盐酸埃他卡林对缺氧诱导神经细胞凋亡的影响

目的: 探讨盐酸埃他卡林(Ipt) 对缺氧诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法: 用电镜和流式细胞分析技术, 检测原代培养的大鼠皮质神经细胞凋亡;应用免疫组化法, 观察凋亡相关蛋白Bcl-2 、Bax 表达的改变。结果: Ipt 10 μmol·L^-1可减轻缺氧诱导的细胞染色质浓缩现象, 逆转缺氧诱导的Bcl-2表达的下调, 对Bax 表达无显著影响;Ipt (0.1~10 μmol·L^-1) 能剂量依赖性地降低凋亡细胞百分率, 以10 μmol·L^-1 浓度组效果最好, 其作用可被ATP 敏感性钾通道特异性阻断剂格列本脲(Gli) 所拮抗。结论: Ipt 对缺氧诱导的神经细胞凋亡有明显的抑制作用, 其作用机制与ATP 敏感性钾通道、Bcl-2 表达相关。     

石杉碱甲增强大鼠海马脑片CA1锥体神经元的兴奋性突触传递

目的: 观察石杉碱甲(Hup-A)对海马CA1锥体神经元兴奋性突触传递的影响,以探讨其增强学习记忆功能的神经细胞电生理机制。方法: 应用大鼠海马脑片CA1锥体神经元细胞内记录技术,观察Hup-A对大鼠海马CA1锥体神经元膜电性质和刺激Schaffer侧支诱发的兴奋性突触后电位(EPSP)的影响。结果: (1) Hup-A (1 μmol/L) 灌流 15 min 对CA1锥体神经元的膜电性质没有显著性影响。(2) Hup-A (0.3~3.0 μmol/L)浓度依赖性使EPSP幅度升高、时程延长、曲线下面积增大,该作用可被阿托品 (10 μmol/L) 预处理取消。(3)Hup-A对外源性谷氨酸诱导的去极化反应无明显影响。结论: Hup-A可增强CA1锥体神经元的兴奋性突触传递,其增强突触传递作用与M型乙酰胆碱受体激动有关。     

ATP敏感性钾电流与蛋白激酶关系的研究1

目的 观察蛋白激酶A(PKA)及蛋白激酶C(PKC)抑制剂和蛋白脱磷酸化物质对大鼠心室肌细胞ATP敏感性钾电流($I_{KATP}$)的影响,探讨克罗卡林(cromakalim)开放ATP敏感性钾通道的作用机制。方法 采用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞$I_{KATP}$。结果 在37℃时克罗卡林(1μmol·L^-1)可阻断ATP的抑制作用,诱导出$I_{KATP}$。PKA抑制剂PKI(6~22)amide(1μmol·L^-1),可模拟克罗卡林的作用,激活$I_{KATP}$;而PKC抑制剂calphosticC无此作用。同时还观察到蛋白脱磷酸化物质butanedioemonoxime(BDM,5mmol·L^-1)也可诱发出$I_{KATP}$。结论 克罗卡林开放$I_{KATP}$机制与抑制PKA的活性有关,而与PKC无关。     

盐酸埃他卡林对H2O2所致PC12细胞损伤的保护

目的: 研究 K_ATP 通道开放剂盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride, Ipt) 对 H₂O₂ 所致 PC12 细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法: 采用培养的PC12细胞, MTT 法测定细胞存活率, HPLC 法测定细胞培养液中谷氨酸(Glu) 的含量, 荧光法测定胞内钙离子([Ca²⁺]_i) 浓度。结果: Ipt 可浓度依赖性的拮抗H₂O₂ 介导的细胞毒性, 提高细胞生存率, 降低胞外Glu的释放以及胞内 Ca²⁺ 浓度。该保护作用可被200 μmol°L^-1 5-HD(线粒体K ATP 通道阻断剂) 部分拮抗。结论: Ipt 可拮抗 H₂O₂ 介导的细胞损伤作用, 该保护作用可能与线粒体ATP 敏感性钾通道相关。     

