4 种归肝经明目中药对晶状体上皮细胞凋亡相关基因Bcl-2 和Bax 的调控

目的:探讨4 种归肝经明目中药车前子、青葙子、菊花和熟地对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cell, LEC)凋亡相关基因Bcl-2和Bax 的调控。方法:将SD 大鼠双眼随机分成7组:空白对照组、过氧化氢(H₂O₂)组、吡诺克辛(PS)组、车前子组、青葙子组、菊花组和熟地组。无菌操作摘除眼球并在手术显微镜下分离晶状体, 使晶状体孵育在300 μmol·L^-1 H₂O₂ 培养液中复制LEC 凋亡模型, 同时采用4 种归肝经明目中药干预, 置二氧化碳培养箱共同孵育24 h 。取晶状体前囊膜采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2 和Bax 的蛋白表达并进行比较。结果:正常SD 大鼠LEC 中Bcl-2 和Bax 均有表达, Bcl-2 表达较Bax 表达强;H₂O₂组Bcl-2 表达显著下调, Bax 表达显著上调(P <0.01),Bcl-2/Bax 比率下降;与H₂O₂ 组比较, 4 种归肝经明目中药可明显上调Bcl-2 表达, 下调Bax 表达(P <0.01),Bcl-2/Bax 比率上升;PS 与4 种归肝经明目中药的调节作用相似, 但弱于4 种归肝经明目中药的作用(P <0.05)。结论:4 种归肝经明目中药调控凋亡相关基因Bcl-2 和Bax 的表达可能是其抑制LEC 凋亡的分子机制。     

车前子对晶状体上皮细胞氧化损伤防护作用的信号转导机制

目的:研究车前子对过氧化氢(H₂O₂)所致氧化损伤的晶状体上皮细胞(LEC)内钙(Ca²⁺)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,探讨归肝经明目中药防治白内障的细胞信号转导机制。方法:将H₂O₂与传代培养的牛LEC共同孵育复制氧化损伤模型,同时加入车前子水提取液孵育后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测LEC活性,用荧光分光光度法检测LEC内钙离子的浓度([Ca²⁺]_i)、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量,并探讨不同浓度的车前子及孵育12、24、36h的影响。结果:H₂O₂组LEC活性下降,车前子可明显增强氧化损伤的LEC活性(P<0.01),呈浓度依赖关系和时间依赖关系。H₂O₂组LEC的[Ca²⁺]_i升高,车前子可显著降低由氧化损伤所致的LEC的[Ca²⁺]_i的升高(P<0.01),呈时间-效应关系。H₂O₂组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降,车前子可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低(P<0.01)、cGMP水平显著升高(P<0.01),也呈时间-效应关系。结论:车前子可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡,[Ca²⁺]_i、cAMP和cGMP信号系统及其相互作用调节生物学效应可能是其细胞和分子生物学的主要作用机制。     

阿魏酸钠防护晶状体上皮细胞氧化损伤的信号转导机制

目的: 探讨阿魏酸钠对氧化损伤的晶状体上皮细胞内 Ca²⁺ 、环磷酸腺苷(cAMP) 、环磷酸鸟苷(cGMP) 的影响, 从细胞信号转导角度揭示天然药物防治白内障的细胞和分子学机制。方法: 采用牛晶状体上皮细胞进行晶状体上皮细胞(LEC) 原代和传代培养, 以含有过氧化氢(H₂O₂) 的培养液孵育 LEC复制氧化损伤模型, 并加入阿魏酸钠单体共同孵育。分别采用四甲基偶氮唑兰(MTT) 比色测定法观察在不同时间和浓度条件下 LEC 活性变化, 采用荧光分光光 度 计 测 定 不 同 时 间 细 胞 内 钙 离 子 浓 度([Ca²⁺]_i) 以及放射免疫分析法测定不同时间 LEC内cAMP 、cGMP 的含量变化。结果: H₂O₂ 组可引起LEC 吸光度值(A)明显下降(P<0.01), 阿魏酸钠能明显增强氧化损伤的LEC活性, 并呈剂量-效应关系和时间-效应关系。氧化损伤的 LEC[Ca²⁺]_i 升高(P<0.01);阿魏酸钠可以降低由 H₂O₂ 引起的细胞[Ca²⁺]_i 的升 高, 并呈时间-效应关系。H₂O₂ 组cAMP 浓度升高;cGMP 浓度下降(P<0.01);阿魏酸钠使 cAMP 水平下调, cGMP 水平上升(P<0.01), 并呈时间-效应关系。结论: 阿魏酸钠可明显抑制 LEC氧化损伤及凋亡, 其作用机制可能是通过钙信号系统、cAMP 信号系统、cGMP 信号系统及其相互作用来调节生物学效应。     

