过氧化氢对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的: 研究过氧化氢(H₂O₂)对单个大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流(Ica,L)的影响。方法: 用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞;用标准的全细胞膜片钳技术记录钙通道电流,观察5mmol·L^-1H₂O₂引起单个大鼠心室肌细胞Ica,L改变。结果: 在5mmol·L^-1H₂O₂作用下,大鼠心室肌细胞Ica,L峰值电流密度从4.89±0.52pApF增加至9.80±0.65pApF(P<0.05,n=10),电流-电压曲线下移,但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变;H₂O₂对Ica,L激活时间常数-电压曲线无明显影响,但可使其灭活时间常数-电压曲线明显向上移;H₂O₂对Ica,L稳态激活曲线无明显改变,但可使其稳态失活曲线明显左移,V0.5从(-26.85±5.3)mV左移至(-37.20±4.5)mV(P<0.05,n=5)。结论: H₂O₂可以增加大鼠心肌细胞Ica,L,且使其失活明显减慢。     

山莨菪碱抑制成年大鼠离体心室肌细胞钙瞬变和收缩及其机制

目的: 观察山莨菪碱对大鼠离体心室肌细胞钙瞬变和收缩功能的影响并探讨其机制。方法: 采用单细胞动缘探测系统和双激发荧光光电倍增系统观察山莨菪碱对大鼠离体心室肌细胞钙瞬变和收缩功能的影响, 应用信号转导通路中相关受体的激动剂或拮抗剂探讨其作用机制。结果: 山莨菪碱1 ×10^-9 、1 ×10^-7 、1 ×10^-5 mol·L^-1可直接抑制心室肌细胞钙瞬变和收缩功能;卡巴胆碱可以消除山莨菪碱的作用, 而IP₃ 受体阻断剂肝素(1 ×10^-6 mol·L^-1) 和细胞膜电压依赖型钙离子通道阻滞剂维拉帕米(1 ×10^-6 mol·L^-1) 可以减弱山莨菪碱的作用。结论: 山莨菪碱抑制心室肌细胞钙瞬变和收缩功能可能与其阻断M 受体、抑制细胞内钙库钙离子释放和经过电压依赖型钙离子通道的钙离子内流有关。     

银杏内酯B 及银杏内酯提取物大鼠体内药动学比较

目的 研究银杏内酯B 、银杏内酯提取物在大鼠体内的药动学。方法 LC-MS 测定血浆中银杏内酯B 的血药浓度, 采用3p87 药动学处理软件, 计算药动学参数, C_max 、t_max 采用实测值。结果 银杏内酯B 单体、银杏内酯提取物大鼠口服后的t_1/2α分别为(0.18 ±0.09) 、(0.17 ±0.07) h;t_1/2β;分别为(2.3 ±2.0) 、(2.3 ±1.5) h;AUC_0-12 h分别为(2701 ± 655) 、(2889 ± 836)μg°L^-1°h;AUC_0-∞ 分别为(2778 ± 680) 、(2966 ±854)μg°L^-1 °h, 银杏内酯提取物中银杏内酯B 的生物利用度是单体的1.07 倍。结论 银杏内酯B单体、银杏内酯提取物大鼠口服后的药动学参数差异均无统计学意义, 银杏内酯提取物中共存成分对银杏内酯B 的大鼠体内药动学行为影响无统计学意义。     

刺五加叶皂苷对心肌ATP 敏感性钾通道的作用

目的: 研究刺五加叶皂苷(ASS) 对心肌线粒体ATP 敏感性钾通道(mito K_ATP) 和细胞膜ATP 敏感性钾通道(sarcol K_ATP) 的作用, 探讨ASS 对缺血心肌保护作用的机制。方法: 用酶解法获取兔心室肌细胞, 激光扫描共聚焦显微镜观察ASS 对mito K_ATP 的作用, 全细胞膜片钳技术观察ASS 对sarcol K_ATP的作用。结果: 对照组观察10 min 线粒体荧光强度无明显变化。ASS 30、100 和300 mg·L^-1组均可见用药后线粒体荧光强度明显增加, 分别增加(14.8±3.6) %、(30.4±4.3) % 和(38.4±5.7) %。3 μmol·L^-1格列本脲不影响线粒体荧光强度, 但可以阻断ASS 对线粒体荧光强度的作用。而对照组、ASS 10、100 和300 μmol·L^-1组的I_K-ATP 峰值无明显差异。结论: ASS 对mito K_ATP 有开放作用, 而对sarcolK_ATP没有作用。ASS 通过开放mito K_ATP 产生心肌保护作用。     

