牛膝炮制品对骨质疏松斑马鱼的影响

为了构建斑马鱼骨质疏松模型,研究牛膝生、盐炙品对骨质疏松症的治疗作用,并探讨其作用机制。采用泼尼松龙诱导斑马鱼骨质疏松模型,加入生、盐牛膝水提液干预培养,利用茜素红染色法对干预后的斑马鱼骨质疏松模型骨矿化量改善情况进行定量分析,采用Western Blot方法分析不同组别斑马鱼TGF-β/Smad信号通路蛋白水平变化。结果表明:牛膝生、盐炙品均能显著提高斑马鱼骨质疏松模型的骨矿化量,显著上调TGF-β1、p-Smad 2/3及Smad 4蛋白表达水平,下调Smad 7蛋白表达水平,盐牛膝的调控力度大于生牛膝。因此生、盐牛膝发挥抗骨质疏松作用机制可能与其调控TGF-β/Smad信号通路有关,盐牛膝的治疗效果优于生牛膝。     

Wnt5a信号通路调控NRTI引起的小脑神经炎症的研究

分别用NRTI类药物AZT(100mg/kg)和3TC(50mg/kg)对C57BL/6小鼠进行2、5、14d的处理,并于药物处理结束时采集小鼠小脑。通过Western blotting检测两种药物处理不同时间后小脑中炎症因子IL-1β,TNF-α和IL-6的表达水平,观察到炎症因子在小脑中都显著性增加。然后通过HE染色研究NRTI作用5d对小脑病变的影响,组织形态学分析表明,NRTI药物作用5d未引起小脑发生显著病变。通过Western blotting检测到小脑中NRTI可明显上调Wnt5a,提示NRTI可能激活Wnt5a,再利用Wnt5a的特异性拮抗剂BOX5来抑制Wnt5a,BOX5可以显著性降低NRTI诱导的炎症因子上调。因此,Wnt5a信号通路参与调控NRTI引起的小脑神经炎症。     

携带socs3基因的溶瘤腺病毒的构建及体外抗肿瘤活性的研究

SOCS3（suppressor of cytokine signaling 3）是JAK/STAT信号通路的负调控因子,SOCS3间接调控的STAT3磷酸化与肿瘤的发生密切相关。本试验构建携带socs3的溶瘤腺病毒AdCN305-SOCS3,在细胞水平研究socs3对肿瘤的抑制作用,并评估AdCN305-SOCS3的抗肿瘤效果。该病毒感染多种肿瘤细胞,均能特异性扩增,同时表达功能正常的SOCS3蛋白,从而抑制STAT3磷酸化,引起肿瘤细胞的明显凋亡。对AdCN305-SOCS3的研究,证实SOCS3蛋白和AdCN305-SOCS3病毒都具有抗肿瘤的功能,在肿瘤的靶向基因治疗研究中具有广阔的应用前景。     

携带socs3基因的溶瘤腺病毒的构建及体外抗肿瘤活性的研究

SOCS3(suppressor of cytokine signaling 3)是JAK/STAT信号通路的负调控因子,SOCS3间接调控的STAT3磷酸化与肿瘤的发生密切相关.本试验构建携带socs3的溶瘤腺病毒AdCN305-SOCS3,在细胞水平研究socs3对肿瘤的抑制作用,并评估AdCN305-SOCS3的抗肿瘤效果.该病毒感染多种肿瘤细胞,均能特异性扩增,同时表达功能正常的SOCS3蛋白,从而抑制STAT3磷酸化,引起肿瘤细胞的明显凋亡.对AdCN305-SOCS3的研究,证实SOCS3蛋白和AdCN305-SOCS3病毒都具有抗肿瘤的功能,在肿瘤的靶向基因治疗研究中具有广阔的应用前景.     

