小剂量CpG ODN 预处理对细菌脓毒症小鼠的保护作用及其机制探索

目的:研究CpG ODN 对细菌脓毒症小鼠的保护作用及其部分作用机制。方法:建立细菌脓毒症小鼠模型, 给予不同剂量的CpG ODN 后, 再给予热灭活E.coli 攻击小鼠, 观察各组小鼠的死亡情况;有效剂量的灭活E.coli 攻击小鼠后收集血清, 测定血清中TNF-α浓度。结果:10 mg°kg^-1 CpG ODN 预处理小鼠, 可缩短灭活E.coli 攻击后小鼠的死亡时间;提前给予3 d 2 mg°kg^-1 CpG ODN, 能提高灭活E.coli 攻击小鼠的存活率;CpG ODN 预处理能有效抑制细胞因子TNF-α的释放。结论:适当剂量的CpG ODN 预处理对灭活E.coli 攻击小鼠具有保护作用, 其机制可能与抑制Th1 型细胞因子TNF-α的释放有关。     

蛹虫草提取物对内毒素引起小鼠急性肺损伤的保护作用

目的:观察蛹虫草提取物对内毒素引起小鼠急性肺损伤的保护作用。方法:建立内毒素急性损伤小鼠肺病理模型, 造模4 和8 h 后, 用蛹虫草提取物治疗, 造模24 h 后, 对血细胞和肺灌洗液中细胞进行计数并测定肺灌洗液中蛋白酶的活性和蛋白的含量。结果:蛹虫草提取物对血液成分没有明显影响, 但可以使肺灌洗液中白细胞、粒细胞的含量有所降低, 而淋巴细胞和单核细胞的数量有所增加, 蛋白酶活性降低。结论:蛹虫草提取物可调节机体组织的免疫功能, 可以缓解由于内毒素或类似物质造成的肺部炎症, 具有一定的肺保护作用。     

赤芍拮抗内毒素活性的实验研究

目的:提取分离中药赤芍中拮抗内毒素(LPS)的有效成分并进行药理学活性检测。方法:通过生物传感器, 结合常规的中药分离技术, 分离提取出赤芍拮抗LPS 的有效成分, 应用鲎实验和ELISA 法检测该有效成分对LPS 的中和作用。结果:赤芍中的有效成分与LPS 具有较高的结合作用, 该结合作用具有较强的中和LPS 活性, 在体外能够显著抑制由LPS 介导小鼠RAW 264.7 细胞释放TNF-α。结论:以LPS 为靶点, 应用生物传感器技术, 可快速、有效地提取分离赤芍中具有较强的中和LPS 活性的有效成分。     

孕酮和孕烯醇酮硫酸盐对东莨菪碱引起的小鼠记忆损伤的保护作用

目的: 观察孕酮和孕烯醇酮硫酸盐对东莨菪碱引起的小鼠记忆损伤的保护作用。方法: 用东莨菪碱造成小鼠记忆损伤的模型, 应用被动避暗试验测定潜伏期以评价记忆成绩。结果: 小鼠给予东莨菪碱(1 mg·kg^-1, ip) 后, 其潜伏期显著减少, 表明造成了明显的记忆损伤。孕酮(1, 10 mg·kg^-1, sc) 和孕烯醇酮硫酸盐(1 mg·kg^-1, sc) 均可以在被动避暗试验中减轻东莨菪碱引起的记忆损伤。结论: 孕酮和孕烯醇酮硫酸盐可改善记忆损伤。     

青蒿素对CpG DNA 攻击小鼠保护作用的实验研究

目的:观察青蒿素对CpG DNA 攻击小鼠的保护作用及对CpG DNA 诱导小鼠单核 巨噬细胞RAW264.7 释放促炎细胞因子的影响。方法:清洁级昆明小鼠60 只, 随机分为CpG DNA、青蒿素(200mg°kg^-1)、CpG DNA+青蒿素(50、100、200 mg°kg^-1)及生理盐水对照组, 每组动物10 只。CpG DNA 及CpG DNA+青蒿素组小鼠提前1 h 腹腔注射D-氨基半乳糖溶液(600 mg°kg^-1)进行敏化。CpG DNA 组尾静脉给予4 mg°kg^-1的CpG DNA 敏化;青蒿素组,灌胃给予200 mg°kg^-1的青蒿素;CpG DNA+青蒿素组在给予不同剂量的青蒿素后, 立即给予40mg°kg^-1的CpG DNA 敏化;生理盐水对照组仅给予相同量的生理盐水。体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7, 加入不同浓度的青蒿素, 观察其对CpG DNA刺激细胞分泌TNF-α及IL-6 的拮抗作用及其量效、时效关系。结果:青蒿素可降低CpG DNA 引起的小鼠死亡, 死亡率由80% 降至10% (P<0.01)。青蒿素在20 g°ml-1 时显著抑制CpG DNA 诱导RAW264.7 释放TNF-α和IL-6(P<0.01)。提前给予青蒿素, 其拮抗CpG DNA 诱导细胞因子释放的作用非常显著(P<0.01), 但青蒿素在刺激物CpG DNA 给予后再加入, 也能观察到显著拮抗作用(P<0.05)。结论:青蒿素对CpG DNA 攻击小鼠具有显著保护作用, 该保护作用可能与其明显抑制CpG DNA 诱导的促炎细胞因子释放有关。     

