盐酸埃他卡林对自发性高血压大鼠肾组织KATP通道基因表达的影响

目的: 从分子生物学水平探讨盐酸埃他卡林(iptakalim hydrohloride, Ipt) 对自发 性高血压大 鼠(spontaneously hypertensive rats, SHR) 肾组织 K_ATP 亚型表达的影响。方法: SHR 于第 12 周龄进入实验, 实验设 Ipt 1、3 和 9 mg°kg^-1°d^-13 个剂量组, 盐酸苯那普利(benazepril) 3 mg°kg^-1°d^-1治疗组及 SHR 空白对照组, 另设同周龄同种属正常血压大鼠(wistarKyoto rat,WKY) 为正常对照组, 灌胃给药每天 1 次,连续 12周, 观察盐酸埃他卡林对血压和肾组织 K ATP亚型表达的影响。结果: SHR肾组织SUR2、Kir6.1、Kir1.1 mRNA 表达较WKY 大鼠明显升高, 盐酸埃他卡林 1、3、9 mg°kg^-1°d^-13 个剂量组治疗后均可明显降低血压同时下调肾脏高表达的 Kir6.1、Kir1.1mRNA 水平, 而对 SUR2 表达无明显影响。结论: 盐酸埃他卡林对 SHR 降压治疗对肾脏的保护作用可能与其影响Kir6.1、Kir1.1 基因表达有关。     

新型抗高血压药物盐酸埃他卡林对小动脉的选择性扩张作用及其药理学机制

目的: 研究新型抗高血压药物盐酸埃他卡林(Ipt) 对小动脉的作用特性及其药理学机制。方法: 采用大鼠尾动脉螺旋状血管条和主动脉离体血管环两种组织, 对比观察盐酸埃他卡林对大、小动脉扩张作用的药理学特性, 并且利用膜片钳技术观察盐酸埃他卡林对大鼠尾动脉平滑肌细胞钾电流的影响。结果: Ipt 在10^-7 ~ 10^-3 mol·L^-1 范围内对KCl 预致收缩的大鼠尾动脉血管条产生剂量依赖性舒张反应, 且具有部分内皮依赖性, 但对主动脉离体血管环无明显的舒张反应, 该作用在高血压状态时显著增强, 能被ATP 敏感性钾通道特异性阻断剂格列苯脲阻断, 并且对大鼠尾动脉平滑肌细胞的钾电流具有显著增强作用。结论: 盐酸埃他卡林具有选择性舒张小动脉作用, 具有ATP 敏感性钾通道开放剂的主要药理学特征。     

盐酸埃他卡林对H2O2所致PC12细胞损伤的保护

目的: 研究 K_ATP 通道开放剂盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride, Ipt) 对 H₂O₂ 所致 PC12 细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法: 采用培养的PC12细胞, MTT 法测定细胞存活率, HPLC 法测定细胞培养液中谷氨酸(Glu) 的含量, 荧光法测定胞内钙离子([Ca²⁺]_i) 浓度。结果: Ipt 可浓度依赖性的拮抗H₂O₂ 介导的细胞毒性, 提高细胞生存率, 降低胞外Glu的释放以及胞内 Ca²⁺ 浓度。该保护作用可被200 μmol°L^-1 5-HD(线粒体K ATP 通道阻断剂) 部分拮抗。结论: Ipt 可拮抗 H₂O₂ 介导的细胞损伤作用, 该保护作用可能与线粒体ATP 敏感性钾通道相关。     

新型KATP开放剂埃他卡林对氟哌啶醇诱导的大鼠帕金森样症状的影响

目的:研究ATP 敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channels, K_ATP) 开放剂埃他卡林(I_ptakalim, I_pt) 对由氟哌啶醇(haloperidol) 诱导产生的大鼠帕金森样症状的影响。方法:应用氟哌啶醇诱导大鼠帕金森样症状, 以左旋多巴(levodopa, L-DOPA) 为阳性对照, 观察不同剂量I_pt 对大鼠运动潜伏时间、行走时间以及直立和梳洗次数的影响。结果:I_pt 能显著改善氟哌啶醇引起的大鼠自发性活动减少;能缓解氟哌啶醇引起的大鼠全身僵硬, 并且随剂量的增加,I_pt 的作用逐渐增强。结论:K_ATP 通道开放剂I_pt 能够改善氟哌啶醇引起的大鼠帕金森样症状, 是一个极富治疗潜力的先导化合物。     

