多非替利衍生物CPU228(V03) 对大鼠心室肌细胞钙瞬变的调节

目的:在β-受体激动情况下, 研究多非替利衍生物CPU 228 对电刺激触发心肌细胞的胞浆Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i) 变化及钙瞬变动力学参数的影响。方法:游离单个大鼠心室肌细胞, Fluo-3/AM 负载, 电刺激诱发心室肌细胞钙瞬变, 定量测定心室肌细胞内Ca²⁺浓度变化, 异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO) 100 nmol°L^-1激动β-受体, 观察CPU 228 1 μmol°L^-1对钙瞬变动力学参数、[Ca²⁺]_i 及钙负荷水平的影响。结果:CPU228 1 μmol°L^-1对大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 的影响不明显(P>0.05);ISO 100 nmol°L^-1显著升高大鼠心室肌细胞[Ca²⁺]_i 和细胞内钙负荷水平, 缩短钙瞬变时程, 并且增加钙瞬变的消除速率。CPU 2281 μmol°L^-1显著抑制ISO 的上述作用。结论:在β-受体激动情况下, CPU 228 可以降低心肌细胞[Ca²⁺]_i,使ISO 改变的钙瞬变动力学参数恢复到正常水平。     

萘哌地尔衍生物BWYJ 扩张血管效应及其机理研究

目的: 观察萘哌地尔衍生物BWYJ 对家兔血管活动的影响, 并探讨其血管活性机理, 为该药的开发研究提供基础资料。方法: 采用家兔主动脉收缩的方法, 观察BWYJ 对去甲肾上腺素(NA)、5-羟色胺(5-HT) 和高钾量效曲线的影响;应用无Ca²⁺-复Ca²⁺的实验法, 以NA 和咖啡因为血管收缩剂, 间接观察BWYJ 对细胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i) 的影响,并分析其可能作用机理。结果: BWYJ 10^-7、3×10^-7、10^-6mol·L^-1使NA 量效曲线明显平行右移, 而最大反应不变, pA2 值为7.61 。本品10^-6、10^-5 mol·L^-1对5-HT 量效曲线也有同样的效应, pA2值为6.56 。而当剂量为3×10^-6、10^-5 mol·L^-1时,对氯化钾(KCl) 量效曲线没有明显影响。在无钙Krebs 液中, BWYJ 10^-7、3× 10^-7、10^-6 和10^-5 mol·L^-1呈浓度依赖性抑制NA 所致血管条的短暂收缩, 对复Ca²⁺后NA 所诱发的持续收缩也呈剂量依赖性抑制作用, 但其剂量达10^-5 mol·L^-1时尚不能抑制咖啡因在无Ca²⁺液中所致收缩。结论: BWYJ 可能是一种α受体阻断剂, 兼有拮抗5-HT 受体的作用。其扩血管的机理可能是通过阻断细胞膜上的α受体或5-HT 受体, 从而抑制这些受体中介的Ca²⁺内流和Ca²⁺释放所致。     

蝎毒活性多肽对内皮细胞释放PGI2 和NO 的影响

目的 探讨蝎毒活性多肽(SVAP)抗栓作用机制。方法 酶消化法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),放射免疫分析法测定HUVEC 培养液中6-Keto-PG F1α的含量以反映PGI₂ 的变化, 硝酸还原酶法测定NO 的含量。结果 SVAP 1、5、10、20 mg·L^-1均可明显增加HUVEC PGI₂ 的释放, 而SVAP 1、5 mg·L^-1 对NO 的释放无明显影响,SVAP 10、20 mg·L^-1 可使NO 释放量显著增加,PGI₂ 和NO 释放量之间呈正相关。结论 SVAP抗栓机制可能与影响VEC 合成或(和)分泌PGI₂,NO 以及NO 与PGI₂ 二者之间协同及相互介导作用有关。     