基于网络药理学技术研究黄芪?枸杞子药对治疗溃疡性结肠炎的作用机制

黄芪?枸杞子药对治疗溃疡性结肠炎的临床疗效确切,然而作用机制不明. 采用网络药理学技术研究黄芪?枸杞子配伍抗溃疡性结肠炎的潜在作用机制. 利用整合药理学平台、String数据库、David 数据库等系统检索中药化学成分和候选靶标,通过分析药物和疾病蛋白靶标互作关系,筛选关键靶标并进行基因GO功能和KEGG通路富集分析,构建“中药?核心成分?关键靶标?主要通路”多维调控网络. 结果表明,黄芪?枸杞子可能通过作用于前列腺素 G/H 合成酶 2 (PTGS2) 等蛋白靶标,参与核转录因子(NF-κВ)、肿瘤坏死因子 (TNF) 等多个炎症和免疫相关信号通路,发挥抗溃疡性结肠炎作用. 研究结果为系统阐明黄芪?枸杞子药对治疗溃疡性结肠炎的作用机制提供参考.     

β-磷酸三钙与透明质酸钠复合交联支架材料的生物相容性研究

制备了透明质酸钠与β-磷酸三钙复合材料,对复合材料进行化学交联改性,将交联与未交联的HA/β-TCP复合支架与骨髓间充质干细胞共培养,研究支架材料调控BMSCs增殖或凋亡的过程,评价线粒体应激信号通路在调控过程中的作用。通过对样品细胞毒性的CCK-8试剂盒测试、细胞黏附实验、细胞Hoechst/PI染色实验、细胞凋亡率的流式细胞仪检测、以及线粒体机制Bax与Bcl-2相关蛋白表达的Western Blot检测,发现交联HA/β-TCP复合支架材料与未交联材料相比,生物相容性更好,能从线粒体机制更有效地抑制细胞凋亡。HA/β-TCP支架材料有望在软骨组织工程中得到广泛应用。     

戊型肝炎病毒感染调控TLR3信号通路的研究

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是导致急性戊肝的主要原因.通过建立基因IV型HEV感染A549细胞模型,研究病毒感染后TLR3信号通路相关因子表达的变化.病毒感染A549细胞后通过实时荧光定量PCR检测IFN-β的mRNA表达量,Western blot分析磷酸化IRF3(pIRF3)和IKKε蛋白表达水平的变化.结果表明:HEV感染A549细胞后细胞内IFN-β的相对表达水平显著下降,TLR3信号通路介导的pIRF3及IKKε蛋白在病毒感染后表达量显著下降.基因Ⅳ型HEV能够抑制TLR3信号通路介导的IRF3的磷酸化及IKKε蛋白的表达,从而抑制了IFN-β的表达,为进一步研究HEV复制机制和致病机理奠定基础.     

荜茇酰胺通过PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导肺癌细胞凋亡

使用MTT比色分析法、台盼蓝染料排除测定法、流式细胞分析技术和蛋白免疫印迹法,探讨了PIP对肺癌细胞的抗肿瘤活性及分子机制。研究结果显示,用PIP对人肺癌细胞株(A549和NCI-H23)进行处理,显著抑制细胞增殖并诱导凋亡。研究还发现PIP显著诱导A549和NCI-H23细胞凋亡,并与Bcl-2、Bcl-xl和survivin的蛋白水平降低及活化型caspase-3的水平升高有关。同时,PIP也可抑制磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)的表达以及Akt和mTOR信号蛋白的磷酸化。研究结果表明:PIP不仅可以抑制肿瘤细胞增殖,而且可通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导肿瘤细胞凋亡,提示荜茇酰胺可能是一种潜在的抗肺癌天然产物。     

亲和沉降及质谱法分离和鉴定与EGFR 3'UTR结合的蛋白质

随着后基因组学研究的逐步深入,非编码RNA成为生物学研究的热点之一,其中对mRNA非翻译区的功能研究也逐渐广泛。mRNA非翻译区(UTR)的调控序列与一些蛋白质特异结合,对其自身mRNA命运进行调控。表皮生长因子受体(EGFR)是细胞信号转导的关键因子,其特异酪氨酸残基发生磷酸化,可招募诸如Shc、Grb2、磷脂酶Cγ和Src等信号蛋白,进而激活下游信号通路,研究证实EGFR与一些癌症的发生相关,因此探讨EGFR非翻译区对其mRNA的调控机制就显得尤为重要。运用亲和沉降及质谱,从HeLa细胞中分离到3种蛋白质与EGFR 3'UTR相结合:Ilf3、hnRNP A1和hnRNP A2/B1。这些蛋白质均为RNA结合蛋白并参与mRNA代谢。这为研究EGFR 3'UTR的调控机制提供了依据。     

