地塞米松抑制哮喘大鼠肺组织 p38 蛋白激酶的表达

目的: 探讨支气管哮喘大鼠肺组织 p38 蛋白激酶(p38 MAPK) 表达的变化以及地塞米松对其影响。方法: 复制大鼠哮喘模型, 随机分成 3 组 :正常对照组、哮喘对照组和地塞米松(DEX) 干预组。分别采用酶联免疫吸附法(ELISA) 和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF) IL-5 含量和肺组织磷酸化p38 MAPK 表达的变化, 并观察气道阻力、BALF中 EOS 计数以及肺组织病理学变化。结果: 哮喘对照组大鼠肺组织磷酸化 p38 MAPK 表达水平及气道阻力、BALF 中 IL-5 含量和 EOS 计数均较正常对照组显著增加(P<0.01);DEX 干预组上述指标较哮喘对照组显著降低(P<0.01), 肺组织病理学损伤程度明显减轻。肺组织磷酸化 p38 MAPK 表达水平与气道阻力、BALF 中 IL-5 含量和 EOS 计数之间分别呈显著正相关(r =0.77、0.63、0.65, P<0.01)。结论: p38 MAPK 可能参与了支气管哮喘的发病过程。DEX 对哮喘的治疗作用至少部分与抑制磷酸化 p38 MAPK 的表达有关。     

黄芪注射液对哮喘大鼠p38蛋白激酶和白细胞介素-5表达的影响

目的:探讨黄芪注射液对哮喘大鼠p38蛋白激酶(p38 MAPK)和白细胞介素-5(IL-5)表达的影响。方法:应用鸡卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏和反复超声雾化吸入复制大鼠哮喘模型。40只大鼠随机分成5组:正常对照组, 哮喘模型组和黄芪注射液低、中、高剂量组(2.5、5.0、10.0 mL/kg)。分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)、原位分子杂交方法和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)IL-5含量、肺组织IL-5 mRNA和磷酸化p38 MAPK 表达的变化, 并观察BALF 中炎症细胞计数、分类以及肺组织病理学变化。结果:哮喘模型组大鼠BALF 中炎症细胞计数、IL-5含量和肺组织中IL-5 mRNA及磷酸化p38 MAPK 表达均较正常对照组显著增加(P<0.01);黄芪干预组的上述改变较哮喘模型组显著降低(P<0.01), 肺组织病理学损伤程度明显减轻, 黄芪注射液低、中、高剂量组之间差异无统计学意义。肺组织磷酸化p38 MAPK 表达水平与BALF中嗜酸性粒细胞(EOS)计数和IL-5、IL-5 mRNA含量之间分别呈显著正相关(r=0.62、0.69、0.74, P<0.01)。结论:p38 MAPK 可能参与了支气管哮喘的发病过程。黄芪对哮喘的治疗作用可能部分与抑制p38 MAPK 的磷酸化活化、降低炎症介质释放、减轻炎症细胞浸润有关。     

血管内皮生长因子受体抑制剂SU5614对甲苯二异氰酸酯诱导哮喘模型小鼠治疗作用的研究

目的: 探讨血管内皮生长因子(VEGF)受体抑制剂SU5614对甲苯二异氰酸酯(TDI)诱导哮喘模型小鼠的治疗作用。方法: BALB/C小鼠随机分为3组:对照组,模型组和SU5614组。采用TDI制备哮喘小鼠模型,观察SU5614对模型小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)VEGF的表达情况、肺组织病理学变化,气道反应性和气道血浆渗出的变化。结果: 免疫细胞学分析结果表明,模型组小鼠BALF中VEGF表达明显增加,而SU5614组VEGF表达则明显降低;病理组织学发现模型组肺组织病理学炎症反应明显,而SU5614组炎症反应则明显减轻;模型组气道反应性明显增高,而SU5614组则明显降低(P<0.05);模型组气道血浆渗出明显增加,而SU5614组则明显减少(P<0.05)。结论: SU5614不仅抑制BALF中VEGF活性,也能抑制炎性细胞的迁移,降低气道高反应性和减少气道血浆渗出。     