猪苓多糖对膀胱癌细胞钙离子浓度的影响

目的 观察猪苓多糖对人T24 膀胱癌细胞内钙离子(Ca²⁺) 浓度的影响, 探讨猪苓多糖抗癌机理。方法 体外培养人T24 细胞经钙荧光指示剂(calciumcrimson-AM) 负载后, 用激光扫描共聚焦显微镜测定猪苓多糖作用前后细胞内Ca²⁺随时间的变化。结果 猪苓多糖低剂量(0.2 mg·L^-1) 使T24 细胞内Ca²⁺降低, 高剂量(>1 mg·L^-1) 使T24 细胞内Ca²⁺升高, 最后维持在高钙水平上。猪苓多糖主要促进细胞核内Ca²⁺升高, 细胞浆Ca²⁺无明显改变。结论 猪苓多糖可引起T24 细胞内Ca²⁺水平的显著变化, 而且这种变化主要表现在细胞核内, 提示猪苓多糖可能有诱导细胞凋亡的作用。     

DDPH对多种介质所致豚鼠离体肠道平滑肌收缩的影响

目的 研究1-(2, 6-二甲基苯氧基)-2-(3, 4-二甲氧基苯乙氨基)丙烷盐酸盐(DDPH)对多种介质引起的豚鼠离体肠道平滑肌收缩的影响。方法 肠道平滑肌实验法。结果 不同剂量的DDPH 可非竞争性抑制磷酸组胺、氯化乙酰胆碱及Ca²⁺的作用, 使量效曲线非平行右移, 最大反应压低, 其pD₂'值分别为4.0、3.8、3.9。DDPH 还可抑制K⁺所致肠道平滑肌收缩, 但作用较维拉帕米弱, IC₅₀ 值分别为2.7μmol·L^-1 和0.7 μmol·L^-1。结论 DDPH通过非竞争性Ca²⁺拮抗作用使豚鼠回肠平滑肌松弛。     

醋柳黄酮对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的:探讨醋柳总黄酮(TFH) 对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i) 的影响。方法:采用新一代钙荧光探针Fluo-3/AM 检测在高钾、去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素II(Ang Ⅱ) 刺激下单层兔主动脉平滑肌细胞内游离钙水平的改变, 并与传统的钙拮抗剂Verapamil (Ver) 进行对照研究。结果:TFH(100 mg·L^-1) 对静息状态的血管平滑肌细胞[Ca²⁺]_i 无明显影响;TFH(60 ～ 100 mg·L^-1) 呈剂量依赖性抑制高K⁺ 去极化引起的[Ca²⁺]_i 升高, 与Ver 作用相似, 但弱于Ver;TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE、Ang Ⅱ通过受体介导引起[Ca²⁺]_i 升高均具有明显的抑制作用;在无细胞外Ca²⁺存在下, TFH(80、100 mg·L^-1) 对NE 引起的[Ca²⁺]_i 升高也具有一定程度的抑制效应。结论:醋柳总黄酮通过对电压依赖性钙通道和受体操纵型钙通道双重抑制降低血管平滑肌细胞内游离钙水平, 这可能是醋柳黄酮产生舒血管降压作用机制之一。     

新型磷酸二酯酶Ⅳ抑制剂Ariflo 对内皮素-1诱发离体人子宫平滑肌收缩的影响

目的:研究选择性磷酸二酯酶(phosphodiesterase, PDE) Ⅳ抑制剂Ariflo 对内皮素-1 (endothelin-1,ET-1)诱发的非妊娠人子宫平滑肌收缩的影响。方法:累积给药法观察药物对离体平滑肌收缩的作用。结果:Ariflo 可降低子宫平滑肌自主收缩的收缩频率及收缩幅度(pD₂ =7.90), 且对ET-1 (3 ×10^-8 mol·L^-1)诱发的子宫平滑肌收缩具有浓度依赖性抑制作用(pD₂ =7.40), 作用强度与Rolipram 相似。结论:Ariflo 对ET-1 诱发的离体人子宫平滑肌的收缩具有显著抑制作用, 提示在临床上有缓解痛经的作用。     

