鳙鱼酶解物体外抗氧化的研究

利用碱性蛋白酶Alcalase对鳙鱼进行控制酶解,制备出具有清除自由基活性的酶解物并比较其还原能力和对脂肪氧合酶活性的影响,并考察其对红细胞溶血、肝线粒体肿胀的影响,结合不同处理后肝脑组织中MDA浓度的测定以对鳙鱼酶解物在模拟体系中的抗氧化活性进行综合评价。结果表明三种鳙鱼酶解物的肽提取率均在70%以上且主要由寡肽(含5～6个氨基酸残基)组成,三种酶解物均具有一定的还原能力,在较高浓度时能抑制脂肪氧合酶的活性并可在体外抑制因H2O2引发的新西兰家兔红细胞溶血和由FeSO4和Vc诱导的肝线粒体肿胀,同时降低肝脑组织中MDA的产生。说明鳙鱼酶解物在一定浓度范围内具有抗氧化作用,比较三种酶解物的抗氧化特性可知酶解物C具有较强的综合抗氧化能力,可作为后续研究的材料。     

贻贝蛋白的酶解及其酶解物的抗氧化活性研究

比较了6种不同的蛋白酶(胰蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶)对贻贝粗蛋白的酶解效果,确定碱性蛋白酶为最适用酶。用此酶制备不同水解度(DH 6%、DH 11.5%、DH16%、DH 20%、DH 25%)的贻贝蛋白酶解物,考察不同DH酶解产物的抗氧化活性。试验结果表明:贻贝酶解产物具有较强的抗氧化活性,并呈一定的量效关系;当DH为25%时,贻贝酶解物对DPPH自由基、超氧自由基、羟基自由基的清除率最高,分别为77.4%、75.2%、43.4%,同时具有最强的金属螯合率(64.7%);而DH为16%时,酶解物对亚油酸的过氧化抑制作用较还原型谷胱甘肽强,达65.6%。DH对酶解产物的抗氧化活性有一定的影响,但在不同的抗氧化体系中,影响趋势不一致。     

贻贝酶解物对羟自由基清除作用的试验研究

通过测定贻贝酶解物对离体实验系统（Fenton体系）产生的羟自由基的清除效果，从胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶3种酶中筛选出木瓜蛋白酶和胰蛋白酶作为酶解贻贝制备具有较高清除羟自由基活性酶解物的理想水解酶；并通过正交实验L9（3^4）对2种酶的水解条件进行优化。结果表明木瓜蛋白酶在温度60℃、酶解时间15min、DH7．5、酶质量分数1．00％的水解条件下，酶解物对羟自由基的清除效果最佳；胰蛋白酶在温度45℃、酶解时间35min,pH8，5、酶质量分数0．75％的水解条件下，酶解物对羟自由基清除效果最佳。木瓜蛋白酶酶解物在最大洗脱峰时有最大羟基自由基清除率峰，清除率为76．15％，在最大峰处酶解物中活性肽的分子量为1．4kDa；胰蛋白酶酶解物在最大洗脱峰时也有最大羟基自由基清除率峰，其清除率为69．13％，该峰处活性肽的分子量也为1．4kDa。     

贻贝的可控酶解及其酶解液的抗氧化活性

用Alcalase对贻贝进行酶解能够得到具有抗氧化活性的酶解物。通过控制酶解时间分别得到水解度(hydrolysis degree,DH)为12%、18%、24%和30%的4种酶解物,研究其抗氧化活性。结果表明,酶解物的还原力和羟基自由基清除率均随DH升高而升高,但在DH 24%~30%范围升高极缓;其DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除率和脂质过氧化抑制率均随DH升高而呈现先增后降的趋势,最高清除率均出现在DH 24%处。DH为24%的贻贝Alcalase酶解物具有最佳的抗氧化活性。     

黄粉虫酶解物体内外抗氧化及免疫活性研究

目的:研究黄粉虫酶解物(TMH)体内外抗氧化活性和免疫活性。方法:研究TMH的还原能力及其对DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除能力;通过动物试验研究TMH的体内抗氧化能力和免疫能力。结果表明:TMH具有较强的抗氧化能力,对DPPH自由基、O_2~-·自由基的清除能力分别达到88.4%(10 mg/mL),61.0%(200 mg/L),还原能力为0.653(6 mg/L);动物试验表明,TMH可以显著提高小鼠血浆、肝脏中CAT、GSHPx、T-SOD(P0.05)活力,降低MDA(P0.05)含量并抑制羟自由基能力;显著增加血清中IgG、IgM、IL-4、IFN-γ(P0.05)的含量,提高小鼠脾脏和肝脏指数,表现出较强的抗氧化能力以及改善机体免疫功能的作用。     