κ-阿片受体与β1-肾上腺素受体交互作用抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大

目的: 观察选择性 kappa 阿片受体(kappa opi-oid receptor,κ-OR)与 β 肾上腺素受体(β adrenergicreceptor, β-AR)在心肌细胞肥大方面的交互作用。方法: 以 体 外 培 养 的 乳 鼠 心 肌 细 胞 为 模 型, 10 μmol°L^-1 的异丙肾上腺素(β肾上腺素受体激动剂,β-AR)诱导心肌肥大, 观察 1μmol°L^-1的 U50,488H(κ-OR激动剂,U50)对其作用。进一步探索在100 nmol°L^-1ICI118, 551(β₂ -AR 阻断剂)存在情况下,κ-OR的激活对心肌肥大的作用。用 Lowry's 法测心肌细胞的蛋白质含量;用消化分离法,并利用计算机图象分析系统测心肌 细胞的体积;用[³H]leucine 掺入法测定心肌细胞蛋白的合成。结果: 异丙肾上腺素使心肌细胞总蛋白含量、体积、蛋白合成明显增加;1 μmol°L^-1 的 U50, 488H 使 ISO 诱导的心肌细胞总蛋白含量、体积、蛋白合成减少, 这种作用可被选择性 κ-OR阻断剂-nor-BNI(norbinaltorphimine)抑制。在 ICI118, 551 存在的情况下, U50 也能起到减弱 ISO 诱导心肌细胞肥大的作用。结论: U50,488H 通过激活 κ-OR 与β₁ -AR 交互作用抑制 ISO 所诱导的心肌细胞肥大。     

咪唑安定对交感神经元全细胞钠通道电流的抑制作用

目的 研究咪唑安定对交感神经元全细胞钠通道电流的影响,探讨其循环抑制机制。方法 酶消化法急性分离SD大鼠(8~12d)颈上交感神经节细胞,全细胞膜片钳技术记录咪唑安定对钠通道电流的影响。结果 在钳制电压-80mV,刺激电压0mV条件下,临床相关浓度的咪唑安定(0.3μmol·L^-1)使钠通道电流峰值降低19.98%(P<0.05),随浓度增加,抑制作用逐渐增强,50%的钠通道电流峰值受抑制时的咪唑安定浓度(IC₅₀)约为18.35μmol·L^-1;3μmol·L^-1的咪唑安定使钠电流稳态失活曲线产生明显的超极化方向移动(7.75mV,P<0.05),用药前、后50%的通道灭活时的条件脉冲电压(V1/2)分别为:-40.39mV、-48.14mV;3μmol·L^-1的咪唑安定对钠电流的激活曲线几乎无影响。结论 临床相关浓度的咪唑安定对交感神经节全细胞钠通道电流有明显的抑制作用,且主要与钠通道的失活有关。提示咪唑安定的循环抑制作用可能与其直接抑制交感神经有关。     

靶向内皮细胞α7受体的新化合物对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的: 研究靶向内皮细胞α₇ 受体的新化合物对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的影响。方法: 应用鸡胚绒毛尿囊膜模型,通过计数血管的分支点数,观察16种靶向内皮细胞α₇受体的新化合物对于在体血管新生的影响。结果与结论: 化合物13、14在1~100μmol·L^-1浓度范围内,既没有促进血管新生的作用,也没有抑制血管新生的作用,与生理盐水组相比无显著差异,而在浓度为1000μmol·L^-1时,对CAM的血管新生有促进作用。化合物5在浓度为100和1000μmol·L^-1有抑制血管新生的作用,而在浓度为1和10μmol·L^-1时,则对血管新生没有影响。     

花椒毒酚对豚鼠离体心房肌生理特性的影响

目的 研究花椒毒酚对豚鼠离体心肌生理特性的影响。 方法 采用豚鼠离体心房, 测定花椒毒酚对豚鼠心房率, 心肌收缩力, 左心房的兴奋性的影响。 结果 在心肌收缩力的实验中, 给花椒毒酚20,40, 80 μmol·L^-1 15 min后, 左心房的收缩力分别为0.85、0.68、0.48 g, 与对照组比较, 花椒毒酚明显抑制豚鼠左心房肌的收缩力(P <0.05), 并呈浓度依赖性;在对心房率的实验中, 给花椒毒酚20,40 μmol·L^-1, 30 min 后, 离体右心房的频率从90.0 次·min^-1分别下降至60.2、38.7 次·min^-1, 与对照组比较有显著的统计学意义(P <0.05);花椒毒酚对豚鼠左心房的功能性不应期和左心房兴奋性无明显影响。 结论 花椒毒酚可以降低心房自律性、抑制心房收缩力, 其负性变频和负性变力效应可能与其抑制心肌细胞外钙内流和内钙释放有关。     

神经生长因子在培养的大鼠脑皮质神经细胞抑制谷氨酸引起的一氧化氮合酶基因表达及一氧化氮释放

目的 研究神经生长因子(NG F)对谷氨酸引起的原代培养的神经细胞一氧化氮(NO)释放和原生型一氧化氮合酶(cNOS)基因表达的影响。方法 测定神经细胞的生存力来分析NGF的作用。用荧光分析法测定细胞上清液NO 含量,用No rthern blot 杂交法观察cNOSmRNA表达。结果 谷氨酸(0 .5~ 2 .0mmol/L)引起神经元大量死亡,NO 过量释放。NOS 抑制剂L-NAME (100μmol/L)及NGF (100μg/L)显著抑制谷氨酸引起NO 释放及细胞死亡。NGF (50,100μg /L)显著降低谷氨酸引起的cNOSmRNA 的高表达。结论 NO 介导了谷氨酸对皮质神经元的毒性,NG F 通过抑制cNOS 活性,降低NO 释放来保护大脑皮质细胞对抗谷氨酸毒性。     

Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体激动剂逆转1-甲基-4-苯基吡啶离子抑制星形胶质细胞摄取谷氨酸

目的 探讨Ⅱ、Ⅲ 组亲代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors, mGluRs) 激动剂对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP⁺) 抑制星形胶质细胞摄取谷氨酸(Glu) 的影响。 方法 应用同位素标记法测定星形胶质细胞对培养液中[3H]-D, L-谷氨酸的摄取, 应用四氮唑(MTT) 比色法检测星形胶质细胞的活性。 结果 MPP⁺150、200 μmol·L^-1可以明显抑制星形胶质细胞摄取Glu,抑制率达58.3 %和70.1 %, 但并不影响细胞活性;Ⅱ组mGluRs 激动剂(2S, 2' R, 3' R)-2-(2', 3'-dicarboxycyclopropyl) glycine (DCG-IV) 0.1、1、10,100 μmol·L^-1和Ⅲ组mGluRs 激动剂L(+)-2-amino-4-phosphonobutyric acid (L-AP4) 1、10、100 μmol·L^-1可以逆转MPP⁺对星形胶质细胞摄取Glu 的抑制作用。 结论 MPP⁺抑制星形胶质细胞摄取Glu 可能与直接影响谷氨酸转运体(GluTs) 的功能有关, 激活星形胶质细胞上的Ⅱ、Ⅲ组mGluRs 可以通过促进GluTs 摄取Glu、进而降低细胞外液的Glu 浓度而发挥神经保护作用。     

阿芬太尼对再灌注心肌功能的保护作用及其机制

目的: 研究阿芬太尼对缺血再灌注心肌功能的保护作用及其作用机制。方法: 采用 Langendorff离体大鼠心脏模型, 以停灌的方式造成全心缺血25 min, 然后复灌 30 min, 药物于缺血前 10 min给予并持续到复灌末。观察 50 μg·L^-1 和 100 μg·L^-1阿芬太尼及其与纳洛酮和 L-NAME 合用时对缺血前及再灌注期间左心功能的影响, 并测定再灌注末时心肌组织 ATP 和 NOS 的含量。 结果: (1) 在非缺血情况下, 100 μg·L^-1阿芬太尼能使 HR 减慢, 对LVEDP、LVDP、±dp/dt_max 和 CF 无明显影响;(2)50 μg·L^-1 和 100 μg·L^-1 阿芬太尼均能明显促进再灌期间左心功能和冠脉流量的恢复, 且 100 μg·L^-1阿芬太尼比 50 μg·L^-1 阿芬太尼作用更明显;(3)200 μg·L^-1 纳洛酮和 100 μmol·L^-1 L-NAME 均削弱了阿芬太尼对缺血再灌注心肌功能恢复的有利作用。结论: 阿芬太尼对离体大鼠的心肌功能影响轻微且能促进缺血再灌注后心肌功能的恢复, 其作用机制可能与阿片受体和内皮细胞释放的一氧化氮有关。     

地西泮抑制交感神经节细胞钠通道电流的机制

目的 研究地西泮对交感神经节细胞钠通道电流的抑制作用机制。方法 酶消化法急性分离SD 大鼠(7 ~ 10 d) 颈上交感神经节细胞, 全细胞膜片钳技术记录地西泮对钠通道电流的影响。结果 在钳制电压(V_h) -80 mV, 刺激电压(Vt) 0 mV 条件下,0.3 μmol·L^-1 地西泮使钠电流峰值降低14.76 %(P <0.01), 其抑制作用与浓度呈正相关(r =0.99,P <0.01), IC₅₀为6.06 μmol·L^-1;钳制电位不同, 抑制作用也不同(P <0.05), V_h -60 mV时的IC₅₀ 为4.60 μmol·L^-1。3.0 μmol·L^-1的地西泮使电流-电压曲线峰值平均降低48.94 %, 峰值向去极化方向移动约10 mV; 对激活曲线无明显的影响(P >0.05), 用药前、后50 %的通道激活时的去极化电压(V_1/2)分别为:-24.64 mV、-23.75 mV; 3.0 μmol·L^-1的地西泮使稳态失活曲线产生明显的超极化方向移动(20.12 mV, P <0.01), 用药前、后50 %的通道灭活时的条件脉冲电压(V_1/2) 分别为:-64.13 mV、-84.25 mV。结论 地西泮对交感神经节细胞钠通道电流有明显的抑制作用, 且呈浓度及电压依赖性;其抑制作用主要与优先结合钠通道的失活状态而影响钠通道的失活有关。提示交感神经节参与介导地西泮的循环抑制作用。     