地西泮抑制交感神经节细胞钠通道电流的机制

目的 研究地西泮对交感神经节细胞钠通道电流的抑制作用机制。方法 酶消化法急性分离SD 大鼠(7 ~ 10 d) 颈上交感神经节细胞, 全细胞膜片钳技术记录地西泮对钠通道电流的影响。结果 在钳制电压(V_h) -80 mV, 刺激电压(Vt) 0 mV 条件下,0.3 μmol·L^-1 地西泮使钠电流峰值降低14.76 %(P <0.01), 其抑制作用与浓度呈正相关(r =0.99,P <0.01), IC₅₀为6.06 μmol·L^-1;钳制电位不同, 抑制作用也不同(P <0.05), V_h -60 mV时的IC₅₀ 为4.60 μmol·L^-1。3.0 μmol·L^-1的地西泮使电流-电压曲线峰值平均降低48.94 %, 峰值向去极化方向移动约10 mV; 对激活曲线无明显的影响(P >0.05), 用药前、后50 %的通道激活时的去极化电压(V_1/2)分别为:-24.64 mV、-23.75 mV; 3.0 μmol·L^-1的地西泮使稳态失活曲线产生明显的超极化方向移动(20.12 mV, P <0.01), 用药前、后50 %的通道灭活时的条件脉冲电压(V_1/2) 分别为:-64.13 mV、-84.25 mV。结论 地西泮对交感神经节细胞钠通道电流有明显的抑制作用, 且呈浓度及电压依赖性;其抑制作用主要与优先结合钠通道的失活状态而影响钠通道的失活有关。提示交感神经节参与介导地西泮的循环抑制作用。     

丁咯地尔对豚鼠乳头肌快反应动作电位的影响

目的 研究丁咯地尔(BUF)对豚鼠乳头肌快反应动作电位(AP)的影响。方法 采用细胞内微电极技术, 观察不同浓度BUF 对AP 的影响。结果 各浓度BUF 使动作电位幅度(APA)明显降低, 使APD 30, APD 50 缩短;BUF10^-4M 和10^-3 使APD 90 也明显缩短。5×10^-3M 使AP 消失之后, 还使静息电位(RP)绝对值继续降低。结论 (1)BUF 对豚鼠乳头肌Ca²⁺、Na⁺通道有阻滞作用;对K⁺通道的影响较复杂。(2)BUF 使豚鼠乳头肌对电刺激的兴奋性降低。(3)BUF 对AP 的作用是可逆的。     

咪唑安定对交感神经元全细胞钠通道电流的抑制作用

目的 研究咪唑安定对交感神经元全细胞钠通道电流的影响,探讨其循环抑制机制。方法 酶消化法急性分离SD大鼠(8~12d)颈上交感神经节细胞,全细胞膜片钳技术记录咪唑安定对钠通道电流的影响。结果 在钳制电压-80mV,刺激电压0mV条件下,临床相关浓度的咪唑安定(0.3μmol·L^-1)使钠通道电流峰值降低19.98%(P<0.05),随浓度增加,抑制作用逐渐增强,50%的钠通道电流峰值受抑制时的咪唑安定浓度(IC₅₀)约为18.35μmol·L^-1;3μmol·L^-1的咪唑安定使钠电流稳态失活曲线产生明显的超极化方向移动(7.75mV,P<0.05),用药前、后50%的通道灭活时的条件脉冲电压(V1/2)分别为:-40.39mV、-48.14mV;3μmol·L^-1的咪唑安定对钠电流的激活曲线几乎无影响。结论 临床相关浓度的咪唑安定对交感神经节全细胞钠通道电流有明显的抑制作用,且主要与钠通道的失活有关。提示咪唑安定的循环抑制作用可能与其直接抑制交感神经有关。     

