发酵乳球菌菌株的PCR鉴定

对9株发酵乳球菌标准菌株进行MRS固体平板培养基划线分离和镜检观察,采用特异性PCR对其进行鉴定,划线分离得到11株菌;依据各菌种代谢酶编码基因序列差异设计菌种特异性PCR引物,进行PCR扩增,将其在菌株水平上鉴定为9株菌(6株乳酸乳球菌、2株嗜热链球菌和1株无乳链球菌)。实验还获得了2个乳酸乳球菌的种特异性PCR引物LclamyLF-R和LclmapA2F-R、2个嗜热链球菌的种特异性PCR引物SttglgPF-R和SttamyLF-R以及可能是标准菌株AS1.1936的株特异性的PCR引物LclamyYF-R。     

发酵乳中乳酸菌的分离鉴定及优良菌株的筛选

从市售发酵乳中分离鉴定出保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌,对其进行凝乳情况的考察和产酸能力、后酸化能力、产香能力、产黏能力、分解蛋白质能力及保健功能的测试,各筛出一株优良菌株,拟定在后续试验中按一定比例作进一步的应用研究,以期制备高效复合菌株发酵剂。本试验可为实际生产中发酵乳优良菌株的筛选提供理论依据。     

乳酸乳球菌镉抗性菌株的鉴定及质粒消除的研究

为构建乳酸菌食品级载体/受体系统.从分离自内蒙古传统乳制品103株乳源性乳酸菌中筛选出7株高浓度镉抗性菌株.特异性16SrDNA PCR扩增产物的序列测定结果表明.其中两株为乳酸乳球菌.PCR扩增镉抗性基因部分序列证实了这两株乳酸乳球菌含有镉抗性基因,为镉抗性阳性菌株.通过物理和化学方法消除乳酸乳球菌内源质粒,确定了镉抗性质粒,并获得一系列衍生菌株,包括无质粒菌株.为进一步研究各种质粒的功能及基因表达提供了理想的宿主,也为乳酸菌食品级载体/受体系统的构建奠定了基础.     

酱油渣中乳酸乳球菌分离鉴定及对模拟胃肠环境的耐受性

利用形态学观察、生理生化试验、16SrRNA基因序列分析方法,从酱油渣中分离鉴定乳酸乳球菌,并研究其对模拟胃肠环境的耐受能力。初步从酱油渣中分离得到4株乳酸乳球菌,3株鉴定为Lactococcus lactis subsp.hordniae,称之为HT127、HT223和HT227;1株鉴定为Lactococcus lactis subsp.lactis,称为HT122。生长曲线测定结果发现,4株菌生长情况基本相似,对数生长期为2～12h。模拟胃肠环境耐受试验结果表明:耐受胃液3h后,菌株HT223、HT127、HT227、HT122的菌存活率达(94.85±0.05)%,(81.67±0.25)%,(77.99±0.58)%,(58.57±0.57)%;在模拟肠液中继续培养8h,菌株HT122、HT127、HT223、HT227的菌存活率为(77.78±0.68)%,(67.42±0.72)%,(34.25±0.08)%,(22.28±0.18)%。说明菌株HT127对人工模拟胃肠液显示出较好的耐受能力。     

补料策略优化促进乳酸乳球菌HB03发酵合成Nisin

为提高乳酸乳球菌HB03发酵合成Nisin的效率,本研究基于乳酸乳球菌发酵生长期间存在的氧化胁迫效应和胞外氨基酸消长规律,分析了肽水解酶系、UMP从头合成和肽聚糖合成代谢在转录组水平的表达差异,确定对数中后期Nisin合成限制因素为半胱氨酸（cysteine,Cys）和精氨酸（arginine,Arg）供应不足,并通过氨基酸单因素和碳氮源补加优化,确定10 L发酵罐水平优化的补料策略为：11、13.5、17、19.5 h分别加入0.15 mmol/L的Cys,12 h补入蛋白胨（15 g/L）,10～24 h补入蔗糖（1.5 g/（L·h））,12～21 h流加Arg(0.25 g/（L·h）)。在此条件下Nisin效价达到了8 963 IU/m L,比只补加Cys发酵效价（6 993 IU/m L）提高了28.2%,研究结果可为Nisin工业发酵提供重要参考。     

利用16S rDNA部分序列聚类分析鉴定乳球菌

在表型鉴定的基础上，应用已发表的16SrDNA序列设计引物，扩增L．sp．F001菌株16S rDNA基因，并进行测序，将结果与同属及非同属的乳酸菌进行同源性比较。结果表明，L.sp．F001菌株与同属的乳酸乳球菌同源性为99％上，尤其与乳酸乳球菌叶蝉亚种NC-DO2181T同源性为100％，与不同属的肉明串珠菌、漫游球菌、嗜盐四联球菌同源性分别为77．0％，82．1％，78．2％。结论：菌株L.sp．F001为乳酸乳球菌。     

乳酸乳球菌乳亚种丁二酮变种发酵乳风味成分分析

使用同时蒸馏萃取-气谱-质谱(SDE-CC-MS)技术对乳酸乳球菌乳亚种丁二酮变种发酵乳中风味物质进行了定性及定量分析,经分析有19种成分属于其代谢产生的风味物质,其中酯类4种,醇类1种,杂环化合物1种,短链挥发性脂肪酸5种,羰基化合物8种,其中乙醇、2,3-丁二酮、2,3-戊二酮可及乙酸的含量明显高于其他菌种发酵乳中的相应含量.     

