花椒籽仁抗氧化肽水解用酶的筛选研究

采用Protamex、Alcalase2.4L、Flavourzyme500MG、Neutrase0.5L、木瓜蛋白酶5种酶制剂水解花椒籽仁蛋白制备抗氧化肽,以水解度(DH)、多肽含量和水解产物的总抗氧化能力(TAC)、DPPH自由基清除能力、在亚油酸体系中的抗氧化性为指标对水解过程进行了分析,结果表明,Alcalase2.4L蛋白酶是制备花椒籽仁抗氧化肽的最适水解酶,其水解物的水解度(DH)为20.42%,多肽含量为21.83mg/mL,总抗氧化能力(TAC)和DPPH自由基清除能力分别为0.44mmol/L、65.47%,此外在亚油酸体系中具有一定的抗氧化性。     

酶解黄秋葵籽蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

利用制备的黄秋葵籽粕蛋白为原料,采用酶解法以获得具有抗氧化活性的多肽,为黄秋葵籽粕的精深加工提供理论依据。首先进行蛋白酶的筛选,选取最佳的碱性蛋白酶对碱溶酸沉法制备的黄秋葵籽粕蛋白进行酶解;以水解度和DPPH自由基清除力为指标进行单因素试验,分别考察底物浓度、酶解时间、加酶量、pH值和酶解温度对制备抗氧化活性肽的影响;然后应用响应面法,以DPPH自由基清除力为响应值,对黄秋葵籽粕蛋白抗氧化肽的制备工艺进行优化,确定的最佳制备工艺参数为:底物浓度0.7%、酶解时间3.8 h、酶用量6%、酶解温度50℃和pH 8.0。抗氧化试验结果表明,制备的抗氧化肽对DPPH自由基的清除率为50.83%。     

酶解牡丹籽粕蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

利用制备的牡丹籽粕蛋白为原料,对其进行酶解以获得具有抗氧化活性的多肽,为牡丹籽粕的精深加工提供理论依据。首先进行蛋白酶的筛选,选取最佳的碱性蛋白酶对碱溶酸沉法制备的牡丹籽饼粕蛋白进行酶解;以水解度和DPPH自由基清除力为指标进行单因素实验,分别考察底物浓度、酶解时间、加酶量、pH和酶解温度对制备抗氧化活性肽的影响;以DPPH自由基清除力为响应值,对牡丹籽粕蛋白抗氧化肽的制备工艺进行响应面法优化,确定的最佳制备工艺为:底物浓度0.7%、酶解时间2 h、酶用量4.60%、酶解温度56℃和pH8.0。抗氧化实验结果表明,制备的抗氧化肽对DPPH自由基的清除率为52.49%;经17种水解氨基酸组成分析证明,必需氨基酸占水解氨基酸总量的32.24%,具有较高的营养价值。     

酶解制备菜籽蛋白肽条件的优化

选用碱性蛋白酶Alcalase对菜籽蛋白进行水解。在单因素试验研究不同处理条件对菜籽蛋白水解度和菜籽蛋白肽得率的影响的基础上,建立单因素对菜籽蛋白肽水解度影响的数学模型,通过响应面分析对酶解条件进行优化。确定菜籽蛋白酶解最佳工艺条件为:底物质量分数为4.49%、pH8.45、温度55℃、酶解时间180min、加酶量5000U/g pro,在该优化条件下,菜籽蛋白水解度理论值可达15.00%,实际值为14.71%。     

酶法制备花椒籽蛋白铁结合肽的工艺优化

采用不同的蛋白酶水解花椒籽蛋白,以花椒籽蛋白质铁结合肽水解度和铁结合能力为指标,筛选出制备花椒籽蛋白铁结合肽的最佳蛋白酶,并利用最佳蛋白酶酶解花椒籽蛋白制备铁结合肽。在单因素试验的基础上,应用BoxBehnken方法进行四因素三水平的试验设计,考察底物浓度、酶添加量、pH值、酶解温度和酶解时间对铁结合能力的影响,优化花椒籽蛋白制备铁结合肽工艺。结果表明:最佳蛋白酶为碱性蛋白酶,最佳工艺条件为:底物浓度27.70 mg/mL、酶添加量0.09mg/mL、酶解pH 10.47、酶解温度65℃、酶解时间2.5h,该条件下酶解产生水解液的水解度为7.23%,铁结合能力为585.66mg EDTA/g·蛋白质。     

Alcalase碱性蛋白酶酶解蛋清制备抗氧化活性肽

研究Alcalase碱性蛋白酶酶解鸡蛋蛋清制备小分子活性肽.确定酶解的最佳工艺是:酶解pH值为9.0,酶解温度为70℃,底物浓度[S]为4.5%,酶加入量[E]/[S]为6%.水解时间4 h,水解度达到33%.采用化学发光法研究蛋清肽混合物的抗氧化性,结果表明,不同浓度和水解度的蛋清肽混合物均具有清除活性氧和抗脂质氧化的能力.随着蛋清肽混合物浓度增大,清除能力增大,抗氧化性增大.不同水解度的蛋清肽混合物,其清除活性氧和抗脂质氧化能力稍有不同,但区别不大.用葡聚糖凝胶SephadexG-15测定水解物分子量分布,结果表明水解产物中的主要成分是分子量集中在1300u的寡肽.     

