人参皂甙—α—鼠李糖苷酶分离提纯及其酶性质

主要研究微生物sp．G9产皂甙鼠李糖苷酶的分离提纯及其酶性质。该酶能够水解人参皂甙Re的C-6位末端上的一个α-鼠李糖基，从而制备人参皂甙Rg1。该酶蛋白的分子量约为54kDa，且酶反应的最佳温度是40℃，最适pH值是5。     

酶法生产稀有人参皂甙及其产物成分的分析

通过实验研究从人参提取人参皂甙 ,用硅胶柱法分离人参二醇类皂甙。酶法改变人参二醇皂甙糖基 ,生产稀有人参皂甙 ,并分离提纯了其酶反应产物。结果表明 :酶反应产物中主要成分为人参皂甙Rh2 ,副产物为人参皂甙Rg3、Rg5、Rh1、Rh3、人参二醇类皂甙元 ;经硅胶柱分离酶解产物得到单体。也探讨了酶法产生各种稀有人参皂甙的机理 ,二醇类皂甙失去第 2 0碳上的糖基时 ,也会失去水分子 :Rh2生成的同时Rh2失去水分子变成Rh3皂甙 ;Rg3生成的同时 ,Rg3失去水分子变成Rg5皂甙     

酶法制备人参皂甙Rh2的研究

研究了酶法改变在人参中含量较高的皂甙、如Rb、Rc和Rd等原人参二醇类皂甙所生成的皂甙。经质谱和核磁共振测定分析研究,酶解得到的产物20（S）－人参皂甙Rh2[20（S）－原人参二醇3－O－β－D－葡萄吡喃糖甙],即其系统名称是3－O－（β－D葡萄吡喃糖基）－达玛－24－烯－3β,12β,20（S）－三醇[3－O－（β-D-glucopyranosl）-dammar-240-en-3β,20（S）－triol]。经酶处理和其他反应后Rh2人参皂甙的收率为人参的0．5％,其收率比红参中提取提高500倍。     

酶法生产稀有人参皂甙及其产物成分的分析

通过实验研究从人参提取人参皂甙，用硅胶柱法分离人参二醇类皂甙。酶法改变人参二醇皂甙糖基，生产稀有人参皂甙，并分离提纯了其酶反应产物。结果表明：酶反应产物中主要成分为人参皂甙Rh2，副产物为人参皂甙Rg3、Rg5、Rh1、Rh3、人参二醇类皂甙元；经硅胶柱分离酶解产物得到单体。也探讨了酶法产生各种稀有人参皂甙的机理，二醇类皂甙失去第20碳上的糖基时，也会失去水分子：Rh2生成的同时Rh2失去水分子变成Rh3皂甙；Rh3生成的同时，Rg3失去水分子变成Rg5皂甙。     

酶法制备人参皂甙Rh_2的研究(英文)

研究了酶法改变在人参中含量较高的皂甙、如Rb、Rc和Rd等原人参二醇类皂甙所生成的皂甙。经质谱和核磁共振测定分析研究 ,酶解得到的产物是 2 0 (S) 人参皂甙Rh2 [2 0 (S) 原人参二醇 3 O β D 葡萄吡喃糖甙 ],即其系统名称是 3 O (β D 葡萄吡喃糖基 ) 达玛 2 4 烯 3β ,12 β ,2 0 (S) 三醇 [3 O (β D glucopyranosyl) dammar 2 4 e     

人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的亚克隆及表达

将人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因亚克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K,再将构建后的表达载体电转化到毕赤酵母GS115中,并诱导表达该基因。结果显示,重组酵母菌在甲醇体积分数为0.5%,72 h培养后,所提取的酶蛋白经酶活性检测,发现具有人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的活性,经SDS-PAGE分析,确定其分子质量为52 ku,与理论值基本相符,表明该基因得到了表达。     

两种菌产两种不同天然苷类α-鼠李糖苷酶的研究

采用TLC法和分光光度计法研究了Absidia sp.G3g产人参皂苷-α-鼠李糖苷酶(RhaG)和Ab-sidia sp.R9g产芦丁-α-鼠李糖苷酶(RhaR)的酶反应特性。实验结果表明,RhaG只水解人参皂苷Re的C-6位末端上的一个α-鼠李糖基,而RhaR能水解芦丁、橙皮苷、柚皮苷的α-鼠李糖基。两种酶反应条件中相同之处是酶反应最适底物质量浓度为1.0 g/mL、最佳反应pH 5.0,不同之处是RhaG反应的最佳反应温度是50℃,而RhaR则为40℃。     