氯苄四氢小檗碱对抗H2O2引起无血清培养的血管内皮细胞凋亡及坏死

目的: 研究氯苄四氢小檗碱对过氧化氢(H₂O₂)引起无血清培养的小牛主动脉血管内皮细胞的凋亡、增殖、坏死的影响。方法: 通过体外细胞培养, 以噻唑兰(MTT) 法测定细胞存活率;用流式细胞术检测细胞DNA 含量及凋亡细胞百分率、增殖率;DNA 琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA 断裂程度。结果: H₂O₂ 诱导无血清培养的内皮细胞凋亡, 氯苄四氢小檗碱可显著降低内皮肌细胞中凋亡细胞百分率, 并抑制其增殖, 也减少凋亡细胞DNA 断裂, 同时也减少其引起的平滑肌细胞坏死。结论: 氯苄四氢小檗碱可对抗H₂O₂ 引起的无血清培养的血管平滑肌细胞凋亡、增殖及坏死。     

大豆异黄酮活性组分对 H2O2 诱导的 PC12 细胞损伤的影响

目的: 探讨大豆异黄酮活性组分对 H₂O₂ 诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法: 以 H₂O₂ 损伤PC12细胞为氧化应激损伤的模型, 采用光学显微镜观察细胞形态, MTT 法判断细胞的存活率, LDH 法检测细胞的损伤程度。结果: 不同浓度大豆异黄酮能明显改善 H₂O₂ 导致的细胞甲瓒减少, 大豆异黄酮处理组细胞存活率明显高于 H₂O₂ 处理组(P<0.01);而 LDH 漏出率则明显低于H₂O₂ 处理组(P<0.05)。结论: 大豆异黄酮活性组分对 H₂O₂ 诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

鲨鱼肝活性肽S-8300 的降血糖作用机制初探

目的:探讨鲨肝活性肽S-8300 的降血糖作用机制。方法:观察S-8300 对四氧嘧啶糖尿病小鼠的血浆总胆固醇(CHOL), 血浆甘油三酯(TG), 血浆游离脂肪酸(NEFA), 肝、肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力, 肝、肾组织中丙二醛(MDA)含量, 心肌ATP 酶活力的影响及红细胞在体外所发生的自氧化溶血和H₂O₂ 在体外对红细胞膜的损伤的影响。结果:S-8300 显著降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的血浆CHOL、 TG、 NEFA 水平及肝、肾组织中MDA 含量, 提高肝、肾组织中SOD活力和心肌ATP 酶活力, 显著抵抗红细胞在体外所发生的自氧化溶血及H₂O₂ 在体外对红细胞膜的损伤。结论:降低糖尿病小鼠血浆中脂质, 减轻自由基的氧化损伤可能是S-8300 降血糖作用的机制之一。     

姜黄素对过氧化氢诱导的血管内皮细胞损伤的双重作用

目的: 研究姜黄素(Cur) 对过氧化氢(H₂O₂) 诱导的血管内皮细胞ECV304 的作用及可能机制;方法:胎盘兰计数法分组观察在不同的时间点加入姜黄素后对H₂O₂ 诱导的ECV304 细胞氧化损伤的作用。流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率的变化,试剂盒检测一氧化氮(NO) 、丙二醛(MDA) 含量及超歧化物氧化酶(SOD) 、谷胱甘肽还原酶(GR) 活性的变化。结果: 姜黄素0 ~ 100μmol·L^-1 与H₂O₂500μmol·L^-1同时作用5 h,随姜黄素浓度升高细胞存活率升高;25 ~ 100μmol·L^-1姜黄素预先作用1 h,再换为H₂O₂ 500μmol·L^-1作用4 h,细胞存活率明显下降;H₂O₂500μmol·L^-1 作用4 h,再加入25 ~ 100μmol·L^-1姜黄素作用1 h,细胞存活率也升高。姜黄素对H₂O₂ 诱导的细胞凋亡没有明显的影响,但同时作用组、H₂O₂ 先作用组S 期细胞所占比例升高,姜黄素先作用组S 期细胞所占比例下降。同时作用组、H₂O₂ 先作用组的SOD 、NO 、Gr水平相对升高,MDA 水平下降,姜黄素先作用组的SOD 、NO 、Gr水平相对下降,MDA 水平升高。结论: 姜黄素对H₂O₂诱导的血管内皮细胞ECV304 有双重效应,即有保护效应也有细胞毒效应,与其作用时间点有关。     

珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的: 观察珠子参总皂苷对H₂O₂诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制。方法: Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H₂O₂建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100, 200 μg/mL)孵育 24 h后,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定心肌细胞Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定心肌细胞Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果: 珠子参总皂苷(100, 200 μg/mL)能显著改善心肌细胞活性,有效保护线粒体膜电位的稳定,抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内活性氧(ROS)含量;下调Bax mRNA表达,上调Bcl-2 mRNA表达及Bcl-2与Bax的比值;降低H₂O₂所致新生大鼠心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性。结论: 珠子参总皂苷对H₂O₂诱导心肌细胞凋亡有显著的抑制作用,其机制可能与其稳定心肌细胞膜、清除ROS及调节心肌细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3、Caspase-9表达有关。     