阿魏酸钠的抗肝损伤作用及其机制研究

目的: 研究阿魏酸钠(SF)的抗CCl4 肝损伤作用及其作用机制。方法: 以血清ALT 、AST 为诊断指标, 建立急性肝损伤模型, 测定肝细胞浆抗氧化酶、肝线粒体ATP 酶和膜流动性。结果: CCl4 致小鼠血清ALT 和AST 升高时, 单胺氧化酶显著升高, 过氧化氢酶、谷胱甘肽S-转移酶(GST)及膜荧光偏振度、平均微粘度显著降低, Na⁺, K⁺-ATP 酶、Ca²⁺,Mg²⁺-ATP 酶活性呈降低趋势。预先给予SF 50 ~150 mg·kg^-1 (ip, qd ×9)后能明显逆转上述改变, 并呈剂量依赖性变化。结论: SF 对CCl4 肝损伤有保护作用。其作用机制除抑制脂质过氧化作用外, 还与增强肝GSH 结合功能, 保护线粒体膜结构和功能有关。     

内毒素耐受状态小鼠对大肠埃希菌敏感性及促炎细胞因子水平变化的研究

目的: 研究内毒素耐受状态对大肠埃希菌的敏感性及促炎细胞因子水平的变化。方法: 采用小剂量LPS(1 mg/kg)连续腹腔注射 5 d 并在第6天尾静脉注射大剂量LPS(50 mg/kg)建立小鼠内毒素耐受模型。观察小鼠 7 d 存活率或采用ELISA法检测注射大剂量LPS后6、12 h 血清中TNF-α、IL-6水平。然后,采用不同浓度的大肠埃希菌攻击耐受小鼠,观察小鼠 7 d 存活率;或采用血培养方法检测血液中细菌数量,ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6水平。结果: 大剂量LPS攻击组(攻击组)小鼠存活率为0 %,LPS耐受组(耐受组)小鼠存活率为100%;耐受组小鼠血清TNF-α、IL-6水平较攻击组显著降低(P＜0.01)。5.0×10⁸ CFU/kg 大肠埃希菌可导致正常小鼠100%死亡,但是仅 1.0×10⁷ CFU/kg大肠埃希菌就可导致耐受组小鼠100%死亡;耐受组给予大肠埃希菌低、高剂量组小鼠血液中细菌数量远远高于相应的正常小鼠大肠埃希菌低或高剂量组(P＜0.01),而血清中TNF-α、IL-6水平则远远低于相应的大肠埃希菌低或高剂量组(P<0.01)。结论: 连续腹腔注射小剂量LPS 5 d 后并在第6天尾静脉注射大剂量LPS可成功建立LPS耐受模型;与正常对照组小鼠比较,较低数量的大肠埃希菌就可导致耐受组小鼠死亡,说明内毒素耐受小鼠对大肠埃希菌的敏感性较正常小鼠明显增高,其机制可能与内毒素耐受后促炎细胞因子水平降低、机体抵抗力降低有关。     

山茶花总黄酮对缺血性脑损伤的保护作用

目的: 研究山茶花总黄酮(TFC) 对小鼠急性脑缺血和大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法: 结扎小鼠双侧颈总动脉建立脑缺血模型, 观察TFC 对小鼠死亡率及死亡时间的影响。建立局灶性脑缺血(MCAO) 模型, 观察TFC 大鼠对行为学、脑梗死面积的影响, 并测定缺血侧脑组织中乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA) 及一氧化氮(NO) 含量。结果: TFC 80 、40 mg·kg^-1 组可降低缺血小鼠的死亡率, 延长死亡时间;60 、30 、15 mg·kg^-1 组可改善行为障碍,降低行为学评分;60 、30 mg·kg^-1 组可减少MCAO 大鼠脑梗死范围, 降低脑组织中MDA 、NO 含量, 抑制LDH 活性的下降。结论: TFC 对缺血性脑损伤有保护作用, 其机制可能与抗自由基和抑制NO 生成有关。     