microRNA let-7a在刀豆蛋白A诱导的小鼠肝损伤中的作用

目的: 探讨microRNA let-7a对刀豆蛋白A(Concanavalin A, ConA)小鼠肝损伤的保护作用。方法: 建立ConA诱导的小鼠肝损伤模型,采用尾静脉注射let-7a慢病毒表达质粒的方法,并在造模前 7 d 给予let-7a进行治疗干预。采用自动生化仪分析检测血清ALT变化;ELISA检测血清TNF-α、IL-6和干扰素-γ(IFN-γ)表达水平;HE染色肝脏组织病理学观察,评价let-7a治疗效果。结果: 治疗组血清ALT水平较模型组明显降低(P<0.01);与模型组相比,治疗组IL-6水平明显降低(P<0.01),治疗组血清炎症细胞因子TNF-α、IFN-γ水平也显著下降(P<0.05)。肝脏组织病理学检查显示,治疗组较模型组肝组织损伤程度明显减轻,炎症细胞明显减少(P<0.01, P<0.05)。治疗组小鼠生存率明显高于模型组(P<0.01)。结论: let-7a对ConA诱导的小鼠肝损伤有保护作用,该作用可能通过抑制相关炎症细胞因子TNF-α、IL-6和IFN-γ表达来实现。     

砒石对哮喘小鼠白三烯B4 及5-脂氧合酶基因表达的影响

目的: 探讨白三烯B4 (LTB4) 水平、5-脂氧合酶(5-LO) 基因表达在小鼠哮喘发病中的作用以及砒石(arsenolite, As) 对哮喘的治疗作用与LTB4 水平及5-LO 基因表达的关系。方法: 建立小鼠卵蛋白哮喘模型, 灌胃给予砒石等药, 用ELISA 的方法检测支气管肺泡灌洗液(BALF) LTB4 含量;用RT-PCR 的方法检测肺组织中5-LO mRNA 表达的变化。结果: 哮喘小鼠BALF 中LTB4 水平、肺组织5-LO 基因表达水平较正常对照组显著升高。4 种剂量的砒石均可抑制哮喘小鼠BALF 中LTB4 的水平, 均能降低哮喘小鼠5-LO mRNA 表达的量。其中砒石5.00 mg·kg^-1 剂量的效果优于砒石0.625 mg·kg^-1剂量的效果。结论: LTB4 在气道中的高水平, 5-LO 基因表达的上调在OVA 致敏小鼠的哮喘发病中起重要作用。砒石可显著降低哮喘小鼠BALF 中LTB4 水平, 抑制哮喘小鼠肺组织中5-LO 基因的表达, 从而表现出抗哮喘的活性。     

砒石对哮喘小鼠胞质型磷脂酶A2基因表达及白三烯C4的影响

目的: 探讨胞质型磷脂酶A₂ (cPLA₂) mRNA 表达、白三烯C4 (TLC₄) 在哮喘发病中的作用及其相互关系, 以及砒石对哮喘的治疗作用。方法: 建立小鼠卵蛋白哮喘模型, 砒石灌胃给药, 用逆转录聚合酶链反应方法检测肺组织中cPLA₂ mRNA 表达;ELISA 方法检测支气管肺泡灌洗液(BALF) 中LTC₄ 含量;微量滴定法测定BALF 中PLA₂ 活性。应用新航YP200型压力换能器及Medlab 生物信号采集系统检测小鼠肺功能P_max 和T_呼 /T_总。结果: 哮喘小鼠肺组织cPLA₂ 基因表达水平、BALF 中PLA₂ 活性、LTC₄ 水平均较对照组显著升高。0.625 、1.25 、2.50 及5.00mg·kg^-1剂量的砒石可下调哮喘小鼠cPLA₂mRNA 表达, 抑制哮喘小鼠BALF 中PLA₂ 活性和降低LTC₄水平, 改善哮喘小鼠肺功能。结论: 支气管肺组织中cPLA₂ 基因表达上调、PLA₂ 活性和LTC₄ 水平增高在卵蛋白(OVA) 致敏小鼠哮喘发病中起着重要作用。砒石可显著抑制哮喘小鼠肺组织中cPLA₂ 基因的表达, 降低哮喘小鼠PLA₂ 活性和降低LTC₄ 水平,改善哮喘小鼠肺功能, 具有抗哮喘活性。     

