姜黄素对过氧化氢诱导的血管内皮细胞损伤的双重作用

目的: 研究姜黄素(Cur) 对过氧化氢(H₂O₂) 诱导的血管内皮细胞ECV304 的作用及可能机制;方法:胎盘兰计数法分组观察在不同的时间点加入姜黄素后对H₂O₂ 诱导的ECV304 细胞氧化损伤的作用。流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率的变化,试剂盒检测一氧化氮(NO) 、丙二醛(MDA) 含量及超歧化物氧化酶(SOD) 、谷胱甘肽还原酶(GR) 活性的变化。结果: 姜黄素0 ~ 100μmol·L^-1 与H₂O₂500μmol·L^-1同时作用5 h,随姜黄素浓度升高细胞存活率升高;25 ~ 100μmol·L^-1姜黄素预先作用1 h,再换为H₂O₂ 500μmol·L^-1作用4 h,细胞存活率明显下降;H₂O₂500μmol·L^-1 作用4 h,再加入25 ~ 100μmol·L^-1姜黄素作用1 h,细胞存活率也升高。姜黄素对H₂O₂ 诱导的细胞凋亡没有明显的影响,但同时作用组、H₂O₂ 先作用组S 期细胞所占比例升高,姜黄素先作用组S 期细胞所占比例下降。同时作用组、H₂O₂ 先作用组的SOD 、NO 、Gr水平相对升高,MDA 水平下降,姜黄素先作用组的SOD 、NO 、Gr水平相对下降,MDA 水平升高。结论: 姜黄素对H₂O₂诱导的血管内皮细胞ECV304 有双重效应,即有保护效应也有细胞毒效应,与其作用时间点有关。     

阿魏酸乙酯的药理活性及其机制研究

目的: 观察阿魏酸乙酯的药理活性及其机制。方法: 在兔富含血小板血浆(PRP)中加入阿魏酸乙酯和阿魏酸,用ADP诱导血小板的集聚,用TYXN-91 智能血液凝集仪观察血小板聚集率,激光共聚焦显微镜观察血小板细胞聚集时细胞内钙离子的变化情况。制备CCl4 肝损伤小鼠模型,取血清测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性,取肝组织测定丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果: 不同浓度的阿魏酸乙酯,对ADP诱导的血小板聚集抑制百分数均显著高于等浓度的阿魏酸(n=8,P<0.05)。在阿魏酸乙酯作用下ADP诱导的血小板细胞内钙离子荧光强度的变化(ΔFI)为4.6 ±1.7,明显低于对照组ΔFI 值(10.3 ±2.6,n=8,P<0.01)。阿魏酸乙酯可使肝损伤小鼠组织MDA、血清ALT、AST 含量显著低于对照组,而肝组织的SOD 水平显著高于对照组。结论: 阿魏酸乙酯抑制ADP诱导的血小板聚集作用及对CCl4 引起的小鼠急性肝损伤的保护作用均比阿魏酸强。     

阿魏酸对急性肝损伤的保护作用

目的: 研究阿魏酸对D-半乳糖胺/脂多糖诱导小鼠急性肝损伤的保护作用。方法: 60只BALB/c小鼠,随机分成正常对照组、D-半乳糖胺/脂多糖模型组(600 mg·30 μg/kg)、联苯双酯组（200 mg/kg）、阿魏酸高、中、低剂量组（30、15、7.5 mg/kg）,每组10只。连续灌胃给药21 d,每天一次,末次给药2 h后处死小鼠,取新鲜肝组织,眼球采血,测定血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性及肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、丙二醛（MDA）含量;观察小鼠肝组织的病理变化;称量小鼠体质量,计算小鼠肝指数。结果: 与D-半乳糖胺/脂多糖模型组比较,联苯双酯组和阿魏酸高、中、低剂量组小鼠肝脏指数、血清ALT、AST水平不同程度降低(P<0.05）;肝组织中SOD、GSH-Px活性不同程度升高(P<0.05),MDA 水平不同程度降低(P<0.05); 肝脏病理学检查显示,联苯双酯组和阿魏酸高、中、低剂量组均能不同程度地减轻肝细胞变性、坏死。结论: 阿魏酸对D-半乳糖胺/脂多糖诱导的急性肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抗氧化作用相关联。     