Cl-通道阻断剂对A10细胞α1-AR 介导的Ca2+内流的影响1

目的: 在胚胎大鼠主动脉平滑肌细胞(A10), 探讨Cl^- 通道与 Ca²⁺ 内流的关系及酪氨酸磷酸化对Ca²⁺ 内流的作用。 方法: 采用 Fura-2 荧光探针双波长测定胞浆游离 Ca²⁺ 浓度([Ca²⁺ ]_i )。 结果: Ca²⁺通道阻断剂 nifedipine 和 SK&F96365 可阻止肾上腺素(Adr) 触发的 Ca²⁺ 内流;氯通道阻断剂 niflumicacid(NFA) 和 furosemide 呈浓度依赖性抑制 Ca²⁺ 内流。在 Ca²⁺ 内流被 SK&F96365 最大限度抑制后,NFA和 furosemide 可进一步抑制 Ca²⁺ 内流;而 Ca²⁺内流被NFA 和furosemide 分别最大抑制 28%和 35%后, SK&F96365 也可进一步抑制 Ca²⁺ 内流达 53%和52%。genistein 呈浓度依赖性抑制 Ca²⁺ 内流;vana-date 浓度依赖性促进 Ca²⁺ 内流。 结论: 在 A10 细胞, 肾上腺素受体触发的 Ca²⁺ 内流涉及电压依赖性Ca²⁺ 通道(VDC) 和受体操纵性 Ca²⁺ 通道(ROC);氯通道参与了 VDC 及 ROC 介导的 Ca²⁺ 内流;蛋白酪氨酸磷酸化的水平影响 Ca²⁺ 内流。     

Ca2+/CaM-CaN 途径参与神经肽Y 诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的: 探讨Ca²⁺ CaM 依赖的钙调神经磷酸酶(CaN) 途径在神经肽Y(NPY) 诱导心肌细胞肥大中的作用。方法: 用NPY (10、100 nmol·L^-1) 刺激WISTAR 乳鼠心肌细胞, 并用CaN 特异性抑制剂环胞霉素A 加以干预。应用3H-Leu 掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率, 用免疫印迹(Western-blot) 和组织化学法分别测定心肌细胞内CaN-α蛋白表达和CaN 酶的活性。结果: 较高浓度NPY(100 nmol·L^-1) 可明显增加心肌细胞3H-Leu 掺入量(P < 0.05), 加入CsA 可阻断上述效应;NPY(100 nmol·L^-1) 还可明显增加心肌细胞内CaN 酶比活性(P <0.05), 并刺激心肌细胞CaN-α蛋白表达(P <0.05) 。结论: NPY 可活化大鼠心肌细胞Ca²⁺CaM-CaN 途径, 而CaN 特异性抑制剂环胞霉素A 可抑制NPY 诱导的心肌肥大, 说明Ca²⁺ CaM 依赖的钙调神经磷酸酶(CaN) 途径参与神经肽Y 诱导的心肌细胞肥大效应。     

放化疗细胞保护剂WR-2721对国人血小板功能影响的研究

目的 探讨放、化疗细胞保护剂WR -2721对生理性激活剂ADP 、胶原和血小板激活因子(PAF)引起的血小板激活的影响。方法 取20 ~ 35岁健康人血液,分别给予生理性激活剂ADP 1 μmol·L^-1 、胶原2 mg·L^-1和PAF 0.1 mg·L^-1后,再用终浓度为10^-7 ~ 10^-5 mol·L^-1的WR-2721 处理,观察对血小板聚集的影响,然后观察血栓素B₂(TXB₂)和NO 的水平。结果 WR-2721 抑制ADP 、胶原和PAF诱导的血小板聚集和TXB₂ 产生,并存在剂量依赖关系。在终浓度为5 μmol·L^-1 时,WR-2721 明显增加用ADP 、胶原和PAF 诱导的NO 的产生,表明活化血小板释放的NO 参与WR-2721 的抑制效应。结论 WR-2721 体外可有效地抑制生理性激活剂引起的血小板活化。除了细胞保护作用外,WR-2721 还可以用予治疗有关的疾病。     

9-(4-乙氧羰基苯氧基)-6, 7-二甲氧基-1, 2, 3, 4-四氢吖啶盐酸盐对PC12细胞缺氧缺血损伤的保护作用

目的 研究9-(4-乙氧羰基苯氧基)-6, 7-二甲氧基-1, 2, 3, 4-四氢吖啶盐酸盐(EDT) 对神经细胞缺血缺氧损伤的影响。方法 离体培养的PC12 细胞, 用连二亚硫酸钠造成缺氧/复氧损伤模型, 用NaCN 加缺糖造成拟缺血损伤模型, 通过MT T 微量比色、培养介质LDH 活力测定研究EDT 对两模型的保护作用。结果 在10^-8～10^-6 mol·L^-1范围内, EDT 浓度依赖地降低两种损伤所致培养介质内LDH 的释放, 增加MTT 比色值, 同时10^-6 mol·L^-1 EDT 对两模型的保护作用具有时间依赖性, 48 h 达效应平台。结论 EDT 对PC12 细胞缺血缺氧损伤具有保护作用。     