刺五加注射液对小鼠急性心肌缺氧的保护作用

目的 观察刺五加对小鼠急性心肌缺氧的保护作用。 方法 常压和低压缺氧条件下分别观察小鼠平均存活时间和心肌耗氧量。 结果 刺五加注射液高低剂量组均可使小鼠常压和低压条件下平均存活时间延长;降低常压、低压条件下心肌耗氧量。 结论 刺五加注射液能明显降低小鼠心肌氧耗, 提高小鼠抗应激能力, 保护缺氧心肌。     

染料木黄酮在大鼠肝微粒体代谢的酶动力学

目的:体外研究大鼠肝微粒体中染料木黄酮代谢的酶动力学, 及选择性细胞色素(CYP) 酶抑制剂对其代谢的影响。方法:用大鼠肝微粒体研究染料木黄酮代谢的酶动力学, 探讨CYP 酶的选择性抑制剂对其代谢的影响及参与其代谢的CYP 酶。结果:CYP1A2 抑制剂呋喃茶碱可以显著地抑制染料木黄酮代谢, 使染料木黄酮的代谢速率下降。而其它CYP 特异性抑制剂对染料木黄酮代谢没有明显的影响。结论:CYP1A2 参与了染料木黄酮的代谢,CYP1A2 的抑制剂可能会与染料木黄酮发生代谢相互作用, 从而降低染料木黄酮的代谢速率。     

抗内毒素多肽对内毒素休克模型家兔的治疗作用

目的: 研究杀菌性通透性增加蛋白模拟肽(BNEP)对内毒素休克家兔重要器官功能的影响。方法: 家兔在静脉注射内毒素(LPS)500μg·kg^-1后,立即注射BNEP5mg·kg^-1,测定、分析不同时相点平均动脉压(MABP)、脉压差、血浆LPS、谷丙转氨酶(ALT)、肌酐(Cr)、肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)的变化,观察8h死亡率。结果: BNEP组MABP下降速率减慢,并均在攻毒6h后恢复到攻毒前的80%以上。而LPS对照组平均动脉压、脉压差在攻毒后维持在低水平。BNEP组攻毒后各时相点血浆LPS浓度均显著低于单纯攻毒组,脉压差在2、4、6h时相点、CK-MB在4、6h时相点、Cr在6h时相点显著低于LPS组,且8h死亡率显著低于单纯攻毒组。但两组间ALT差别不显著。结论: BNEP具有较强的中和LPS能力,对内毒素休克家兔心血管系统、肾功能改善和恢复具有一定的效果。作为严重感染的辅助治疗手段可能具备较好的应用前景。     

中国拟青霉对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的:研究中国拟青霉(CN-802) 对小鼠免疫性肝损伤的保护作用及其对T 淋巴细胞亚群的影响。方法:小鼠尾静脉注射卡介苗加脂多糖(BCG+LPS) 建立免疫性肝损伤模型, 检测其肝、脾重量和转氨酶活性, 并同时测定血清与肝组织中脂质过氧化物(LPO) 含量及T 淋巴细胞亚群数量。结果:CN-802 连用10 d 后可减轻其增大的肝、脾重量指数, 降低小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT) 水平, 降低其血清与肝组织中LPO 含量, 并增加外周血中T 细胞亚群CD₄ 数量和CD₄/CD₈ 比值。结论:CN-802 对小鼠免疫性肝损伤模型有保护作用, 其作用可能与调节细胞免疫有关。     

蟛蜞菊内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞环氧化酶2、NO及TNF-α的影响

目的: 研究蟛蜞菊内酯对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞环氧化酶2(COX-2)、NO及TNF-α的作用。方法: ELISA方法检测 0.2、2、20 μmol/L 不同浓度蟛蜞菊内酯对终浓度为10 μg/mL LPS诱导RAW264.7细胞产生TNF-α、NO及前列腺素E₂(PGE₂)的影响,Western blot方法检测蟛蜞菊内酯对LPS诱导COX-2 酶蛋白表达的影响。结果: LPS能够明显诱导小鼠RAW264.7细胞产生的COX-2酶蛋白,蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的COX-2酶蛋白表达。PGE₂可以被 LPS诱导增加,与空白组比有显著差异。蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的PGE₂、NO和TNF-α,呈现剂量依赖性。结论: 蟛蜞菊内酯抗炎的作用机制可能为抑制COX-2的蛋白表达,进而抑制PGE₂的生成,也可能与抑制NO和TNF-α生成有关。     