银鲳酶解物抗氧化活性研究

选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶对银鲳蛋白进行酶解以制备蛋白酶解物,以羟基自由基清除活性为指标确定银鲳最佳水解酶。结果显示,碱性蛋白酶的水解物抗氧化活性最强。实验对碱性蛋白酶水解银鲳的酶解条件(时间、温度、pH、酶添加量和固液比)进行正交实验设计,并对最佳水解条件下所获得的酶解物进行抗氧化活性测试。结果表明,银鲳蛋白碱性蛋白酶水解物对DPPH自由基和羟基自由基具有清除作用,其自由基清除效果呈现剂量依赖性,而且银鲳蛋白水解物还具有明显还原能力。所有这些体外抗氧化数据说明,银鲳蛋白水解物有明显的抗氧化效力。      

银鲳酶解物抗氧化活性研究

选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶对银鲳蛋白进行酶解以制备蛋白酶解物,以羟基自由基清除活性为指标确定银鲳最佳水解酶。结果显示,碱性蛋白酶的水解物抗氧化活性最强。实验对碱性蛋白酶水解银鲳的酶解条件(时间、温度、pH、酶添加量和固液比)进行正交实验设计,并对最佳水解条件下所获得的酶解物进行抗氧化活性测试。结果表明,银鲳蛋白碱性蛋白酶水解物对DPPH自由基和羟基自由基具有清除作用,其自由基清除效果呈现剂量依赖性,而且银鲳蛋白水解物还具有明显还原能力。所有这些体外抗氧化数据说明,银鲳蛋白水解物有明显的抗氧化效力。     

贻贝中ACE抑制活性肽的酶解制备及表征

以贻贝为原料,制备具有血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)抑制作用的活性肽.采用水解度DH、蛋白质回收率及ACE抑制活性为指标,筛选水解贻贝粗蛋白的最适酶种;通过响应面分析(RSM)对水解贻贝粗蛋白的工艺条件进行优化;探讨水解度(DH)与ACE抑制活性的关系;利用HPLC方法分析活性肤的相对分子质量分布.试验结果表明碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L是水解贻贝粗蛋白的最适酶种;碱性蛋白酶在[E]/[S]1.64、pH 9.12、温度57 ℃水解条件下,酶解物的ACE抑制作用最强,其DH26.41%,IC50 34.64g/mL.就贻贝粗蛋白的水解而言,控制水解度为25%～30%为宜.碱性蛋白酶水解贻贝粗蛋白所得活性肤,主要是以相对分子质量较小的短肽组成,其中,相对分子质量在1 000 Da以内的占90.42%.本研究结果表明以贻贝为原料,可以开发具有显著ACE抑制活性的降血压肤.     

酶解制备贻贝抗氧化肽与功能性鱼糕的研制

开发具有抗氧化活性的功能性鱼糜制品。采用酶解法并筛选中性蛋白酶为最适蛋白酶制备贻贝抗氧化肽。利用正交设计优化酶解工艺条件,确定酶解温度45℃、酶解时间1 h、酶添加量1 500 U/g、料液比(g/mL)1∶5为较优酶解工艺条件,在此条件下酶解产物多肽得率达到(73.62±0.86)mg/g。添加质量分数大于2%的经冷冻干燥的贻贝酶解产物到鱼糕中,检测其在鱼糕中对猪油的抗氧化作用,经方差分析得知其有显著的抗氧化作用。以此说明鱼糕是具有抗氧化性的功能性食品。     

紫贻贝酶解产物抗菌活性及其工艺优化研究

以果蔬病原菌Botryiscinerea为供试菌,采用微孔板培养法,测定了胰蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶和菠萝蛋白酶酶解产物对Botryiscinerea的抗菌活性,并采用正交试验对胰蛋白酶的酶解条件进行了优化。结果表明,胰蛋白酶酶解产物抑菌活性最强,其抑菌率分别比胃蛋白酶、风味蛋白酶和菠萝蛋白酶酶解产物高38.4%、19.5%和18.2%(P<0.01);胰蛋白酶获取最佳抑菌酶解产物的条件为:55℃、pH8.5、加酶量300U/g、酶解时间2h、料水比1∶1。     