埃他卡林对长期低氧大鼠肺动脉平滑肌KATP mRNA 的影响

目的:研究慢性低氧对大鼠肺动脉平滑肌ATP 敏感钾通道(K_ATP) mRNA 表达的影响及新型K_ATP开放剂盐酸埃他卡林的作用。方法:SD 雄性大鼠16 只随机分成对照组、低氧组、低剂量治疗组(盐酸埃他卡林0.75 mg·kg^-1 ·d^-1, ig)、高剂量治疗组(盐酸埃他卡林1.5 mg·kg^-1·d^-1, ig) 。将低氧组和治疗组大鼠放入常压低氧舱制备动物模型;采用RT-PCR 技术, 分析各组肺动脉主干平滑肌K_ATP mRNA表达。结果:低氧组SUR2 mRNA 水平显著低于正常组, 高剂量治疗组SUR2 显著高于低氧组, 各组Kir 6.1 没有显著差异。结论:慢性低氧抑制K_ATP 通道表达, 而盐酸埃他卡林能提高表达, 可从肺动脉高压发病机制上理解该药物治疗价值。     

盐酸埃他卡林对动脉平滑肌ATP 敏感性钾通道与其开放剂[3H] P1075 特异性结合与解离动力学过程的影响

目的: 研究盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride, Ipt) 对[³H] P1075 与血管平滑肌ATP 敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channel, KATP) 结合和解离动力学过程的影响。方法: KATP 开放剂[³H] P1075与大鼠去内皮主动脉平滑肌特异性结合与解离的动力学试验。结果: Ipt 预先与主动脉平滑肌孵育后,[³H] 1075 的结合速率减慢, 结合幅度降低, 平衡结合常数KA 降为对照组的28.3 %(P<0.01);结合[³H] P1075 的解离速率增快, 解离幅度增加, 平衡解离常数KD 则较对照组增加3.53 倍(P<0.01) 。在相同条件下, KATP开放剂吡那地尔(pinacidil, Pin) 的作用与之相似, KA值降为对照组的35 %(P<0.01),KD 值较对照组增加2.88 倍(P<0.01) 。结论: Ipt与KATP开放剂Pin的作用相似, 两者均可变构调节KATP,抑制其与开放剂的结合过程, 促进其解离过程。     

盐酸埃他卡林对血管内皮细胞分泌功能的影响

目的:研究新型抗高血压药物盐酸埃他卡林(I_pt) 对血管内皮细胞分泌功能的影响。方法:采用灌流消化法分离小牛主动脉内皮细胞(BAEC), 观察I_pt 对BAEC 分泌内皮素-1(ET-1)、前列环素(PGI₂)和一氧化氮(NO) 的影响, 同时观察I_pt 对培养的BAEC 胞浆游离Ca²⁺浓度的影响。结果:在I_pt 浓度为10^-6 mol·L^-1及以上时, 能够剂量依赖性地抑制培养的BAEC 合成分泌ET-1, 并在I_pt 10^-5 mol·L^-1及以上时促进NO 的合成分泌, 同时在I_pt 浓度为10^-4 mol·L^-1及以上时, 显著地增高BAEC 胞浆游离Ca²⁺浓度。结论:I_pt 通过抑制内皮细胞合成分泌ET-1 和促进NO 的合成分泌, 从而使ET 和NO 的平衡状态得到改善;尚能增加内皮细胞[ Ca²⁺] _i, 有利于内皮细胞合成NO 增加, 从而增强内皮介导的舒血管效应。     

盐酸埃他卡林对小鼠脑组织缺氧的保护作用

目的: 研究盐酸埃他卡林(Ipt) 对脑组织缺氧的保护作用。方法: 小鼠给予Ipt 0.5, 2.0, 8.0 mg·kg^-1 3个剂量(n =12, ig), 连续给药3 wk, 并设生理盐水组和维生素E 组作为对照, 采用断头制备脑缺氧模型。活性采用化学比色法测定脑组织过氧化脂质(MDA) 含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX) 和超氧化物歧化酶(SOD) 活性。外周红细胞膜脂流动性以DPH 为荧光探针, 采用荧光偏振法测定。结果: Ipt0.5, 2.0, 8.0 mg·kg^-1 3 个剂量组延长小鼠断头后喘息持续时间, 增加外周红细胞膜脂流动性, 降低微粘度, 且呈现量效关系。相同条件下, Ipt 对MDA 含量,GSH-PX 活性及SOD 活性的影响不明显。结论: Ipt 对脑组织缺氧有显著保护作用, 其作用可能与其改变血液流变学特性有关。     