多非替利衍生物CPU228(V03) 对大鼠心室肌细胞钙瞬变的调节

目的:在β-受体激动情况下, 研究多非替利衍生物CPU 228 对电刺激触发心肌细胞的胞浆Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i) 变化及钙瞬变动力学参数的影响。方法:游离单个大鼠心室肌细胞, Fluo-3/AM 负载, 电刺激诱发心室肌细胞钙瞬变, 定量测定心室肌细胞内Ca²⁺浓度变化, 异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO) 100 nmol°L^-1激动β-受体, 观察CPU 228 1 μmol°L^-1对钙瞬变动力学参数、[Ca²⁺]_i 及钙负荷水平的影响。结果:CPU228 1 μmol°L^-1对大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 的影响不明显(P>0.05);ISO 100 nmol°L^-1显著升高大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 和细胞内钙负荷水平, 缩短钙瞬变时程, 并且增加钙瞬变的消除速率。CPU 2281 μmol°L^-1显著抑制ISO 的上述作用。结论:在β-受体激动情况下, CPU 228 可以降低心肌细胞[Ca²⁺]_i,使ISO 改变的钙瞬变动力学参数恢复到正常水平。     

ATP敏感性钾电流与蛋白激酶关系的研究1

目的 观察蛋白激酶A(PKA)及蛋白激酶C(PKC)抑制剂和蛋白脱磷酸化物质对大鼠心室肌细胞ATP敏感性钾电流($I_{KATP}$)的影响,探讨克罗卡林(cromakalim)开放ATP敏感性钾通道的作用机制。方法 采用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞$I_{KATP}$。结果 在37℃时克罗卡林(1μmol·L^-1)可阻断ATP的抑制作用,诱导出$I_{KATP}$。PKA抑制剂PKI(6~22)amide(1μmol·L^-1),可模拟克罗卡林的作用,激活$I_{KATP}$;而PKC抑制剂calphosticC无此作用。同时还观察到蛋白脱磷酸化物质butanedioemonoxime(BDM,5mmol·L^-1)也可诱发出$I_{KATP}$。结论 克罗卡林开放$I_{KATP}$机制与抑制PKA的活性有关,而与PKC无关。     

异丙酚、 咪达唑仑抑制交感神经节细胞钠通道电流的联合作用1

目的: 研究异丙酚、咪达唑仑对交感神经节细胞钠通道电流的联合作用, 探讨两者复合诱导时循环稳定的可能机制。 方法: 全细胞膜片钳技术记录急性分离 SD 大鼠(7~ 10 d)颈上交感神经节细胞钠通道电流;等辐射线图法分析异丙酚、 咪达唑仑复合对交感神经节细胞钠通道电流的影响。 结果: 在钳制电压(V_h ) 80 mV、 刺激电压(V_t )0 mV条件下, 临床相关浓度的异丙酚、咪达唑仑分别使钠通道电流峰值降低27.66%(P <0.01)和19.98%(P <0.05),随浓度增加,抑制作用逐渐增强,50%的钠通道电流受抑制时的浓度(IC₅₀)分别为 33.12 μmol·L^-1 和18.35 μmol·L^-1。 1/4、3/4 IC₅₀ 的异丙酚与咪达唑仑合用时的 IC₅₀ 数值点落在理论上的相加等效线的95%可信区间内; 1/2 IC₅₀ 的异丙酚与咪达唑仑合用时的 IC₅₀ 数值点落在理论上的相加等效线的 95%可信区间的左下方。结论: 临床相关浓度的异丙酚、 咪达唑仑对交感神经节细胞钠通道电流有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性; 除等效剂量合用呈协同抑制作用外, 两者复合主要呈相加抑制交感神经节细胞钠通道流; 复合诱导时循环稳定可能与两者催眠作用明显协同导致诱导剂量的降低, 从而减弱对交感神经的抑制有关。     