匹多莫德对免疫功能缺陷小鼠脾组织TNF-α和IL-6表达及相关免疫药理作用的研究

目的: 研究匹多莫德注射剂对正常小鼠及免疫功能低下小鼠脾组织TNF-α和IL-6表达及相关免疫功能的影响,以及匹多莫德免疫调节作用可能的机制。方法: RT-PCR法对小鼠脾组织的TNF-α和IL-6的表达进行分析;中性红法对小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬功能进行研究;MTT法检测ConA和LPS分别刺激的小鼠脾淋巴细胞的体外增殖;血清溶血素法检测小鼠血清抗体的产生。结果: 匹多莫德注射剂连续给药14d对正常小鼠及免疫功能低下小鼠脾组织的TNF-α和IL-6的表达有一定的促进作用;小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力明显提高;ConA或LPS刺激的小鼠脾淋巴细胞的转化能力均有明显的提高。结论: 匹多莫德可明显提高正常小鼠和免疫功能低下小鼠的免疫功能,并促进TNF-α和IL-6表达。     

重组人白细胞介素10 对角朊细胞增殖及产生细胞因子的影响

目的: 研究重组人白细胞介素10(rhIL-10) 对无血清培养的角朊细胞增殖和产生细胞因子的影响, 探讨其治疗银屑病的作用机制。方法: 用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT) 测定其对细胞增殖的影响;小鼠胸腺细胞增殖法检测白细胞介素1(IL-1);ELISA 法检测白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8) 。结果: 重组人白细胞介素10 抑制角朊细胞增殖与IL-1、IL-6 及IL-8 的分泌, 并呈剂量依赖关系。结论: 重组人白细胞介素10 抑制角朊细胞与细胞因子分泌, 可能是治疗银屑病的作用机理之一。     

川芎嗪对脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞间粘附因子-1 表达的影响

目的:探讨川芎嗪对脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞间粘附因子-1 表达的影响。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞, 经脂多糖诱导后, 分别应用噻唑蓝(MTT) 比色法和流式细胞术检测细胞增殖抑制率和细胞周期的变化, 应用免疫细胞化学法检测细胞表面细胞间粘附因子-1 的表达。结果:川芎嗪呈剂量依赖性的抑制系膜细胞的增殖,并阻止细胞由G₀/G₁ 期进入S 期;使系膜细胞间粘附因子-1 的表达水平明显减少。结论:川芎嗪能抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖和降低细胞间粘附因子-1 表达水平。     

聚乙二醇化学修饰的重组L-门冬酰胺酶对小鼠白血病细胞P388的抑制作用

目的 考察聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)化学修饰的重组L-门冬酰胺酶(recombinant Lasparaginase, rL-ASP)的抗肿瘤活性。 方法 PEG 化学修饰rL-ASP, 获得的化学修饰酶(polyethylene glycolmodified recombinant L-asparaginase, rL-ASP-PEG)利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)观察其分子大小变化, 四甲基偶氮唑盐(3-(4, 4-dimcthylthioazol-2-yl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide, MTT)法和流式细胞仪(flow cytometer, FCM)检测rL-ASP-PEG 对体外培养的小鼠白血病细胞P₃₃₈增殖作用的抑制作用, 腹腔给药考察rL-ASPPEG对小鼠移植性实体瘤P₃₃₈ 抑瘤效果, 透射电镜(transmission electron microscopy, TEM)观察rL-ASPPEG引起的肿瘤组织超微病理变化。 结果 SDSPAGE显示, rL-ASP-PEG 的分子量大于rL-ASP;MTT实验表明, rL-ASP-PEG 能抑制体外培养的小鼠P₃₈₈白血病细胞的增殖, 半数有效浓度(inhibitory concentration50 %, IC₅₀)为2.056 IU·ml^-1。FCM 结果表明, rL-ASP-PEG 主要将肿瘤细胞P₃₈₈ 抑制在G₀ +G₁期,S 期细胞减少。DBA/2 荷瘤小鼠的抑瘤实验表明rL-ASP-PEG 对移植性实体瘤P₃₃₈ 有显著抑制作用, P 值<0.001。超微病理切片显示rL-ASP-PEG引起肿瘤组织坏死。 结论 rL-ASP 经过聚乙二醇化学修饰后, 具有肿瘤抑制作用。