人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的亚克隆及表达

将人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因亚克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K,再将构建后的表达载体电转化到毕赤酵母GS115中,并诱导表达该基因。结果显示,重组酵母菌在甲醇体积分数为0.5%,72 h培养后,所提取的酶蛋白经酶活性检测,发现具有人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的活性,经SDS-PAGE分析,确定其分子质量为52 ku,与理论值基本相符,表明该基因得到了表达。     

两种菌产两种不同天然苷类α-鼠李糖苷酶的研究

采用TLC法和分光光度计法研究了Absidia sp．G3g产人参皂苷-α-鼠李糖苷酶（RhaG）和Absidia sp．R9g产芦丁-α-鼠李糖苷酶（RhaR）的酶反应特性。实验结果表明,RhaG只水解人参皂苷Re的C-6位末端上的一个α-鼠李糖基,而RhaR能水解芦丁、橙皮苷、柚皮苷的α-鼠李糖基。两种酶反应条件中相同之处是酶反应最适底物质量浓度为1.0g／mL、最佳反应pH5．0,不同之处是RhaG反应的最佳反应温度是50℃,而RhaR则为40℃。     

人参皂甙组分的分离方法

人参的主要活性成分人参皂甙有人参二醇类皂甙、人参三醇类皂甙和齐墩果酸皂甙３种，其中药物活性较高的微量皂甙Ｒｇ３可由人参二醇类皂甙转化而来。为得到人参二醇类皂甙，用硅胶柱法成功地从人参总皂甙中分离出三醇类皂甙、二醇类皂甙和齐墩果酸皂甙。３种洗脱剂对二醇类皂甙（含齐墩果酸）的收率为２３．５％、３５．３％和２５．６％。混合二醇类皂甙经水解再硅胶柱分离的方法可得到混合皂甙质量的３０％Ｒｇ３，使制取大量的Ｒ     

人参皂甙β-糖苷酶的基因结构

为了研究人参皂甙 β 糖苷酶的基因结构 ,根据人参皂甙 β 糖苷酶的氨基酸N 末端序列设计了RT PCR引物 ,应用氯化铯密度梯度离心法提取了菌体总RNA ,以JFX0 1为模板进行RT PCR反应得到一条 1.0kb的基因 ,并对该基因进行了克隆测序。该测序结果与已知蛋白的基因无同源性 ,说明所得到的人参皂甙 β 糖苷酶的基因很有可能是新的基因     

柱层析法在人参皂甙组分分离中的应用

人参中所含的主要药理成分为人参二醇类皂甙、人参三醇类皂甙和齐墩果酸三种,其中的二醇类皂甙是制备人参皂甙Pg3的主要原料,这种药物活性较高的微量皂甙可以由人参二醇皂甙通过化学法而来。本论文为得到大量的人参二醇,采用柱层析法对人参总皂甙进行分离。在对98.1g西洋参入参总皂甙进行分离后,得到二醇类皂甙36.6g,其分离率是37.3%。这样,就为大批量的从人参皂甙Pg3制备Rh2提供了可能。     

人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的cDNA5’末端的快速扩增

根据人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的CDS区已知序列设计引物，应用“去帽法”原理快速扩增出了人参皂苷-α-鼠李糖苷酶cDNA5’端未知序列．测序结果表明，扩增出的5’端未知序列长度为421bp．通过与已知的CDS区序列比对，确定扩增出的5＇端未知序列就是目的序列，其5’端非编码区长度为61bp．     

人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的cDNA 5′末端的快速扩增

根据人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的CDS区已知序列设计引物,应用"去帽法"原理快速扩增出了人参皂苷-α-鼠李糖苷酶cDNA 5′端未知序列.测序结果表明,扩增出的5′端未知序列长度为421 bp.通过与已知的CDS区序列比对,确定扩增出的5′端未知序列就是目的序列,其5′端非编码区长度为61 bp.     