乳酸乳球菌发酵液中乳链菌肽的分离纯化

对乳酸乳球菌乳酸亚种SQ80随pH的改变吸附乳链菌肽的规律进行了研究，pH6．5时吸附率达91．5％，pH3以下吸附率为0。通过调整pH，使乳酸乳球菌选择性地吸附、释放乳链菌肽，达到了较好的分离纯化效果，HPLC检测显示单一尖峰，乳链菌肽回收率58．2％，纯化倍数75。     

开菲尔粒中一株乳酸乳球菌的分离及性能研究

为了筛选益生乳酸菌,从传统发酵乳制品之发酵剂开菲尔粒中分离到一株优势菌株,命名为HUCM 201,经形态学特征、16S rDNA基因序列及生理生化特性分析,将其鉴定为乳酸乳球菌乳亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)。该菌株对酸和胆汁均表现出了一定的耐受能力,在模拟人工胃液的环境中培养3 h后,活菌数接近于105 CFU/mL水平;而经1%牛胆汁作用4 h后,活菌数仅出现了微弱的减少。同时,以Caco-2细胞为模型模拟肠道上皮细胞检测细菌的黏附能力,菌株HUCM 201对Caco-2细胞表现出了一定的黏附性,黏附率为1.93%。通过最低抑制浓度法(MICs)评价了其对抗生素的敏感性,发现其对氨苄青霉素、万古霉素、红霉素、氯霉素、青霉素5种常见抗生素均敏感。乳酸乳球菌乳亚种HUCM 201可作为一株潜在的优良候选菌株进行深入研究。     

云南腐乳发酵菌种的分离鉴定及其低盐腐乳的品质分析

对云南牟定腐乳中的霉菌进行分离纯化,获得适用于腐乳发酵的菌种,并将其应用于低盐腐乳生产中,探讨低盐发酵对腐乳品质的影响。通过形态学和分子生物学鉴定筛选菌种;采用标准法、扫描电子显微镜、顶空固相微萃取-气质联用技术和感官评价分别分析了低盐腐乳的理化性质、微观结构、挥发性风味成分和感官品质。从腐乳前发酵毛坯中分离纯化获得了白色的优质总状毛霉(M2)并应用于低盐腐乳的制备;随着盐含量的降低,腐乳中总酸、氨基酸态氮、水溶性蛋白、游离氨基酸含量逐渐升高,蛋白质水解程度逐渐增大,腐乳凝胶孔径逐渐缩小,结构更加致密均一。低盐腐乳中共检测出了45种挥发性风味物质,且盐含量对挥发性风味物质含量有较大影响,感官评定结果表明,盐含量对腐乳的滋味和质地影响较大,且M2-70%的接受度最高。实验所获得的总状毛霉适用于云南腐乳的发酵,适当的低盐发酵可提高腐乳的品质。     

西藏灵菇发酵乳中优势菌群的分离鉴定

通过对西藏灵菇菌块的电镜扫描观察和发酵乳液中微生物的分离、纯化及生理生化鉴定,确定了西藏灵菇发酵乳中的优势菌群为乳酸球菌、乳酸杆菌、酵母菌和醋酸菌。其中乳球菌归为5个种属,分别为粪肠球菌、坚强肠球菌、乳酸乳球菌乳脂亚种、假肠膜明串珠菌、类肠膜明串珠菌;乳杆菌归为3个种属,分别为短乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌;酵母菌归为4个属,分别为酵母属、酒香酵母属、假丝酵母属、类酵母属;醋酸菌鉴定为恶臭醋杆菌。     

一株安徽传统酸奶中产抑菌物质的乳酸菌的筛选与鉴定

目的从安徽传统发酵酸奶中筛选出一株具有抑菌活性的乳酸菌(编号为SN-5)。方法通过菌落形态观察、染色镜检、生理生化和分子生物学实验进行鉴定分析,利用牛津杯法进行抑菌实验。结果通过实验排除乳酸、乙酸和过氧化氢干扰后,L.delbrueckii ssp.bulgaricus SN-5的无细胞发酵上清液(cell-free fermentation supernatant,CFS)对大肠杆菌(ATCC8099)和金黄色葡萄球菌(ATCC6538)仍具有抑制作用,且经胰蛋白酶、胃蛋白酶和胃蛋白酶K处理后抑菌作用下降明显,说明L. delbrueckii ssp. bulgaricus SN-5所产主要抑菌物质为蛋白类物质。结论 L. delbrueckii ssp. bulgaricus SN-5可作为食品运输和贮藏过程中控制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的拮抗制剂出发菌株,为新型生物防腐剂的开发奠定了一定的理论基础。     