TRAIL死亡受体通路蛋白抗肿瘤小分子多肽的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡优先选择肿瘤细胞,而对正常细胞低毒性,具有潜在的抗肿瘤药物开发价值.随着肿瘤治疗研究的不断深入,小分子多肽物因分子量小、易穿过细胞膜且稳定性较强,已成为肿瘤治疗药物开发研究的一个热点.本文基于TRAIL死亡受体通路蛋白抗肿瘤小分子多肽物的研究及应用进行简要概述.     

RNA结合蛋白Vigilin在翻译水平上对雌激素受体ER—beta的调控研究

Vigilin是一个由14个连续的KH结构域组成的RNA结合蛋白。它可以通过与mRNA结合调控mR—NA的翻译后表达水平,并能够结合脂蛋白。本实验室此前的实验中发现Vigilin参与了对雌激素信号传导通路的调控,为详细研究其调控机制,文章通过凝胶阻滞实验证明了Vigilin能在体外结合于雌激素受体3’非翻译区（ER-beta3’UTR）。借助双荧光素酶报告基因实验发现,高表达Vigilin可以提高雌激素信号通路中的重要受体ER-beta的翻译效率。利用激光共聚焦显微镜和荧光蛋白定位实验,发现Vigilin在细胞内大量定位于p-body中。通过上述实验证明了Vigilin能够通过结合ER-beta3’UTR调控ER-beta的表达量,参与了细胞内雌激素信号传导通路。由于ER-beta是雌激素信号传导中非常重要的受体,因此该研究具有重要的意义。     

肿瘤免疫微环境中免疫细胞间通讯景观探究

肿瘤免疫微环境(TIME)内细胞间通讯为肿瘤发生发展提供了重要的微环境,但目前单细胞相关研究多关注免疫细胞与肿瘤之间的通讯,对不同免疫细胞间的信号交流研究较少。由此收集11套CD45+细胞的单细胞测序数据,推测出TIME中不同免疫细胞间的信号通讯网络。结果发现,肿瘤样本中免疫细胞间的交流更加频繁与密切,进一步分析得到12条与肿瘤相关的差异信号通讯关系,主要包括各种趋化因子?趋化因子受体信号、白介素?白介素受体信号以及Notch通路信号。这些通讯信号关系及其下游转录因子与肿瘤发生发展密切相关。此外,发现部分关键转录因子与各种肿瘤的预后显著相关。最后,通过构建TIME中不同免疫细胞间存在的细胞间通讯全局景观,挖掘出肿瘤中特异及缺失的免疫细胞间通讯关系,为理解TIME中免疫系统调控及肿瘤发展机制提供了线索,也为肿瘤的临床诊疗研究提供了新的设计思路。     

基于网络药理学和分子对接技术的百合地黄汤抗肝癌作用机制研究

中医药是我国肝癌患者综合治疗方案的重要组成部分之一,本文基于网络药理学和分子对接技术探讨经典名方百合地黄汤治疗肝癌的作用机制。通过TCMSP数据库和文献挖掘百合地黄汤的化学成分,借助SwissTargetPrediction数据库预测其作用靶点,经Uniprot数据库将靶点蛋白名称标准化。从OMIM、GeneCards数据库获取肝癌的有效治疗靶点。取百合地黄汤作用靶点与肝癌靶点制作韦恩图,运用String数据库结合Cytoscape3.7.2软件对百合地黄汤抗肝癌的潜在作用靶点作蛋白相互作用网络,构建“药物−化学成分−作用靶点”和“药物−活性成分−抗肝癌靶点”网络图。利用David平台对百合地黄汤抗肝癌潜在作用靶点进行GO(基因本体)和KEGG(京都基因与基因组)富集分析。运用Autodock Vina软件对百合地黄汤的主要活性成分与核心作用靶点进行分子对接验证。收集得到百合地黄汤131个化学成分,主要活性成分有山奈酚、百合皂苷、百合苷C等,共得到58个百合地黄汤抗肝癌靶点。蛋白−蛋白相互作用(Protein-Protein Interaction, PPI)网络计算出主要有STAT3、CASP3、VEGFA等关键靶点。富集分析得到91条信号通路,涉及癌症蛋白聚糖、VEGF信号通路、PI3K-Akt信号通路等。分子对接结果表明百合地黄汤与肝癌蛋白靶点具有较好的亲和性。百合地黄汤通过多成分、多靶点、多通路抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡来治疗肝癌。     