卡托普利与黄芪对氧化损伤人脐静脉内皮细胞保护作用的研究

目的: 观察血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI)卡托普利、中药黄芪以及两者合用对损伤HUVEC的保护作用,并探讨其机制。方法: 将HUVEC分为：（1）正常对照组;（2）H₂O₂损伤对照组;（3）卡托普利和黄芪单用低、中、高浓度组;（4）卡托普利与黄芪合用低、中、高浓度组。收集细胞,测定各组细胞活力（MTT）、抗氧化指标（MDA、SOD、NO等）以及VEGF蛋白含量。结果: 除黄芪低浓度组外(P>0.05),正常对照组、卡托普利各浓度组、黄芪中高浓度组及合用组分别与H₂O₂损伤对照组比较,细胞活力（MTT）、SOD活性以及NO含量均显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。卡托普利、黄芪低、中、高浓度联合与单独作用比较,MDA含量降低,MTT ( OD )、SOD活性、NO含量以及VEGF蛋白含量升高,均具有统计学意义(P<0.05)。结论: 卡托普利、黄芪对氧化损伤HUVEC具有保护作用,可提高其活力,增强SOD活性,增加NO和VEGF含量,降低MDA含量,呈现一定的浓度依赖性,而相同浓度的两药联合应用时保护作用更明显。     

拉西地平对同型半胱氨酸诱导的内皮细胞功能损伤的保护作用

目的: 观察拉西地平对同型半胱氨酸（Hcy）抑制人脐静脉内皮细胞新生的拮抗作用。方法: 培养人脐静脉内皮细胞株（HUVEC-12）,MTT法测定不同浓度拉西地平对抗Hcy所致HUVEC-12增殖抑制的作用;流式细胞仪检测细胞增殖周期;小管形成试验测定小管样结构形成;Real-time PCR检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果: 拉西地平呈浓度依赖性地对抗Hcy所致HUVEC-12的增殖抑制（P<0.05）;与空白对照组相比,Hcy损伤组G₀-G₁期细胞数明显增多(P<0.05),S期细胞数明显减少(P<0.05),而加拉西地平1×10^-3、1×10^-2 mmol/L损伤组则趋于正常;小管形成试验中,Hcy损伤模型组小管形成减少,在同时加入的拉西地平浓度为1×10^-3、1×10^-2 mmol/L时能对抗这种效果;拉西地平1×10-³、1×10^-2 mmol/L能明显上调VEGF的表达,与损伤组之间存在统计学差异（P<0.05）。结论: 拉西地平能对抗Hcy所致的人脐静脉内皮细胞增殖抑制以及小管样结构的形成抑制,并上调由Hcy所致内皮细胞的VEGF表达下调。     

桃红四物汤活性成分的筛选及阿魏酸对心肌损伤保护作用的研究

目的：运用系统药理学方法筛选桃红四物汤中的活性成分并通过细胞实验研究其对心肌损伤的保护作用。方法：通过TCMSP数据库和Pharmmaper数据库获取桃红四物汤所有成分及其作用靶点,同时应用Genecards数据库获取心肌损伤相关疾病的潜在靶点。再利用Cytoscape构建并分析成分-疾病交集靶点网络图以及成分贡献度,筛选出桃红四物汤作用于心肌的主要活性成分。进一步应用CoCl2诱导H9c2心肌细胞建立缺氧损伤模型,检测所筛选出的活性成分对细胞活力、心肌酶水平、能量代谢的影响。明确桃红四物汤中的活性成分通过影响能量代谢发挥对心肌细胞损伤的保护作用。结果：筛选发现桃红四物汤包含73个活性成分,其对应340个作用靶点,而心肌损伤相关的疾病靶点为1 544个;根据成分-疾病交集靶点等网络图,筛选出槲皮素、阿魏酸和芍药苷是桃红四物汤中抗心肌损伤的主要活性成分。进一步实验发现阿魏酸能够显著升高CoCl2诱导的H9c2心肌细胞活力（P<0.05）,显著降低CoCl2刺激后心肌酶中肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平以及乳酸脱氢酶（LDH）含量（P<0.01）。阿魏酸能够抑制CoCl2刺激后乳酸（LD）水平的升高,以及三磷酸腺苷（ATP）水平的降低（P<0.01）。 结论：本研究筛选发现桃红四物汤中的阿魏酸是抗心肌损伤的主要活性成分,进一步研究证明阿魏酸可通过抑制心肌损伤后的心肌酶水平和改善能量代谢障碍发挥保护心肌的作用。     