班布特罗对哮喘豚鼠淋巴细胞核因子-κB 表达的影响

目的:探讨β2-受体激动剂班布特罗(bambuterol)对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF) 淋巴细胞核因子-κB (NF-κB) 表达的影响。方法:用卵白蛋白(ovalbumin, OA) 建立豚鼠哮喘模型, BALF 分离淋巴细胞, 采用免疫组化染色方法观察淋巴细胞NF-κB 表达, 酶联免疫吸附(ELISA) 法测定淋巴细胞胞浆IκB 含量及BALF 中白细胞介素-10(IL-10) 水平。结果:与模型组相比, 班布特罗可显著增加BALF 中IL-10 水平及淋巴细胞胞浆IκB 含量(P <0.05), 降低NF-κB 胞核阳性细胞百分比(P <0.05), 而且这一作用可被β2-受体阻断剂普奈洛尔拮抗;但IκB 含量及IL-10 水平仍低于正常对照组(P <0.05), NF-κB 胞核阳性细胞百分比仍高于正常对照组(P <0.05) 。Pearson 相关分析显示NF-κB 与IL-10 之间呈明显负相关关系(r =-0.570, P <0.01) 。结论:班布特罗通过抑制IκB 降解和增加IL-10 水平, 从而抑制淋巴细胞NF-κB 表达, 这可能是其抑制哮喘气道慢性炎症的机制之一。     

三氧化二砷对小鼠过敏性哮喘的治疗作用及机制

目的:研究三氧化二砷对小鼠过敏性哮喘的治疗作用及对脾T 细胞周期和Bcl-2 基因表达的影响。方法:用卵蛋白建立小鼠过敏性哮喘模型, 收集肺泡灌洗液(BALF), 直接计算白细胞总数和分类,双缩脲法检测总蛋白含量, 应用Medlab 生物信号采集系统软件检测小鼠肺功能, 流式细胞术和免疫荧光法检测脾及BALF 中T 细胞数、T 细胞周期和Bcl-2 基因表达的变化。结果:三氧化二砷可使BALF 中总蛋白含量下降, 白细胞总数减少, 嗜酸细胞和淋巴细胞减少, 改善哮喘小鼠肺功能;使脾及BALF 中T细胞数降低;在1.15 mg·kg^-1 的剂量时可诱导脾T细胞凋亡, 在4.60 mg·kg^-1 的剂量时抑制其活化增殖;可下调脾T 细胞Bcl-2 基因表达。结论:三氧化二砷有平喘作用, 其作用机制可能与其调节T 细胞的激活与凋亡, 下调Bcl-2 基因表达有关。     

MMP-9/TIMP-1 在哮喘气道重塑中的作用及抗-RANTES 抗体的干预作用

目的:通过抗-RANTES 抗体对细胞外基质(ECM) 代谢相关因子基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制剂-1 (TIMP-1) 表达的影响, 探讨抗-RANTES 抗体对哮喘气道重塑的干预机制。方法:雄性Wistar 大鼠36 只, 随机分为3组:生理盐水对照组(对照组)、卵蛋白致敏及激发的哮喘组(哮喘组)、抗-RANTES 抗体干预组(干预组) 。肺组织切片用免疫组化法标记MMP-9、TIMP-1, 并用图像分析MMP-9、TIMP-1 表达水平,用ELISA 方法测定RANTES 。结果:哮喘组肺组织中MMP-9、TIMP-1 表达水平明显高于对照组(P<0.05), MMP-9/TIMP-1 比值下降, RANTES 与MMP-9/TIMP-1 呈负相关;抗-RANTES 抗体干预后MMP-9、TIMP-1 明显下降(P<0.05), MMP-9/TIMP-1 逐渐恢复, 与对照组比较无统计学差异(P<0.05);干预组气道炎症等病理学变化较哮喘组明显减轻, 临床症状明显改善。结论:抗-RANTES抗体可调节哮喘大鼠肺组织MMP-9/TIMP-1 比例的平衡, 干预细胞外基质重塑, 延缓哮喘气道重塑的发生。     