美拉德反应对泥鳅蛋白酶解产物抗氧化性能的强化研究

为提高泥鳅肉水解产物的抗氧化活性,本研究利用木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对泥鳅蛋白进行酶解,在此基础上,加入单种糖或者混合糖与酶解产物以质量比1:1进行美拉德反应,并以产物对羟基自由基、超氧阴离子、DPPH自由基的清除率为指标评价其抗氧化性能。结果表明,加入单种糖进行反应的产物抗氧化性能低于混合糖,其中又以木糖和乳糖质量比1:3混合效果最佳,对羟基自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基的清除率分别为47.13%±2.24%、58.27%±2.19%、68.09%±1.33%。再通过正交实验得到在pH7、80 ℃下反应45 min的产物对羟基自由基的清除率效果最佳,为58.86%;在pH6、100 ℃下反应45 min的产物对超氧阴离子自由基的清除率最佳,为70.63%;在pH8,温度90 ℃下反应60 min的产物对DPPH自由基的清除率最佳,为85.40%。研究表明,采用混合糖参与美拉德反应可显著提高泥鳅蛋白酶解产物的抗氧化活性,为泥鳅蛋白的工业化生产提供科学的理论依据。     

Valorisation of blood protein from livestock to produce haem iron-fortified hydrolysates with antioxidant activity

Blood is the main by-product from slaughterhouses bearing high levels of suspended solids (18% w/w) and BOD₅ (250 000–375 000 mg O₂/L), which makes difficult its handling and disposal. This study proposes the valorisation of blood protein to produce enzymatic hydrolysates rich in haemic iron and antioxidant peptides. Haemic iron presents higher bioavailability compared to its inorganic form, but its incorporation into foodstuffs is restrained by its high tendency to oxidation. Six commercial proteases of animal, plant and bacterial origin were employed to produce the enzymatic hydrolysates. Subtilisin and trypsin treatments were able to recover 70% of haem iron as soluble peptides, in contrast with plant enzymes where the proteolysis was reduced. Moreover, some enzymatic treatments led to hydrolysates with high levels of some in vitro antioxidant activities such as radical scavenging (Protamex, IC₅₀ 3.52 mg/mL) or metal chelating activity (trypsin, IC₅₀ 0.27 mg/mL). We conclude the enzymatic valorisation of blood protein increases haemic iron bioavailability and produces antioxidant peptides. Both properties are of interest for their use as iron fortification supplements.     

Nutritional composition and antioxidant properties of protein hydrolysates prepared from echinoderm byproducts

Protein hydrolysates were prepared from echinoderm byproducts, including viscera (SCV) of Atlantic sea cucumber ( Cucumaria frondosa ) and digestive tract (UDT) and non-commercial grade gonads (UGN) of green sea urchin ( Strongylocentrotus droebachiensis ). Enzymatic hydrolysis was performed on defatted materials using Alcalase^® 2.4L (0.75% w/w) and reaction was carried out overnight (∼16 h, 55 °C, pH 8.0). Freeze-dried hydrolysates were analysed for their nutritional composition, nitrogen solubility index and antioxidant activity. Degree of hydrolysis was low, with values of 5.6%, 4.6% and 7.0% for SCV, UDT and UGN, respectively. Hydrolysates showed high protein content (∼55%), high proportion of essential amino acids (∼35% of total amino acids) and good solubility (nitrogen solubility index ≈ 68%). They contained variable concentrations of major and trace elements with a predominance of Na and K. Hydrolysates showed apparent antioxidant activities in both ORAC assay (267–421 μmol TE g⁻¹) and inhibition of lipid oxidation test (54–57%). Antioxidant activities were thought to be associated with the presence of antioxidant peptides in hydrolysates. Our results showed that hydrolysates from Atlantic sea cucumber and green sea urchin byproducts might serve as alternative sources of dietary proteins, with good nutritional composition, high solubility and interesting protection against oxidative stress.     