金粉蕨素对脂质过氧化损伤内皮细胞的保护作用

目的 探讨金粉蕨素对脂质过氧化损伤人内皮细胞株(ECV304) 的保护作用及其可能的分子作用机制。 方法 在铜离子诱发的低密度脂蛋白氧化修饰的基础上, 建立内皮细胞(endothelial cell, EC)的脂质过氧化损伤模型;采用MTT 比色法、硝酸还原酶法等方法, 测定不同浓度金粉蕨素(1.0、5.0、10.0 μmol·L^-1) 对EC 生长抑制率、硫代巴比妥反应物(thiobarbituric acid-reactive substances, TBARS)、LDH 及NO 含量的影响。 结果 氧化修饰低密度脂蛋白(oxidatively modified low density lipoprotein, ox-LDL) 作用24 h 后, 对EC 的生长增殖有明显的抑制作用, 细胞培养液中TBARS、LDH 水平显著升高,NO含量降价;而不同浓度金粉蕨素与oxLDL 共同孵育24 h, 呈剂量依赖性对抗oxLDL 对EC 的损伤, 并促进EC 增殖, 同时使培养液中TBARS、LDH 含量降低, NO 含量回升。 结论 脂质过氧化能直接损伤内皮细胞, 金粉蕨素对脂质过氧化损伤的内皮细胞有保护作用。     

血管紧张素-(1-7) 对血管紧张素II致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究

目的:观察血管紧张素-(1-7) [Ang-(1-7)] 对血管紧张素II(Ang II) 致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养的HUVECs随机分为4 组:对照组, AngII 组, Ang-(1-7) 组, AngII+Ang-(1-7) 组。采用分光光度计测定培养的HUVECs乳酸脱氢酶(LDH) 漏出;流式细胞仪检测细胞凋亡;硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs 上清液中一氧化氮(NO) 和内皮素-1(ET-1)的含量。结果:与对照组比较,Ang II(0.1 μmol°L^-1)显著增加HUVECs LDH 漏出(P<0.01)、ET-1 分泌(P<0.01) 和HUVECs 凋亡率(P<0.01), 显著减少NO 的含量(P<0.05);Ang-(1-7) 呈剂量依赖性抑制了Ang II 的促LDH 漏出、ET-1 分泌、增加细胞凋亡等作用, 同时明显促进HUVECs 的NO 释放;单用Ang-(1-7) 对HUVECs 无明显影响。结论:Ang-(1-7)可抑制Ang II 所致的体外培养HUVECs 损伤, 对内皮细胞具有保护作用。     

血管紧张素Ⅱ和缬沙坦对血管内皮细胞AT1/AT2及eNOS 表达的调节作用

目的: 研究缬沙坦在血管内皮细胞中对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ) 受体I 型(AT₁) 和Ⅱ型(AT₂) 、一氧化氮合酶(eNOS) 的表达和一氧化氮(NO) 生成的影响。方法: 使用人脐静脉内皮细胞系ECV-304(HUVECs), 分为对照组、Ang Ⅱ组、缬沙坦组和Ang Ⅱ加缬沙坦组, 作用不同时间, 检测AT₁/AT₂ 的mRNA和蛋白表达、eNOS 的蛋白表达和NO 的生成。结果: 在HUVECs 细胞中未检测到AT₂的蛋白表达,Ang Ⅱ 、缬沙坦均显著抑制细胞中AT₁的mRNA 和蛋白表达, 且缬沙坦呈明显的剂量依赖效应, Ang Ⅱ作用36 h 显著抑制NO 的生成而合用缬沙坦可明显逆转该效应。结论: 在HUVECs 中缬沙坦可通过自身的结合下调AT₁, 并能逆转Ang Ⅱ长时间作用对NO生成的抑制作用, 提示缬沙坦可改善血管内皮细胞的功能。     

血管内皮细胞非神经性乙酰胆碱系统的研究进展

血管内皮细胞作为人体主要的代谢库, 存在ACh, 并伴有ChAT 的表达, 有机阳离子载体(OCTs)参与血管内皮细胞ACh 的转运和释放, 血管内皮细胞AChE 活性的广泛表达可以使非神经性ACh 的活性仅仅局限于它的合成和释放区域, 成为一种细胞因子。mAChR 和nAChR 同非神经性ACh 一样, 广泛存在于血管内皮细胞中, ACh 通过其受体发挥重要的病理生理功能。nAChR 参与血管内皮细胞多种生物活性物质的分泌和释放, 其中α₇ 受体在血管新生中发挥重要作用。非神经性ACh 诱发内皮依赖的血管舒张反应, 一种不同于神经性mAChR 的血管内皮细胞非神经性M 受体在其中发挥重要作用, 并且在动脉粥样硬化和血栓的发生发展过程中起着重要的作用。     