盐酸埃他卡林对大鼠海马神经元谷氨酸受体功能及突触活动的影响

目的: 研究盐酸埃他卡林(Ipt) 对脑神经元谷氨酸受体功能及突触活动的影响。方法: 采用原代培养的大鼠海马神经元, 应用膜片钳全细胞记录技术, 记录Ipt 对培养的海马神经元谷氨酸或天冬氨酸(NMDA) 诱发电流及神经元突触后电流的影响。结果: Ipt (1 ~ 100 μmol·L^-1) 可浓度依赖性地对抗培养的海马神经元谷氨酸或NMDA 诱发电流, 并为ATP敏感性钾通道拮抗剂格列本脲30 μmol·L^-1所对抗。Ipt 抑制培养的海马神经元之间突触联系形成的自发兴奋性突触后电流, 降低其发放频率, 抑制其电流幅度;但对微小兴奋性突触后电流无显著性影响。结论: Ipt 可阻断脑神经元谷氨酸受体功能, 抑制脑神经元谷氨酸的兴奋性突触传递, 其作用与ATP 敏感性钾通道相关。     

埃他卡林等三种结构类型的钾通道开放剂对非血管平滑肌舒张作用的选择性

目的: 研究新结构类型的ATP-敏感性钾通道(K_ATP)开放剂(KCO)、抗高血压新药埃他卡林(iptakalim, Ipt)对胃、回肠和膀胱等非血管平滑肌舒张作用的影响, 并比较Ipt 与其结构完全不同的KCO 、氰胍类的吡那地尔(pinacidil, Pin)和苯并噻二嗪类的二氮嗪(diazoxide, Dia)舒张作用的差异, 为进一步明确Ipt 舒张作用的选择性特征提供一定的依据。方法: 采用大鼠离体胃底、回肠和膀胱肌条3种组织, 以10^-5 mol·L^-1乙酰胆碱预收缩, 观察不同浓度的药物对它们的舒张作用。结果: Ipt 在10^-8 ~10-4mol·L^-1范围内对3 种组织均无显著的舒张作用;Pin 在10^-8 ~ 10^-4 mol·L^-1 范围内对胃底条和膀胱平滑肌等均无显著的舒张作用, 但在10^-5和10^-4mol·L-1时对回肠的舒张率分为28.8 %和51.9 %,诱发显著的舒张作用;Dia 对3 种组织的作用与Ipt相似, 均不引起明显的舒张作用。结论: Ipt 不影响胃、回肠和膀胱的舒张作用, 选择性优于Pin, 与Dia相似;化学结构类型不同的KCO 对回肠、胃和膀胱的作用既相似也有不同。     

缺氧复氧诱导的大鼠海马神经元凋亡和一氧化氮合酶表达变化及银杏叶提取物的作用

目的: 观察银杏叶提取物(EGb) 及其活性成份银杏总内酯(Gin) 对缺氧再复氧诱导的大鼠海马神经元凋亡及一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS) 表达影响。方法: 选用胎龄15 d 的SD 胎鼠的大脑海马细胞进行原代培养, 建立缺氧再复氧海马神经元损伤模型。实验分以下几组:正常组、缺氧复氧组、EGb 组、Gin 组、阳性对照组(MK-801 组)。应用TUNEL 原位末端标记法定量分析细胞凋亡以及NADPH-d 组织化学染色法观察细胞NOS 的表达。结果: (1) TUNEL 免疫细胞化学染色结果显示, 预先加入EGb 和Gin 的药物组神经元的凋亡率明显低于缺氧复氧组;(2) NADPH-d 组织化学染色结果显示,预先加入EGb 和Gin 的药物组抑制神经元NOS 表达,NADPH 阳性细胞减少。结论: EGb 及其活性成份Gin 对缺氧再复氧损伤的海马神经元具有保护作用, 可部分拮抗缺氧再复氧条件下体外培养的海马神经元的凋亡, 抑制NOS 的表达。