双酶酶解葵花籽粕蛋白制备抗氧化多肽的研究

本文以葵花籽粕蛋白粉为原料,获取双酶酶解葵花籽粕蛋白制备抗氧化活性多肽的最优工艺。分别采用碱性蛋白酶等七种蛋白酶对葵花籽粕蛋白进行酶解,以抗氧化性及水解度为指标对酶制剂进行筛选。以抗氧化性为指标,通过单因素及响应面法对酶解条件进行优化,获取最佳酶解工艺。结果表明,碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶为最适酶制剂且最佳酶解工艺为:p H7.6、复合酶比例为2.5∶1、底物浓度2%、[E]/[S]为2%、酶解温度50℃、酶解时间200min,在此条件下,葵花籽粕多肽对O-2·和·OH清除能力分别为68.06%和50.12%。      

仔乌蛋白酶解物抗氧化性研究

通过测定仔乌酶解物对Fenton反应体系产生的羟基自由基的清除效果,筛选出胰蛋白酶和中性蛋白酶作为仔乌水解理想酶。两种酶水解仔乌所获得到酶解液对羟基自由基具有较好清除效果。采用正交试验对胰蛋白酶和中性蛋白酶的水解条件进行优化。其中,胰蛋白酶酶解工艺条件为温度45℃、时间3h、酶添加量900U／g、pH6．5;中性蛋白酶则为温度50℃、时间2h、pH6．5、加酶量为600U／g。二者料液质量比均为1：4。     

南瓜籽蛋白酶解液的超滤分离及其抗氧化活性研究

采用超滤技术分离南瓜籽蛋白酶解液,通过研究操作压力、料液浓度、pH和时间四个因素对膜通量和膜效能的影响,依次得到截留分子量分别为10、4ku两次超滤的最佳工艺条件,并比较超滤前后酶解液的抗氧化活性。结果表明,截留分子量为10ku的超滤膜的操作压力为0.25MPa、料液浓度为3.0%、料液pH为7,操作时间为60min;截留分子量为4ku的超滤膜的操作压力为0.20MPa、料液浓度为2.0%、料液pH为7,操作时间为60min。经过超滤以后分子量小于4ku的组分具有更强的清除自由基的能力,其中清除50%DPPH自由基所需的多肽浓度即半抑制浓度IC50值为2.76mg/mL、清除羟基自由基（·OH）的IC50值为2.91mg/mL、清除超氧阴离子自由基（O2-·）的IC50值为23.58mg/mL,同时对铁离子还具有显著的还原能力,吸光度为0.5时所需的多肽浓度为9.43mg/mL。      

蚌肉肽—锌螯合物制备工艺及其保肝作用研究

以蚌肉为原料,采用优化酶解工艺制备蚌肉肽。以螯合率为指标,对蚌肉肽的富锌工艺进行优化并评价其溶液保肝作用。结果显示,蚌肉肽—锌的最佳螯合工艺参数为螯合温度70℃,螯合pH 8.0,蚌肉肽与锌溶液质量浓度比21 (g/mL),螯合反应1.5h。该工艺条件下螯合率为58.55%;制备的富锌蚌肉肽保肝作用显著,当灌胃剂量为400mg/kg·BW时,SOD与GSH-Px的活性分别为(142.78±7.73),(258.16±8.52)IU/L。     

无花果蛋白酶酶解牡蛎肉的工艺优化及其抗氧化活性研究

研究无花果蛋白酶酶解牡蛎肉的工艺优化及其抗氧化活性,以氨基酸态氮含量和DPPH·清除率为指标进行单因素和正交实验,研究酶解时间、酶解温度、酶量、p H对氨基酸态氮含量和抗氧化活性的影响。正交实验确定牡蛎酶解的最佳工艺条件为:酶量5.5%,酶解温度50℃,p H6.0,酶解时间3.5 h。此工艺条件下,牡蛎酶解液氨基酸态氮的含量为0.181 g/100 m L,DPPH·清除率达71.80%,还原力为0.813,·OH清除率为16.19%,牡蛎酶解液具有较强的抗氧化活性。      

超声波、微波对鲑鱼肽结构及抗氧化性的影响

研究了微波、超声波及超声波—微波共同作用对鲑鱼肽超氧阴离子自由基清除能力的影响。通过紫外、红外光谱扫描及氨基酸组成分析对鲑鱼肽结构的变化进行了探讨。结果表明:在一定的条件下,蛋白酶解液经超声波、微波处理后其超氧阴离子自由基清除能力均有一定程度的提高。经微波、超声波—微波红外吸收光谱在1669cm-1处的C=O伸缩峰,及1544cm-1处的N-H弯曲峰均发生偏移,且峰形变得更为尖锐,可以推测鲑鱼肽的二级结构经过超声波、微波处理后均发生了变化。通过分析鲑鱼肽的氨基酸组成发现:经过微波、超声波及超声波—微波共同处理后,鲑鱼肽游离氨基酸中与抗氧化相关的氨基酸总量变化不显著,证实了其活性物质为小分子肽类物质。