健康成人粪便中双歧杆菌的分离鉴定及其发酵乳体内特性研究

为筛选具有潜在益生功能的双歧杆菌,采用MRS培养基,结合菌落形态观察和16S rDNA基因序列同源性分析,从上海地区健康的成人粪便中分离鉴定双歧杆菌,通过7 L发酵罐发酵试验筛选优良菌株,并利用其制备发酵乳,对发酵乳的体内特性进行研究。结果表明,分离并鉴定到3株长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）（编号为P-1、P-2和P-3）,其中菌株P-2制备的发酵乳在稳定期活菌数最高,遗传稳定性好,被确定为优良菌株,并被命名为DD98。菌株DD98制备的发酵乳能显著增加小鼠胃肠道内有益菌、减少有害菌的表达（P＜0.05）,具有调节肠道菌群的作用。此外,能维持小鼠正常的体质量、血常规指数,有利于小鼠脏器的生长。     

甘肃肃南牧区传统发酵乳中乳酸菌的分离鉴定

以5份甘肃肃南牧区传统发酵乳制品为原料进行乳酸菌的分离和鉴定,共分离出25株乳酸菌。对其中23株产乳酸的菌株利用形态、生理生化分析和碳水化合物发酵产酸实验进行鉴定。经鉴定得出23株分属为4个属,11个种。其中乳杆菌属[Lactobacillus(L.)]11株,乳球菌属(Lactococcus)6株,明串珠菌属(Leuconostoc)3株,肠球菌属(Enterococcus)3株。具体来说,L.plantarum6株、L.fermentum2株、L.brevis1株、L.minor2株、L.lactis subsp.lactis3株、L.lactis subsp.cermoris3株、L.mesenteroides1株、L.lactis2株、E.faecium1株、E.faecalis1株、E.durans1株。L.plantarum占分离菌株的26.1%,是优势菌株。      

青海省海西地区传统发酵山羊乳中乳酸菌的分离及鉴定

从采自青海省海西地区牧民家庭的11份以山羊奶为主要原料的传统发酵乳中分离得到33株乳酸菌，经过形态特征．生理生化特性，糖发酵试验和乳酸旋光性的测定，将这33株乳酸茵初步鉴定为7株Lldelbrueckiisubsp．Lactis，4株L．delbrueckii subsp．bulgaricus.3株L．acidophilus，1株L，coryniformis subsp，corynformis，12株S．thermophilus，Ped．日cidilaaici 3株，Ped．Unnaeequi 2株，Leu．mesenteriodes subsp.mesentemiodes 1株，其中，杆菌占所分离菌株的45．45％，球菌占所分离菌株的54．55％。     

Antihypertensive activity of milk fermented by Enterococcus faecalis strains isolated from raw milk

A total of 231 microorganisms were isolated from raw cow milk samples and the angiotensin-converting enzyme-inhibitory (ACEI) activity of the resultant fermented milk produced with the isolated microorganisms was assayed. Forty-six of these microorganisms were selected on the basis of high ACEI activity. Four Enterococcus faecalis strains stood out as producers of fermented milk with potent ACEI activity (IC₅₀ (the protein concentration that inhibits 50% of ACE activity): 34–59 μg mL⁻¹). Single doses (5 mL kg⁻¹) of the whey fraction obtained from these fermented milk samples were administered to spontaneously hypertensive rats (SHR) and to normotensive Wistar-Kyoto (WKY) rats in order to investigate their possible antihypertensive activity. Highly significant decreases in the systolic blood pressure (SBP) and in the diastolic blood pressure (DBP) were observed when the fermented milk was administered to SHR. Nevertheless, the fermented milk did not modify the SBP and the DBP of the WKY rats. Raw cow milk is an excellent source of wild lactic acid bacteria able to produce fermented milk with antihypertensive activity and antihypertensive activity of milk fermented by Enterococcus faecalis strains was associated with peptides different from Ile-Pro-Pro and Val-Pro-Pro.     

不同发酵香肠中微球菌与葡萄球菌的筛选与鉴定

144株分离色拉米发酵香肠的微球菌科菌株被鉴定.所用的发酵香肠来自三个地区:新疆、山东、湖南,每个地区选择两个厂,香肠出自制作的的三个不同阶段.其中木糖葡萄球菌是主要菌种(95%),经过生化反应鉴定出共有12种典型的木糖葡萄球菌,2号和5号两种菌占大多数(38.8%,33.6%).根据观察,木糖葡萄球菌5号,显示硝酸盐还原酶和脲酶活性,适度的蛋白质和脂肪分解能力,产生乙偶姻,适合做发酵剂.     

发酵肉制品中降胆固醇乳酸菌的分离及鉴定

以传统发酵肉制品为原料,通过MRS培养基分离、纯化得到100余株乳酸菌。经筛选得到符合发酵肉制品生产要求的乳酸菌4株,又从中筛选出1株具有降低胆固醇作用的植物乳杆菌,其降胆固醇能力达到24.6%,可将其作为发酵剂应用于低胆固醇类的发酵肉制品中。