环氧化酶-2/5-脂氧合酶双效抑制剂的抗炎研究进展

对化学合成类以及天然产物类COX-2/5-LOX双效抑制剂在炎症方面的研究进展进行综述.COX-2/5-LOX双效抑制剂从酶活性和酶生成量两方面对COX-2/5-LOX进行抑制.研究报道表明,目前进入临床阶段的化学合成类化合物二叔丁基苯酚类、吡咯里嗪衍生物以及修饰型NSAIDs类化合物通过抑制COX-2/5-LOX活性从酶水平上发挥抗炎作用.天然产物提取液及单体化合物(黄酮类、多酚类、生物碱类、有机酸、萜类等化合物)既可通过调节NF-κB信号通路、p38MAPK信号通路抑制COX-2/5-LOX蛋白表达,减少COX-2/5-LOX生成量,又可通过氧自由基影响COX-2/5-LOX活性,对COX-2/5-LOX从基因水平和酶水平两方面进行抑制.     

作用于酪氨酸激酶的抗肿瘤小分子抑制剂γ-氟代Goniothalamin类似物的设计与合成

蛋白酪氨酸激酶在肿瘤细胞的增殖、分化、转移、侵蚀等信号通路中具有重要的调控功能,已成为肿瘤靶向治疗的重点研究对象。基于靶点导向原则和构效关系研究基础,以抗肿瘤活性天然产物Goniothalamin为母体化合物,修饰合成了一系列γ,γ-二氟取代Goniothalamin类似物（4a-4i,6a-6i）和γ-单氟取代Goniothalamin类似物（7a,7b,7h）。γ,γ-二氟取代的Goniothalamin类似物可从具有光学活性的二氟亚甲基取代的锡试剂出发,经Stille偶联和1,5-氧化关环两步关键反应合成。γ-单氟取代Goniothalamin类似物则经Sharpless不对称环氧化、环氧开环亲核氟化、Lindlar氢化、HWE反应和1,5-氧化关环等反应制备。对所合成的这两类Goniothalamin含氟类似物进行了体外肿瘤细胞抑制活性和酪氨酸激酶抑制活性评估研究,结果表明在Goniothalamin分子的γ位引入一个氟原子进行修饰是较为合理的修饰方式。     

基于网络药理学探讨水红花子抗肝硬化机制

为进一步研究水红花子的药用物质基础,利用网络药理学和分子对接技术探讨了水红花子治疗肝硬化的作用机制.首先利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、人类基因数据库(GeneCards)、蛋白质-蛋白质相互作用网络功能富集分析平台(STRING)建立了水红花子有效成分-肝硬化的靶点基因网络,然后利用基因本体(gene ontology,GO)、京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)富集分析和分子对接手段研究了水红花子的抗肝硬化机制.研究结果显示：水红花子治疗肝硬化的成分可能是具有保肝功能的β-谷甾醇、山奈酚、儿茶素、圣草酚、槲皮素,作用靶点可能为IL-6、VEGFA、AKT1、TP53、CXCL8、TNF;水红花子参与抗肝硬化的生物学过程可能有凋亡负调控、程序性细胞死亡负调控、细胞增殖调控等,相关信号通路可能包括癌症通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用、Toll样受体信号通路等;槲皮素、山奈酚与AKT1的结合能和呋塞米与AKT1的结合能相似.该研究结果可为后续研究水红花子抗肝硬化的机制提供理论依据.     