绞股蓝总皂甙对氧化修饰低密度脂蛋白损伤小牛主动脉内皮细胞的防治作用

目的 探讨绞股蓝总皂甙(GYP)对氧化修饰低密度脂蛋白(oxidatively modified low density lipoprotein, oxLDL)损伤小牛主动脉内皮细胞的防治作用及可能机制。 方法 在体外培养的小牛主动脉内皮细胞(bovine aortic endothelial cell, BAEC)中加入oxLDL(终浓度为0.1 g pr·L^-1)及GYP 低、中、高剂量组(5.0, 10.0, 20.0 mg·L^-1), 培养24 h 后, 采用细胞毒试验、丙二醛(MDA)测定及细胞计数等方法, 分别对其贴壁细胞及培养液进行检测。 结果 ①细胞毒试验发现, oxLDL 对BAEC 的生长增殖有明显的抑制作用(20.63 %), GYP 组(10.0, 20.0 mg ·L^-1)为9.14 %和6.56 %(P <0.01);②加oxLDL 组和GYP组BAEC 粘附的HL60 细胞数明显多于对照组(P <0.01);③MDA 检测发现oxLDL 促进BAEC 脂质过氧化物生成, 并高于GYP 组和对照组(P <0.01)。 结论 绞股蓝总皂甙具有对氧化修饰低密度脂蛋白损伤小牛主动脉内皮细胞的防治作用。     

3,4,5,6-四羟基口山酮对高糖所致血管内皮依赖性舒张功能减退的保护作用

目的:观察3, 4, 5, 6-四羟基_口山酮对高糖所致血管内皮依赖性舒张功能减退的保护作用。方法:在大鼠离体胸主动脉环, 用高浓度葡萄糖(25mmol°L^-1) 孵育24 h, 检测乙酰胆碱诱导的血管内皮依赖性舒张反应;人脐静脉内皮细胞株(ECV304)用高浓度葡萄糖(30 mmol°L^-1) 培养48 h, 测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性、一氧化氮(NO) 及细胞脂质过氧化物丙二醛(MDA) 含量。结果:3, 4, 5, 6-四羟基_口山酮(1、3 和10 μmol°L^-1) 能显著抑制高糖所致的舒血管效应减退, 并且呈剂量依赖性。3, 4, 5,6-四羟基_口山酮(1、3 和10 μmol°L^-1) 能显著抑制高糖所致的内皮细胞LDH 泄漏、NO 释放和MDA 生成的增加。结论:3, 4, 5, 6-四羟基_口山酮对高糖所致的血管内皮依赖性舒张功能减退有保护作用, 其保护作用与抑制脂质过氧化减少血管内皮细胞损伤有关。     

新型KATP开放剂埃他卡林对氟哌啶醇诱导的大鼠帕金森样症状的影响

目的:研究ATP 敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channels, K_ATP) 开放剂埃他卡林(I_ptakalim, I_pt) 对由氟哌啶醇(haloperidol) 诱导产生的大鼠帕金森样症状的影响。方法:应用氟哌啶醇诱导大鼠帕金森样症状, 以左旋多巴(levodopa, L-DOPA) 为阳性对照, 观察不同剂量I_pt 对大鼠运动潜伏时间、行走时间以及直立和梳洗次数的影响。结果:I_pt 能显著改善氟哌啶醇引起的大鼠自发性活动减少;能缓解氟哌啶醇引起的大鼠全身僵硬, 并且随剂量的增加,I_pt 的作用逐渐增强。结论:K_ATP 通道开放剂I_pt 能够改善氟哌啶醇引起的大鼠帕金森样症状, 是一个极富治疗潜力的先导化合物。     