鬼针草总黄酮对急性炎症的保护作用及可能机制研究

目的: 研究鬼针草总黄酮(TFB)对急性炎症的保护作用与可能机制。方法: 二甲苯诱导急性小鼠耳肿胀,检测耳肿胀度和血清TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8含量;氟氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎(AA)大鼠原发性炎症,检测足肿胀度和血清TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6、IL-8含量,HE染色观察炎症关节病理学变化,免疫组织化学法检测关节软骨组织ASIC1a蛋白。结果: 小鼠急性耳肿胀和AA大鼠原发性炎症中,模型组动物血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8含量均明显升高,TFB(100、200 mg/kg) 灌胃给药能降低小鼠耳肿胀度和血清TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8含量,TFB(67、133 mg/kg)可以升高AA大鼠血清IL-2的含量。TFB灌胃给药可以使AA大鼠关节炎性细胞减少,改善病理变化。在AA大鼠原发性炎症中模型组大鼠关节软骨组织ASIC1a表达明显升高,TFB(67、133 mg/kg)组ASIC1a的表达明显降低。相关性分析结果显示,AA大鼠原发性炎症中ASIC1a与血清TNF-α、IL-1、IL-8含量呈正相关。结论: TFB对急性炎症具有保护作用,其抗炎机制可能与调节炎症介质释放有关。     

阿司匹林抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞MMP-9表达及机制研究

目的: 探讨阿司匹林对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的表达及其机制研究。方法: MTT法检测LPS诱导RAW264.7细胞作用下,阿司匹林对细胞毒性的影响。Q-RT- PCR检测MMP-9 mRNA表达,免疫蛋白印迹法(western blot)检测MMP-9、p38MAPK及磷酸化p38(Phospho-p38,P-p38)蛋白表达。特异性抑制剂SB203580(SB)阻断p38MAPK通路后,分别应用Q-RT-PCR和Western blot检测MMP-9的基因和蛋白表达。结果: 阿司匹林呈剂量依赖性抑制MMP-9基因和蛋白表达。与LPS组相比,阿司匹林可明显抑制P-p38MAPK蛋白的表达,而p38MAPK总蛋白无明显变化。抑制p38MAPK通路后,MMP-9 mRNA和蛋白水平均明显下调。结论: 阿司匹林抑制LPS诱导RAW264.7细胞中MMP-9表达可能与抑制p38MAPK信号转导通路有关,进而发挥其抗AS药理作用。     

小剂量茶碱对原始T淋巴细胞分化的影响

目的: 研究小剂量茶碱对原始T淋巴细胞分化的影响。方法: 分离新生儿脐血原始T淋巴细胞和单核细跑,将茶碱（10 mg·L^-1)加入植物血凝素(PHA,200 mg·L^-1)刺激下的新生儿脐带血原始T淋巴细胞,与单核细胞共培养3 d,流式细胞仪检测原始T淋巴细胞分化为Thl和Th2的水平,酶联免疫吸附法（ELISA)检测培养上清液中白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)和干扰素-7(IFN-7)浓度。结果: 茶碱显著促进原始T淋巴细胞向Thl细胞分化（P<0.05),但对Th2细胞分化没有显著影响,Thl/Th2比例增加（P <0.05);茶碱可使IL-4和IL>5的生成量显著降低,1例-7的生成量显著增加(P<0.05)。结论: 茶碱可调节原始T淋巴细胞分化并可能由此而发挥其抗炎作用。     