人参皂甙Rh2产品质量检验及含量测定方法

研究了酶转化法生产人参皂甙Rh2产品一般质量检验 ,确定了符合药典规定的产品质量标准。建立了高效液相色谱法测定人参皂甙Rh2含量的方法。通过对高效液相色谱系统适用性实验、稳定性实验、精密度实验、重现性实验、回收率实验的讨论 ,可以确定一个准确的色谱条件用来测定人参皂甙Rh2的含量。其测定条件为流动相甲醇∶乙腈∶水为 8∶8∶1,流速 1mL/min ,紫外检测波长2 0 3nm ,色谱柱ThemoHypersilODS2 (2 5 0mm× 4 .5mm ,5 μm) ,回收率≥ 99.74 % ,平均标准偏差(RSD) <1.83% ,达到了药典规定。在该色谱条件下 ,人参皂甙Rh2的保留时间 8～ 10min。在流动相比例 (甲醇∶乙腈∶水 )改变 ,其他条件不变的情况下测定了人参皂甙Rh2的R型和S型的含量比例为 6∶4 ,R型保留时间为 17min左右 ,S型保留时间为 16min左右 ,R型在S型后面出峰。     

人参皂甙的高效液相色谱分析

用高效液上色谱法对吉林省抚松县产人参茎叶粉和人参浸膏中单体皂甙Ｒｂ，Ｒｃ分别进行了定量测定，采用ｓｈｉｍ ｐａｃｋ ＣＬＣ－Ｃ８柱，以乙腈－水为流动相，在紫外检测器２０５ｎｍ下进行检测。本法具体简便，快速，灵敏，准确等特点，特别适合于人参单体皂甙的含量分析。     

人参皂甙Rh2产品质量检验及含量测定方法

研究了酶转化法生产人参皂甙Rh2产品一般质量检验 ,确定了符合药典规定的产品质量标准。建立了高效液相色谱法测定人参皂甙Rh2含量的方法。通过对高效液相色谱系统适用性实验、稳定性实验、精密度实验、重现性实验、回收率实验的讨论 ,可以确定一个准确的色谱条件用来测定人参皂甙Rh2的含量。其测定条件为流动相甲醇∶乙腈∶水为 8∶8∶1,流速 1mL/min ,紫外检测波长2 0 3nm ,色谱柱ThemoHypersilODS2 (2 5 0mm× 4 .5mm ,5 μm) ,回收率≥ 99.74 % ,平均标准偏差(RSD) <1.83% ,达到了药典规定。在该色谱条件下 ,人参皂甙Rh2的保留时间 8～ 10min。在流动相比例 (甲醇∶乙腈∶水 )改变 ,其他条件不变的情况下测定了人参皂甙Rh2的R型和S型的含量比例为 6∶4 ,R型保留时间为 17min左右 ,S型保留时间为 16min左右 ,R型在S型后面出峰。     

高产人参皂甙β—葡萄糖苷酶菌种的筛选

选取８种菌,筛选了能水解人参皂甙β－葡萄糖苷键的β－葡萄糖苷酶的高产菌株,研究了酶法改变人参皂甙糖基、以去掉人参皂甙Ｒｇ３上的一个葡萄糖基变成高抗癌Ｒｈ２皂甙的可能性,结果,８种菌所产的酶,均有纤维素外切酶的对硝基七酚基－β－葡萄糖苷（ｐＮＰＧ）酶活力,但其中２种菌所产的酶不具有水解人参皂甙－β－葡萄糖键的酶活,只有３种菌所产的酶水解人参皂甙－β－葡萄糖键的酶活高,证明了纤维素外切酶和人参皂甙－β     

人参皂甙β—糖苷酶的基因结构

为了研究人参皂甙β-糖苷酶的基因结构,根据人参皂甙β-糖苷酶的氨基酸N-末端序列设计了RT-PCR引物,应用氯化铯密度梯度离心法提取了菌体总RNA,以JFA01为模板进行RT-PCR反应得到一条1.0kb的基因,并对该基因进行了克隆测序,该测序结果与已知蛋白的基因无同源性,说明所得到的人参皂甙β-糖苷酶的基因很有可能是新的基因。     

芦丁-α-鼠李糖苷酶分离提纯及其酶性质

报道了微生物sp.R9g产芦丁 α 鼠李糖苷酶的分离提纯及其酶性质鉴定。该酶能水解芦丁的一个 α 鼠李糖基,从而制备异槲皮甙。该酶蛋白的分子量约为72kDa,且酶反应的最佳温度是40℃,最适pH值是5。