醋柳黄酮对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的:探讨醋柳总黄酮(TFH) 对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i) 的影响。方法:采用新一代钙荧光探针Fluo-3/AM 检测在高钾、去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素II(Ang Ⅱ) 刺激下单层兔主动脉平滑肌细胞内游离钙水平的改变, 并与传统的钙拮抗剂Verapamil (Ver) 进行对照研究。结果:TFH(100 mg·L^-1) 对静息状态的血管平滑肌细胞[Ca²⁺]_i 无明显影响;TFH(60 ～ 100 mg·L^-1) 呈剂量依赖性抑制高K⁺ 去极化引起的[Ca²⁺]_i 升高, 与Ver 作用相似, 但弱于Ver;TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE、Ang Ⅱ通过受体介导引起[Ca²⁺]_i 升高均具有明显的抑制作用;在无细胞外Ca²⁺存在下, TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE 引起的[Ca²⁺]_i 升高也具有一定程度的抑制效应。结论:醋柳总黄酮通过对电压依赖性钙通道和受体操纵型钙通道双重抑制降低血管平滑肌细胞内游离钙水平, 这可能是醋柳黄酮产生舒血管降压作用机制之一。     

新型磷酸二酯酶Ⅳ抑制剂Ariflo 对内皮素-1诱发离体人子宫平滑肌收缩的影响

目的:研究选择性磷酸二酯酶(phosphodiesterase, PDE) Ⅳ抑制剂Ariflo 对内皮素-1 (endothelin-1,ET-1)诱发的非妊娠人子宫平滑肌收缩的影响。方法:累积给药法观察药物对离体平滑肌收缩的作用。结果:Ariflo 可降低子宫平滑肌自主收缩的收缩频率及收缩幅度(pD₂ =7.90), 且对ET-1 (3 ×10^-8 mol·L^-1)诱发的子宫平滑肌收缩具有浓度依赖性抑制作用(pD₂ =7.40), 作用强度与Rolipram 相似。结论:Ariflo 对ET-1 诱发的离体人子宫平滑肌的收缩具有显著抑制作用, 提示在临床上有缓解痛经的作用。     

利奈唑胺、去甲万古霉素等抗菌药物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌活性

目的:研究北京市三家医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 耐药现状, 评价利奈唑胺、去甲万古霉素等药物的抗菌活性。方法:收集解放军总医院、北京医院、北京协和医院三家医院分离的非重复MRSA 111 株, 头孢西丁纸片法确认MRSA, 采用琼脂稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC) 。结果:111 株MRSA, 对β-内酰胺类的耐药率为100%, 对红霉素的耐药率为92.8%, 对氨基糖苷类(奈替米星、庆大霉素) 的耐药率为99.1%, 对氟喹酮类(加替沙星、莫西沙星、左氧氟沙星) 的耐药率为91.9% ～99.1%, 对氯霉素的耐药率为3.6%, 对去甲万古霉素、利奈唑胺全部敏感, 对去甲万古霉素MIC₅₀ 和MIC₉₀ 分别为0.5和1 μg/mL, 对利奈唑胺的MIC₅₀ 和MIC₉₀ 均为2 μg/mL 。结论:北京三家医院分离的MRSA 对本研究的大多数抗菌药物均耐药, 去甲万古霉素和利奈唑胺对于MRSA 有很高的抗菌活性。     

盐酸埃他卡林对血管内皮细胞分泌功能的影响

目的:研究新型抗高血压药物盐酸埃他卡林(I_pt) 对血管内皮细胞分泌功能的影响。方法:采用灌流消化法分离小牛主动脉内皮细胞(BAEC), 观察I_pt 对BAEC 分泌内皮素-1(ET-1)、前列环素(PGI₂)和一氧化氮(NO) 的影响, 同时观察I_pt 对培养的BAEC 胞浆游离Ca²⁺浓度的影响。结果:在I_pt 浓度为10^-6 mol·L^-1及以上时, 能够剂量依赖性地抑制培养的BAEC 合成分泌ET-1, 并在I_pt 10^-5 mol·L^-1及以上时促进NO 的合成分泌, 同时在I_pt 浓度为10^-4 mol·L^-1及以上时, 显著地增高BAEC 胞浆游离Ca²⁺浓度。结论:I_pt 通过抑制内皮细胞合成分泌ET-1 和促进NO 的合成分泌, 从而使ET 和NO 的平衡状态得到改善;尚能增加内皮细胞[ Ca²⁺] _i, 有利于内皮细胞合成NO 增加, 从而增强内皮介导的舒血管效应。     