白藜芦醇抗肿瘤作用机制的研究现状

白藜芦醇是一种天然多酚类化合物,存在于葡萄、花生等多种植物中,是预防肿瘤的绿色抗癌药物。白藜芦醇可通过抗氧化、调节细胞的氧化还原代谢、干扰细胞自噬和降低细胞的侵袭力等途径发挥抗肿瘤作用。近年来,白藜芦醇在抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡及抑制血管生成等方面越来越受到临床关注,其不仅可以通过胞内胞外途径和周期阻滞诱导肿瘤细胞凋亡,还可以通过调节细胞体内相关信号靶点来抑制肿瘤的迁移。本文就白藜芦醇抗肿瘤作用机制的研究进展进行综述。     

E2弱化双酚A雌激素活性机制

前期研究发现天然雌激素E2可以弱化一种常见雌激素类污染物双酚A的活性,为探讨这一现象的机制,利用人体乳腺癌细胞MCF7,从细胞周期、雌激素受体途径、MAPKs信号途径进行实验．结果表明:E2可诱导DNA合成期细胞显著增高,抑制受体蛋白表达,提高ERK蛋白的表达,进而激活多种转录因子;双酚A显著抑制受体蛋白表达,对MAPKs信号通路基本没有影响,可同时提高DNA分裂期与间歇期细胞比例;两者联合后活化了受体途径和ERK途径,促进Cfos的转录表达,激活cyclin D1蛋白,增加S期及G2期细胞比例．E2弱化双酚A的可能机制为Cmyc蛋白表达下降．     

基于网络药理学探讨绞股蓝治疗阿霉素心肌病的药效物质基础和分子机制

采用中药网络药理学方法探讨绞股蓝治疗阿霉素心肌病的药效物质基础和潜在作用机制.通过检索TC‐MSP、SymMap、TCMID数据库平台获取绞股蓝的候选药效成分,并借助Uniprot数据库获取候选药效成分的潜在作用靶点;采用Cytoscape 3.8.1软件构建有效成分-靶点蛋白相互作用网络图;运用Genecards、OMIM数据库筛选阿霉素心肌病的疾病相关靶点,结合String数据库绘制药物-疾病基因的蛋白互作网络;采用Metascape数据库对交集靶标进行基因功能分析(GO)及KEGG通路富集分析,对绞股蓝改善阿霉素心肌病的作用机制作出合理推测.共筛选出绞股蓝有效活性成分26个,包括槲皮素、谷甾醇、绞股蓝皂苷等,活性成分发挥作用的潜在靶标有89个,主要有TNF-α、TP53、AKT1、IL-6等;靶点参与的功能主要有氧化应激、凋亡调控、炎症因子刺激反应、蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶活性调节等,主要富集通路有p53、TNF-α、PI3K-Akt、AMPK等信号通路,以及线粒体自噬和细胞钙调控通路等.结果表明,绞股蓝中槲皮素、谷甾醇、绞股蓝皂苷等有效活性成分能够通过调节p53、TNF-α、Akt、AMPK等信号分子,参与细胞程序性死亡、氧化应激和线粒体稳态调控,从而达到防治阿霉素心肌病的目的.     

金刚纂二萜成分抗炎活性研究

研究药用植物金刚纂中二萜化合物的抗炎活性.运用脂多糖(LPS)体外诱导的巨噬细胞炎症模型,干燥茎的75%丙酮水提取物显示对NO产生具有明显抑制作用,对活性部位分离纯化得到的19个二萜类化合物进行抗炎活性研究.结果显示:该19个化合物对RAW264. 7细胞活力没有影响,化合物1,4,18明显抑制LPS激活的巨噬细胞中NO的产生,并且呈量-效依赖关系(P 0. 05),其IC50值分别为:22.7、37.1和19.0μmol/L;此外,这三个化合物能够抑制炎症因子IL-6和TNF-α的分泌以及iNOS和COX-2蛋白的表达,表现出明显的抗炎活性.进一步研究发现,这三个化合物不同程度抑制p38MAPK的磷酸化,其抗炎活性可能是通过抑制MAPKs信号通路发挥作用.