三氧化二砷通过 JNK 信号通路诱导 K562 细胞凋亡

目的: 探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在三氧化二砷(As₂O₃)诱导K562细胞凋亡中的作用及机制。方法: 体外培养K562细胞,用As₂O₃ 及特异性JNK抑制剂SP600125对K562细胞进行处理;倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率;Annexin V PI 染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测p-JNK蛋白表达的变化;流式细胞术检测突变型P53表达。结果: ELISA显示4μmol/L As₂O₃ 作用48 h后 p-JNK 蛋白表达增强,经SP600125 预处理后, As₂O₃ 诱导的K562细胞p-JNK蛋白表达明显减弱(P<0.01) , As₂O₃ 诱导的细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均下降,与As₂O₃ 单作用组相比突变型P53表达增加(P<0.05)。结论: JNK信号转导通路在As₂O₃ 诱导K562细胞凋亡过程中发挥重要作用,是 As₂O₃ 诱导K562 细胞凋亡的主要途径之一。     

盐酸埃他卡林对H2O2所致PC12细胞损伤的保护

目的: 研究 K_ATP 通道开放剂盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride, Ipt) 对 H₂O₂ 所致 PC12 细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法: 采用培养的PC12细胞, MTT 法测定细胞存活率, HPLC 法测定细胞培养液中谷氨酸(Glu) 的含量, 荧光法测定胞内钙离子([Ca²⁺]_i) 浓度。结果: Ipt 可浓度依赖性的拮抗H₂O₂ 介导的细胞毒性, 提高细胞生存率, 降低胞外Glu的释放以及胞内 Ca²⁺ 浓度。该保护作用可被200 μmol°L^-1 5-HD(线粒体K ATP 通道阻断剂) 部分拮抗。结论: Ipt 可拮抗 H₂O₂ 介导的细胞损伤作用, 该保护作用可能与线粒体ATP 敏感性钾通道相关。     

用晶体混浊分类系统Ⅲ探讨复方水蛭滴眼液防治老年性白内障的临床研究

目的: 用晶体混浊分类系统Ⅲ(lens opacities classification system Ⅲ, LOCS Ⅲ) 探讨复方水蛭(shui zhi, SZ) 滴眼液对老年性白内障的防治作用。方法: 采用以民间验方为基础、以SZ 为主要成分、富含锌和维生素C 的复方SZ 滴眼液, 并以进口抗白内障药物吡诺克辛钠滴眼液(吡诺克辛) 为对照组, 应用LOCS Ⅲ晶体混浊分类系统观察和比较两种滴眼液对老年性白内障的防治作用。结果: 复方SZ 滴眼液组视力提高率(76 %) 、晶体混浊减低率(59 %) 、有效率(66 %) 均明显优于吡诺克辛滴眼液对照组(2.0 %、0 %和2.0 %) 。且无明显的不良反应。结论: 复方SZ 滴眼液是一种安全、有效的抗白内障药物, 疗效优于进口抗白内障药物吡诺克辛滴眼液。     

枸杞多糖调控Shh信号影响骨肉瘤HOS细胞增殖和凋亡

目的:研究枸杞多糖(LBP)调控Sonic Hedgehog(Shh)信号通路对骨肉瘤HOS细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法:骨肉瘤HOS细胞分成Control(空白对照)、LBP-I(110 μg/mL枸杞多糖)、LBP-II(220 μg/mL枸杞多糖)、LBP-III(440 μg/mL枸杞多糖)共4组,MTT测定细胞增殖,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法测定凋亡,Western blot测定Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP、细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Shh、Gli1蛋白表达。Shh信号激活剂和枸杞多糖共同处理骨肉瘤HOS细胞,利用上述方法测定细胞增殖、周期和凋亡变化。结果:与Control组比较,LBP-I、LBP-II、LBP-III组细胞增殖能力依次降低,细胞G0/G1期细胞比例依次升高[(51.2±4.1)% vs. (59.1±3.2)%,(66.8±2.0)%,(72.3±3.2)%,F=72.76,P<0.001],细胞凋亡水平依次升高[(3.9±0.3)% vs. (13.2±1.2)%,(17.6±1.3)%,(24.8±2.1)%,F=364.50,P<0.001],细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达水平依次升高,CDK4、cyclin D1、Shh、Gli1蛋白表达水平依次降低(P<0.05)。与未经Shh信号激活剂处理的细胞比较,经过Shh信号激活剂处理的细胞可以逆转枸杞多糖对骨肉瘤HOS细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。结论:枸杞多糖通过抑制Shh信号通路阻滞骨肉瘤HOS细胞周期、抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。     

