健康成人体内分离得到24株厌氧的细菌菌株,经形态学观察、生理生化试验、16S rDNA及hsp60同源性分析发现,其中14株分离株为长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longum subsp. longum)。MLST结果表明:14株长双歧杆菌长亚种可分为10种基因型,且均与Bifidobacterium longum subsp. longum ATCC 15707为不同基因型。健康成人粪便中分离的长双歧杆菌长亚种具有较大的基因多态性。     

禽肉制品中单增李斯特菌的DiversiLab分型

目的：研究从同一类食品中分离出的单增李斯特菌间的同源性关系,为预测预警保障食品安全和食源性疾病溯源提供科学依据和技术支持。方法：应用DiversiLab分型系统对2001-2010年福建出入境检验检疫局从各类禽肉制品中分离出的25 株单增李斯特菌进行分型,其中包括：DNA提取、重复序列-聚合酶链式反应（repetitivesequence-based polymerase chain reaction,rep-PCR）、微电泳芯片分离检测及数据分析。结果：DiversiLab分型中,相似系数为95%时,25 株菌被分为了6 组（G）;相似系数为97%时,25 株菌被分为11 组（P）。结论：DiversiLab分型结果较准确地揭示了25 株菌株间的亲缘性关系。基于rep-PCR的DiversiLab分型系统,是一种操作简单、分辨率高、重复性好且高效快速的基因分型方法,可作为食源性病原体检测及食源性疾病溯源的工具。     

An Enzyme Immunoassay Technique for Detection of Salmonellae in Meat and Poultry Products

A commercially available enzyme immunoassay (ELISA) in which a myeloma protein (MOPC 467) is used for detection of salmonellae was compared with two conventional cultural methods for detection of salmonellae in naturally contaminated meat and poultry products. Products tested included mechanically deboned poultry, chitterlings, poultry carcass rinsings, chicken necks, luncheon loaf emulsion, pork sausage and basturma. There was 100% agreement between ELISA and cultural methods. The ELISA technique is specific and rapid. Identification of Salmonella-contaminated meat and poultry products was accomplished in 2-3 days compared to the 4-6 days required by conventional cultural methods.     

禽肉中铜绿假单胞菌的分离及其耐药性

采用GB 4789.4—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》中的选择性前增菌方法从鲜鹅肉、鸭肉样本中检测到2株疑似沙门氏菌的菌株,但经ATB生化鉴定和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定为铜绿假单胞菌。比对2株铜绿假单胞菌和沙门氏菌的生化图谱,其中鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶和L-阿拉伯糖的实验结果同为阳性,其余生化反应结果差异较大;2株铜绿假单胞菌的质谱标识峰足迹与肠炎沙门氏菌CICC21482有明显不同。微生物耐药实验结果表明:大部分抗生素对铜绿假单胞菌无抑制作用,只有喹诺酮类抗生素环丙沙星、氨基糖苷类抗生素庆大霉素和链霉素对其有一定的抑制作用。     

美国肉禽检验检疫体系及其对我国肉品安全的启示

本文从法律法规、组织机构、致病菌的控制措施、HACCP体系、残留监控体系、进出口检验检疫等方面详细介绍了美国肉类检验检疫体系,针对我国的实际情况,提出了一些具体建议。