氯苄四氢小檗碱对抗H2O2引起无血清培养的血管内皮细胞凋亡及坏死

目的: 研究氯苄四氢小檗碱对过氧化氢(H₂O₂)引起无血清培养的小牛主动脉血管内皮细胞的凋亡、增殖、坏死的影响。方法: 通过体外细胞培养, 以噻唑兰(MTT) 法测定细胞存活率;用流式细胞术检测细胞DNA 含量及凋亡细胞百分率、增殖率;DNA 琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA 断裂程度。结果: H₂O₂ 诱导无血清培养的内皮细胞凋亡, 氯苄四氢小檗碱可显著降低内皮肌细胞中凋亡细胞百分率, 并抑制其增殖, 也减少凋亡细胞DNA 断裂, 同时也减少其引起的平滑肌细胞坏死。结论: 氯苄四氢小檗碱可对抗H₂O₂ 引起的无血清培养的血管平滑肌细胞凋亡、增殖及坏死。     

黄芪总提物对体外肝细胞损伤的保护作用1

目的 研究黄芪总提物(TEA)对体外肝细胞损伤的保护作用及其机理。方法 采用Ⅳ型胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞进行原代培养,用CCl 4 和H 2O 2体外分别诱导肝细胞损伤,检测肝细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHpx)活性以及培养上清液中天门冬氨酸转换酶(AS T)和/或丙氨酸氨基转换酶(ALT)水平。结果 (1)TEA(5~80 mg·L^-1)可明显降低或恢复由CCl₄升高的肝细胞MDA 含量及肝细胞培养上清液中AST水平,还可使CCl₄降低的肝细胞GSH 含量和GSHpx 活性升高或恢复;(2)TEA(5~80 mg·L^-1)可使H₂O₂升高的肝细胞培养上清液中ALT水平和肝细胞MDA含量明显降低或恢复,还可使H₂O₂降低的肝细胞GHS含量和GSHpx活性明显升高或恢复。结论 提示TEA 对体外肝细胞损伤有直接保护作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。     

新型磺酰脲类化合物G004对血管内皮细胞的保护作用

目的: 探讨新型磺酰脲类化合物G004对血管内皮细胞的保护作用。方法: 采用H2O₂造ECV304细胞氧化损伤模型,考察C004对细胞活力、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及G004对大鼠血浆中活性氧(ROS)的影响;皮下注射盐酸肾上腺素结合冰泳复制大鼠血管内皮细胞损伤模型,检测G004对血小板聚集率、组织纤溶酶原激活剂(t-PA)、组织纤溶酶原激活抑制剂(PAI)、F-6-酮-前列腺素F_1a(6-K-PGF_1a)、 血栓烷B₂(TXB₂)分泌的影响;股静脉注射组胺复制大鼠血管内皮损伤模型,考察G004对动脉璧摄取伊文思蓝及血浆GMP140含量的影响,结果:G004可明显改善氧化损伤的ECV304细胞形态学变化,提高活细胞比率,降低MDA含量,提高SOD的活力,降低大鼠血浆ROS 的含量;G004升高肾上腺素加冰泳刺激的大鼠血桨6-keto-PGF_1a、t-PA含量,而且降低TXB₂、PAI水平以及血小板聚集率;G004降低组胺所致内皮损伤大鼠的动脉壁伊文思蓝摄取量、降低血浆CMP140的含量,并呈剂量依赖性。结论: G004 清除氧自由基,保护血管内皮的完整性,调节受损内皮细胞分泌TXA₂、PGI₂、t-PA、PAI,抑制GMP140的升高,G004对血管内皮具有较好的保护作用、     

丁苯酞对S-亚硝基化谷胱甘肽诱导脑微血管内皮细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:构建S-亚硝基化谷胱甘肽（S-nitrosoglutathione,GSNO）诱导脑微血管内皮细胞的损伤模型,探讨丁苯酞（Butylphthalide,dL-NBP）对脑微血管内皮细胞的保护作用与可能的分子调控机制。方法:建立损伤bEnd.3细胞模型,以MTT法检测细胞存活率。DCFH染色检测细胞活性氧水平。Western blot法检测p-ERK,ERK,cleaved caspase 9,pro-caspase 9,cleaved caspase 3,pro-caspase 3蛋白表达。RT-PCR法检测糖皮质激素受体（GR）、SGK、MKP-1基因表达水平。结果:dL-NBP（5,10,20 μmol/L）可减少GSNO引起的脑微血管内皮细胞损伤,提高细胞存活率,减少ROS发生。此外,dL-NBP可激活SGK和MKP-1转录水平的增加,上调ERK磷酸化,抑制cleaved caspase 9,cleaved caspase 3蛋白上调。结论:dL-NBP对GSNO诱导的脑微血管内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制与激活PR活性下游基因SGK和MKP-1,上调ERK磷酸化水平,抑制caspase级联反应密切相关。     