替米沙坦片血药浓度的HPLC测定方法及其在健康人体的药动学研究

目的: 建立高效液相色谱法测定人血浆中替米沙坦的药物浓度,并研究其在健康人体内的药动学3方法: 采用高效液相色谱-焚光检测法,色谱柱为 Hypersil C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液（45:55,pH 5.8);流速为1.0 ml·min^-1;激发波长和发射波长分别为305 nm和365 nm;进样量20 μl;内标物为α-萘酚。结果: 替米沙坦在2~1 024 μg·L^-1范围内线性良好（r=0.9999),回收率,日间、日内差均符合生物样品分析要求。10名健康受试者口服替米沙坦片80 mg后的药动学结果表明,其体内过程符合二房室开放模型,主要药动学参数如下:C_max为0.98±0.44 mg·L^-1;T_max为 0.83±0.45 h; t_1/2为 1.67±1.26 h; t_1/2β为26.00±14.43 h;t_1/2kd为 0.53±0.86h;AUC_0-l为 3.66±2.10 mg·h ^-1; AUC_0-∞为 3.98±2.40 mg·h ^-1·L ^-1。 结论: 此方法便捷,准确,灵敏,适于替米沙坦血药浓度测定和药动学研究,本试验所得药动学参数可为临床合理用药提供理论依据。     

米帕明对大鼠皮层神经细胞缺血性损伤的保护作用

目的: 研究米帕明(Imi) 对培养大鼠神经细胞缺血和谷氨酸(Glu) 损伤的保护作用。方法: :分离培养 15～ 18 d 胎龄的大鼠神经细胞, 用连二亚硫酸钠消除培养基中的氧, 合并培养基缺糖模拟细胞缺血性损伤;加入Glu 模拟兴奋毒性损伤, 测定乳酸脱氢酶、一氧化氮、丙二醛和超氧化物歧化酶的含量变化, 观察缺血和Glu 对神经细胞的损伤及 Imi 的保护作用。结果: :缺血及 Glu 引起神经细胞明显损伤性变化, 死亡率升高, 培养上清液中乳酸脱氢酶、一氧化氮含量升高, 细胞匀浆中丙二醛生成增加, 超氧化物歧化酶含量明显减少。Imi 10^-8 ～ 10^-6 mol·L^-1能不同程度地减轻上述损伤性变化。结论: :Imi 对神经细胞缺血性损伤有保护作用, 机制可能与抗脂质过氧化及钙拮抗作用有关。     

血管紧张素-(1-7) 对血管紧张素II致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究

目的:观察血管紧张素-(1-7) [Ang-(1-7)] 对血管紧张素II(Ang II) 致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养的HUVECs随机分为4 组:对照组, AngII 组, Ang-(1-7) 组, AngII+Ang-(1-7) 组。采用分光光度计测定培养的HUVECs乳酸脱氢酶(LDH) 漏出;流式细胞仪检测细胞凋亡;硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs 上清液中一氧化氮(NO) 和内皮素-1(ET-1)的含量。结果:与对照组比较,Ang II(0.1 μmol°L^-1)显著增加HUVECs LDH 漏出(P<0.01)、ET-1 分泌(P<0.01) 和HUVECs 凋亡率(P<0.01), 显著减少NO 的含量(P<0.05);Ang-(1-7) 呈剂量依赖性抑制了Ang II 的促LDH 漏出、ET-1 分泌、增加细胞凋亡等作用, 同时明显促进HUVECs 的NO 释放;单用Ang-(1-7) 对HUVECs 无明显影响。结论:Ang-(1-7)可抑制Ang II 所致的体外培养HUVECs 损伤, 对内皮细胞具有保护作用。     

两种不同结构类型的钾通道开放剂埃他卡林和吡那地尔联合用药降压作用的特征

目的:观察两种不同种类的钾通道开放剂(potassium channel openers, KCOs) 埃他卡林(I_ptakalim,I_pt) 和吡那地尔(pinacidil, Pin) 联用降压作用的特征。方法:用无创性套尾法观察药物对清醒大鼠血压和心率的影响。结果:Pin 在2.0 和4.0 mg·kg^-1剂量下, 可剂量依赖性降低清醒大鼠的血压, 加快其心率。I_pt 在2.0, 4.0 和8.0 mg·kg^-1剂量下, 可剂量依赖性降低血压, 但不影响心率。I_pt (2.0 ～8.0 mg·kg^-1) 与Pin(4.0 mg·kg^-1) 合用时, 其降压作用产生协同效应, 但加快心率的作用与Pin 相同。结论:I_pt 和Pin 降压特点不同, 二者联用的降压作用增强。