活血通窍贴片经皮给药对兔急性脑出血血液流变学及超氧化物歧化酶、丙二醛的影响

目的:探讨磁场作用下活血通窍贴片经皮给药治疗兔急性脑出血的作用机理。方法:以日本大耳白兔为研究对象,随机分成正常对照组、模型组、药物组和磁场下药物组。其中,药物组仅经皮给予活血通窍中药贴片,含磁药物组经皮给予活血通窍贴片。分别测血液流变学指标及脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结果:与正常对照组比较,模型组全血低切黏度、全血高切黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数均普遍降低(P<0.05或P<0.01),血浆黏度升高(P<0.01);与模型组比较,药物组和含磁药物组全血低切黏度、全血高切黏度、红细胞压积升高(P<0.05或P<0.01),血浆黏度明显降低(P<0.05),其中含磁药物组更为显著。此外,模型组脑组织SOD含量较正常对照组显著降低(P<0.01),MDA含量较正常对照组显著增高(P<0.01);与模型组相比,药物组和含磁药物组SOD含量明显增高(P<0.05或P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01),其中含磁药物组更为显著。结论:活血通窍贴片经皮给药能显著改善兔急性脑出血血液流变性,提高SOD含量,降低MDA含量,这可能是活血通窍贴片治疗脑出血的部分作用机理。     

黄体酮防治大鼠缺血再灌注脑损伤中神经功能缺失及细胞凋亡

目的: 探讨黄体酮(progesterone, PROG) 对脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法: 采用SD 大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(transient middle cerebral artery occlusion,MCAO) 。将大鼠随机分为6 组:假手术组、ischmia/reperfusion (I/R) 组、溶剂(二甲基亚砜dimethyl sulfoxide, DMSO) 对照组、PROG 预防组、PROG 治疗组、PROG 预防并治疗组, 对各组动物脑缺血/再灌注后神经功能缺陷进行计分, 并应用细胞死亡原位末端标记(insitu end labeling, ISEL) 法研究脑组织细胞凋亡情况。结果: (1) 缺血2 h 再灌注24 h 后神经功能缺陷计分:假手术组为0 分, I R 组为1. 38±0. 92, DMSO 组为1. 0±0. 53, 预防组为0. 35±0. 51, 治疗组为0. 62±0. 52, 防治组为0. 25±0. 46 。(2) 高倍视野下凋亡细胞数:假手术组为1. 88±0. 25, I R 组为41. 38±3. 85, DMSO 组为38. 13±5. 69, 预防组为22. 88±2. 70, 治疗组为25. 63±2. 93, 防治组为20. 88±2. 30 。以上指标各药物处理组(预防组、治疗组及防治组) 与I R 组、DMSO 对照组之间差异具有统计学意义(P<0. 05) 。结论: PROG 可减少局灶性缺血再灌注脑损伤动物模型神经功能缺失的发生, 减轻局灶性缺血再灌流脑损伤, 减少大鼠缺血再灌注后脑细胞凋亡。     

氟西汀对阿尔茨海默病模型小鼠的神经元保护作用

目的: 研究氟西汀对老年APP/PS1双重转基因阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆能力的影响及对神经元的保护作用。方法: 实验分为动物实验和细胞实验。动物实验中取APP/PS1双重转基因小鼠随机分为氟西汀组(n=8)和生理盐水组(n=8),另取C57同窝生同月龄正常小鼠10只为对照组。氟西汀组小鼠给予氟西汀(10 mg/kg)腹腔注射,生理盐水组及对照组注射等量生理盐水1次/d,持续8周。Morris水迷宫实验进行行为学检测。Tunel 染色检测海马区神经元凋亡。细胞实验中将人神经母细胞瘤细胞 (SH-SY5Y)培养 48 h 后分为正常组、Aβ组、氟西汀组和氟西汀+Aβ组,后3组分别在含 10 μmol/L β-淀粉样蛋白、100 nmol/L 氟西汀和 100 nmol/L 氟西汀+10 μmol/L β-淀粉样蛋白的DMEM中继续培养48 h。行原位细胞凋亡染色检测各组细胞凋亡。结果: 水迷宫定位航行实验中,氟西汀组小鼠较生理盐水组相比平均潜伏期明显缩短(P<0.01);空间探索实验中跨越平台次数增加(P<0.01);海马区凋亡神经元数量减少(P<0.01)。细胞实验中,氟西汀组和氟西汀+Aβ组与Aβ组相比,凋亡细胞数量明显减少(P<0.01)。结论: 氟西汀对神经元细胞有保护作用,能减少神经元的凋亡,长期服用氟西汀能显著改善APP/PS1阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆力能力。