HPLC-MS/MS法测定人体血浆中格列美脲及其活性代谢物

目的: 建立同时测定格列美脲(Glimepiride,G)及其活性代谢物羟基格列美脲(Hydroxyl-glimepiride,M₁)血浆浓度的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法。方法: 血浆样品酸化后,经乙酸乙酯萃取后浓集进样,色谱柱为Phenomenex Gemini C₁₈ (50 mm×3.0 mm,5 μm),甲醇∶水∶甲酸(80∶20∶0.1)为流动相,流速为 0.2 mL/min,柱温为室温,采用电喷雾(ESI) 离子源,多反应离子检测模式, 以格列齐特(Gliclazide,IS)为内标。G、M₁和IS的检测离子对分别为质荷比(m/z) 491.4→352.4、507. 4→352.4、324.4→127.2。结果: G和M₁的线性范围分别为 1.25～400 ng/mL 和 0.313~100 ng/mL,最低定量限分别为 1.25 和 0.313 ng/mL;批内批间精密度均小于10%,方法回收率均在 96.4% ~102.5%之间。结论: 该方法简便快速、特异性高,可用于同时测定G和M₁血药浓度及其人体药代动力学的研究。     

刺五加对急性胰腺炎模型大鼠体内炎性介质的影响

目的:观察刺五加对急性胰腺炎模型大鼠体内炎性介质的影响。方法:经胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠制备急性胰腺炎模型,术后定时取血,测定血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)以及淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIP)、磷脂酶A₂(PLA₂)等的变化。结果:刺五加能降低血清中TNF-α、IL-1、IL-6的水平,降低血清中AMY、LIP、PLA₂的活性。结论:刺五加对血清中TNF-α等多种细胞因子和AMY、PLA₂的影响,可能是其治疗急性胰腺炎的作用基础。     

马齿苋总黄酮对血小板源性生长因子致家兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的: 研究马齿苋总黄酮(Portulaca total flavone,PTF)对血小板源性生长因子-BB型(PDGF-BB)致血管平滑肌细胞(Vascular smoothmuscle cell,VSMC)增殖的影响并探讨其机制。方法: 采用组织贴壁法培养家兔胸主动脉血管平滑肌细胞,细胞计数法观察PTF(8、24、72 mg/L)对PDGF-BB所致的VSMC增殖作用的影响;氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入方法测定VSMC DNA的合成;流式细胞仪分析增殖细胞周期,荧光分光光度计测定VSMC内 [Ca²⁺]_i。结果: PTF以浓度依赖方式抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖、DNA合成,血管平滑肌细胞处于G₁/G₀ 期的细胞数增多,而G₂/S期的细胞数显著减少(P<0.01);能抑制高K⁺诱导的VSMC内[Ca²⁺]_i升高(P<0.01)。结论: PTF可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖,其作用机制可能与其降低VSMC内高钙浓度[Ca²⁺]_i有关。     

C2-神经酰胺诱导大鼠脑胶质瘤细胞C6 的早期凋亡作用

目的: 研究外源性C2-神经酰胺对大鼠脑胶质瘤细胞C6活力的抑制作用以及早期凋亡诱导作用。方法: 采用MTT 法测定C2-神经酰胺对C6 细胞活力的影响;倒置荧光显微系统观察细胞形态变化;AnnexinⅤ PI 双染色流式细胞术对细胞早期凋亡进行定量分析。结果: C2-神经酰胺可显著抑制C6 细胞的活力, IC₅₀为2.2×10^-5 mol·L^-1;荧光染色可见核浓染等细胞凋亡特征形态改变;流式细胞术分析表明C2-神经酰胺可诱导C6 细胞发生早期凋亡作用,且凋亡百分率呈时间及浓度依赖性, C2-神经酰胺2×10^-5 mol·L^-1处理24 h 后平均早期凋亡率高达49.3 %。结论: C2-神经酰胺主要通过诱导早期细胞凋亡对大鼠脑胶质瘤C6 细胞发挥细胞毒作用, 提高神经酰胺水平有望成为肿瘤化疗的新途径。