绞股蓝总皂甙对氧化修饰低密度脂蛋白损伤小牛主动脉内皮细胞的防治作用

目的 探讨绞股蓝总皂甙(GYP)对氧化修饰低密度脂蛋白(oxidatively modified low density lipoprotein, oxLDL)损伤小牛主动脉内皮细胞的防治作用及可能机制。 方法 在体外培养的小牛主动脉内皮细胞(bovine aortic endothelial cell, BAEC)中加入oxLDL(终浓度为0.1 g pr·L^-1)及GYP 低、中、高剂量组(5.0, 10.0, 20.0 mg·L^-1), 培养24 h 后, 采用细胞毒试验、丙二醛(MDA)测定及细胞计数等方法, 分别对其贴壁细胞及培养液进行检测。 结果 ①细胞毒试验发现, oxLDL 对BAEC 的生长增殖有明显的抑制作用(20.63 %), GYP 组(10.0, 20.0 mg ·L^-1)为9.14 %和6.56 %(P <0.01);②加oxLDL 组和GYP组BAEC 粘附的HL60 细胞数明显多于对照组(P <0.01);③MDA 检测发现oxLDL 促进BAEC 脂质过氧化物生成, 并高于GYP 组和对照组(P <0.01)。 结论 绞股蓝总皂甙具有对氧化修饰低密度脂蛋白损伤小牛主动脉内皮细胞的防治作用。     

普罗布考对受损内皮细胞增殖和功能修复的促进作用1

目的 研究普罗布考对受损内皮细胞增殖和再生内皮细胞功能修复的影响。 方法 分别采用MTT 比色法和PCNA 免疫组化法测定体外培养的人脐静脉内皮细胞所处增殖状态;以兔胸主动脉血管环对乙酰胆碱舒张反应和内皮细胞分泌NO、PGI2 的能力评价内皮细胞功能状况。 结果 LPC 作用24 h可导致内皮细胞增殖显著受抑及分泌NO、PGI2 功能受损, 不同剂量普罗布考(20, 40, 80 μmol·L^-1) 可促进LPC 损伤的内皮细胞增殖(55.5 %, 59.3 %,72.2 % vs 31.7 %, P <0.01), 同时提高血管成型术后兔胸主动脉血管环内皮依赖性舒张功能(66.63 %vs 25.95 %, P <0.01), 并修复LPC 损伤的内皮细胞分泌NO、PGI2 的功能(P <0.01)。 结论 普罗布考可促进受损内皮细胞增殖和再生内皮细胞功能修复。     

慢性低O2高CO2大鼠血管内皮生长因子表达及参一胶囊的影响

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF) 在低氧性肺动脉高压形成中的意义及参一胶囊对其影响。 方法 采用ELISA 法、透射电镜、原位杂交技术等方法, 观察正常对照组、低O₂ 高CO₂ 4 周组、低O₂ 高CO₂ 4 周+参一胶囊组大鼠肺动脉平均压(mPAP)、右心室重量比(RV/LV +S)、血清和肺组织的VEGF的含量、肺细小动脉的超微结构、肺组织VEGFmRNA表达的变化。 结果 低O₂ 高CO₂ 组大鼠的mPAP、RV/LV +S、血清和肺组织的VEGF 的含量明显高于正常对照组(P <0.01)。低O₂ 高CO₂ 4 周+参一胶囊组大鼠mPAP、RV/LV +S、血清VEGF 显著低于低O2 高CO₂ 组(P <0.01), 肺组织的VEGF 的含量也低于低O₂ 高CO₂ 组(P <0.05)。低O₂ 高CO₂ 组大鼠肺细小动脉中膜平滑肌细胞明显增生、胶原纤维较正常对照组增多, 低O₂ 高CO₂ 4 周+参一胶囊组较低O₂ 高CO₂ 组则明显减轻。原位杂交显示低O₂ 高CO₂ 组大鼠肺细小动脉VEGFmRNA 较正常对照组明显增加(P <0.01), 而低O₂ 高CO₂ 4周+参一胶囊组与低O₂ 高CO₂ 组比较, 则明显降低(P <0.05)。 结论 VEGF 参与了慢性低氧性肺动脉高压的形成, 参一胶囊可通过抑制VEGF 的作用而有效地降低肺动脉高压。