酚红外排水平评价肺上皮细胞多药耐药相关蛋白1的功能

目的: 以酚红为多药耐药相关蛋白1(MRP1)的底物,丙磺舒为其抑制剂,通过酚红的外排水平建立评价肺上皮细胞MRP1的功能的方法。方法: 小鼠静脉注射酚红(250 mg/kg),30 min 后进行肺泡灌洗,测定灌洗液中酚红的浓度,并以雾化吸入MRP1特异性抑制剂丙磺舒(150 mg/kg)作为对照,观察给予抑制剂前后灌洗液中酚红浓度及灌洗液中酚红浓度/血浆中酚红浓度比值的变化,来评价小鼠肺上皮细胞MRP1功能的改变。结果: 与未给予抑制剂相比,给予MRP1抑制剂丙磺舒后,血浆中酚红浓度无显著性差异,但与未给予抑制剂相比,给予MRP1抑制剂丙磺舒 60 min 后,其肺泡灌洗液中酚红浓度、灌洗液中酚红浓度/血浆中酚红浓度比值显著性降低。结论: 肺泡灌洗液中酚红的外排水平反映小鼠肺上皮细胞MRP1功能的改变。     

环氧合酶-2抑制剂对大鼠机械通气所致肺损伤的影响

目的: 探讨环氧合酶-2抑制剂对大鼠机械通气所致肺损伤的影响。 方法: 健康成年雄性SD大鼠30只,随机分为3组(n =10):常规潮气量通气组(TV组,潮气量 8 mL/kg)、大潮气量通气组(HV组,潮气量 40 mL/kg)、大潮气量通气+环氧合酶-2选择性抑制剂组(HV+NS398组)。HV+NS398组于机械通气前 30 min 腹腔注射NS398 8 mg/kg。于机械通气 4 h 时处死大鼠,Western Blot法检测肺组织中水通道蛋白1(AQP1)表达;检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6)、血栓素B₂(TXB₂)含量及总蛋白浓度,计算肺组织湿/干重比(W/D)。 结果: 与TV组相比,HV组AQP1表达降低(P＜0.05),BALF中TNF-α、IL-6、TXB₂和总蛋白浓度增加,肺组织W/D升高(P＜0.05);与HV组相比,HV+NS398组AQP1表达升高,BALF中TNF-α、IL-6、TXB₂和总蛋白浓度降低(P＜0.05),肺组织W/D降低(P＜0.05)。 结论: 环氧合酶-2抑制剂可能通过上调AQP1的表达及减轻炎性反应程度,而缓解大鼠机械通气所致肺损伤。     

卡介苗素对支气管哮喘患者免疫调节作用

目的 探讨卡介苗素对哮喘患者免疫调节作用。方法 58 例发作期的哮喘病人,观察组34 例,对照组24 例,入组前行血浆IL-14 、IL-12 水平测定。观察组:吸入普米克气雾剂,其用量参照哮喘阶梯治疗方案,可加用解痉剂(不包括茶碱类),卡介苗素0.5 mg 肌注,每周2 次。对照组:除不用卡介苗素外余同观察组。3 mon 后所有病例复查血浆IL-4 、IL-12 水平。结果 治疗后观察组血浆IL-4 水平由治疗前(29.0±5.6)降至(22.6±6.5)ng·L^-1;IL-12 水平由治疗前(37.2±4.6)增至(51.7±10.7)ng·L^-1,均有显著性差异(P <0.05)。对照组血浆IL-4水平由治疗前(29.7±5.1)降至(26.4±4.9)ng·L^-1,有显著性差异(P <0.05);IL-12 水平由治疗前(38.1±6.7)升至(39.3±7.8)ng·L^-1,但差异无显著性意义(P >0.05)。治疗后复查IL-4 、IL-12 水平,两组间相比差异有显著性意义(P <0.05)。结论 卡介苗素可抑制Th2 型细胞因子IL-4 分泌,促进Th1型细胞因子IL-12 的分泌,从而调节Th1/Th2 平衡,对哮喘患者有明显的免疫调节作用。