新型抗高血压药物盐酸埃他卡林对小动脉的选择性扩张作用及其药理学机制

目的: 研究新型抗高血压药物盐酸埃他卡林(Ipt) 对小动脉的作用特性及其药理学机制。方法: 采用大鼠尾动脉螺旋状血管条和主动脉离体血管环两种组织, 对比观察盐酸埃他卡林对大、小动脉扩张作用的药理学特性, 并且利用膜片钳技术观察盐酸埃他卡林对大鼠尾动脉平滑肌细胞钾电流的影响。结果: Ipt 在10^-7 ~ 10^-3 mol·L^-1 范围内对KCl 预致收缩的大鼠尾动脉血管条产生剂量依赖性舒张反应, 且具有部分内皮依赖性, 但对主动脉离体血管环无明显的舒张反应, 该作用在高血压状态时显著增强, 能被ATP 敏感性钾通道特异性阻断剂格列苯脲阻断, 并且对大鼠尾动脉平滑肌细胞的钾电流具有显著增强作用。结论: 盐酸埃他卡林具有选择性舒张小动脉作用, 具有ATP 敏感性钾通道开放剂的主要药理学特征。     

II,III组亲代谢型谷氨酸受体激动剂逆转1-甲基-4-苯基吡啶离子抑制C6胶质瘤细胞摄取谷氨酸

目的: 探讨II、III组亲代谢型谷氨酸受体(metahotropic glutamate receptors,mGluRs)激动剂对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-metyl-4-phenylpyridihium,MPP⁺)抑制C6胶质瘤细胞摄取谷氨酸(glutamate,Glu)的影响。方法: 应用同位素标记法测定C6胶质瘤细胞对培养液中[³H]-D,L- 谷氨酸的摄取。结果: II组mGlu品激动剂(2S,2' R,3' R)-2-(2',3' -dicarboxycyclopropyl)glyC'ine (DCC-IV)和III组mGluRs激动剂L (+)-2-amino-4-phosphonobutyric acid (L-AP4) 100μmol·L-l可以逆转MPP⁺抑制C6胶质瘤细胞摄取Glu的作用,而II组mGluRs拮抗剂(RS)I-Amino-5-phosphonoinan^-1-carboxylic acid (APICA)和III组mGlu Rs拮抗剂(RS)-α-me出ylserine-0-phosphate(MSOP)可以完全阻断其激动剂的逆转作用。结论: 激活C6胶质瘤细胞上的II、III组mGluRs可以通过促进谷氨酸转运体摄取Glu、进而降低细胞外液的Clu浓度。     

异丙酚、 咪达唑仑抑制交感神经节细胞钠通道电流的联合作用1

目的: 研究异丙酚、咪达唑仑对交感神经节细胞钠通道电流的联合作用, 探讨两者复合诱导时循环稳定的可能机制。 方法: 全细胞膜片钳技术记录急性分离 SD 大鼠(7~ 10 d)颈上交感神经节细胞钠通道电流;等辐射线图法分析异丙酚、 咪达唑仑复合对交感神经节细胞钠通道电流的影响。 结果: 在钳制电压(V_h ) 80 mV、 刺激电压(V_t )0 mV条件下, 临床相关浓度的异丙酚、咪达唑仑分别使钠通道电流峰值降低27.66%(P <0.01)和19.98%(P <0.05),随浓度增加,抑制作用逐渐增强,50%的钠通道电流受抑制时的浓度(IC₅₀)分别为 33.12 μmol·L^-1 和18.35 μmol·L^-1。 1/4、3/4 IC₅₀ 的异丙酚与咪达唑仑合用时的 IC₅₀ 数值点落在理论上的相加等效线的95%可信区间内; 1/2 IC₅₀ 的异丙酚与咪达唑仑合用时的 IC₅₀ 数值点落在理论上的相加等效线的 95%可信区间的左下方。结论: 临床相关浓度的异丙酚、 咪达唑仑对交感神经节细胞钠通道电流有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性; 除等效剂量合用呈协同抑制作用外, 两者复合主要呈相加抑制交感神经节细胞钠通道流; 复合诱导时循环稳定可能与两者催眠作用明显协同导致诱导剂量的降低, 从而减弱对交感神经的抑制有关。