Alcalase蛋白酶水解法制备山核桃肽的研究

以脱脂山核桃渣为原料,利用Alcalase 蛋白酶对山核桃蛋白进行水解制备山核桃活性肽,以水解度(DH)表征其反应程度,确定其最佳水解条件为：温度55℃,pH9.0,底物浓度8%,酶质量分数6%,水解时间2.0h。在此条件下水解度(DH)为76.16%。     

响应面法优化酶解花椒籽蛋白制备降血压肽工艺

利用响应面法优化酶解花椒籽蛋白制备降血压肽的工艺条件。采用不同蛋白酶水解花椒籽蛋白,以酶解物对血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制率为指标,筛选出制备花椒籽蛋白降血压肽的最佳蛋白酶。在单因素试验基础上,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,考察酶解时间、加酶量、酶解温度和pH值对血管紧张素转换酶抑制率的影响。结果表明：回归模型能较好地反映各因素水平与响应值之间的关系,并获得酶解花椒籽蛋白制备降血压肽的最佳工艺条件为：底物质量浓度3 g/100 mL、酶解时间4.9 h、加酶量10 200 U/g、酶解温度37.4 ℃、pH 6.9,在此条件下,所得酶解产物的ACE抑制率为68.00%。     

酶法制备汉麻籽蛋白抗氧化肽

采用不同蛋白酶酶解汉麻籽蛋白,确定Alcalase 2.4L碱性蛋白酶是酶解汉麻籽蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解汉麻籽蛋白的优化条件为:底物浓度50 mg/mL、水解时间2 h、温度50℃、加酶量2.2%、pH 9.4。优化酶解条件下,水解度约为20%,10 mg/ mL酶解产物的DPPH自由基清除率为82.65%,显示出较好的抗氧化活性。     

双酶水解玉米醇溶蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

为了制备抗氧化活性肽,利用Alcalase碱性蛋白酶和中性蛋白酶分步酶解玉米醇溶蛋白。在单因素的基础上,以1.1-二苯基苦基苯肼（DPPH·）自由基清除率、羟基自由基清除率和水解度（DH）为响应值,采用响应面（RSM）中心组合实验,选取Alcalase碱性蛋白酶加酶量、中性蛋白酶与Alcalase碱性蛋白酶活力之比、底物浓度为自变量,探讨最佳酶解工艺条件。采用Design-Expert软件,通过响应面优化确定修正后各因素的最佳工艺条件为:Alcalase碱性蛋白酶加酶量12880 U/（g底物）、中性蛋白酶与Alcalase碱性蛋白酶活力之比为1∶4,底物浓度为3.4%。在此修正条件下,DPPH·自由基清除率为42.98%,水解度为32.18%,与预测值的相对误差为1.04%。浓度为20 mg/m L时,玉米醇溶蛋白的DPPH·自由基清除率和羟基自由基清除率分别为同浓度VC的85.8%和67.0%。      

酸性蛋白酶制备花椒籽蛋白抗菌肽的研究

利用酸性蛋白酶酶解花椒籽蛋白制备抗菌肽,以底物质量浓度、酶与底物比、pH值、酶解温度、酶解时间为影响因子,在单因素试验结果的基础上,应用Box-Behnken方法进行三因素三水平的试验设计,以对大肠杆菌的抑菌率为响应值,应用响应面法对花椒籽蛋白制备抗菌肽工艺进行优化。其最佳工艺条件为：底物质量浓度30 mg/mL、酶与底物比3.0%、酶解pH 4.0、酶解温度51.2 ℃、酶解时间4.7 h,此条件下酶解产生的抗菌肽复合物的水解度为9.05%,对大肠杆菌的抑菌率为56.98%。     

响应面法优化辣椒籽抗氧化肽的酶解制备工艺

以辣椒籽蛋白质为原料,采用酶法制备辣椒籽抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为评价指标,在单因素试验基础上,通过响应面法优化辣椒籽抗氧化肽的酶解制备工艺。结果表明：碱性蛋白酶为最适蛋白酶,最优酶解工艺参数为酶添加量0.11 g(以0.30 g辣椒籽蛋白质质量计)、pH 9.0、酶解温度55℃、酶解时间3.75 h,在此条件下,DPPH自由基清除率达到37.71%±0.83%。     

酶法水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽工艺的优化

以牦牛皮为原料,用碱性蛋白酶水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽。以水解度和牦牛皮蛋白水解物对DPPH自由基清除率的IC₅₀值为评价指标,在单因素实验的基础上,结合响应面（Box-Behnken）试验设计筛选出牦牛皮抗氧化肽的最佳制备工艺。结果表明,最佳制备工艺为:水解温度51 ℃,酶用量10890 U/g,水解时间10.6 h,pH8.5,底物浓度5%,此时水解度为41.39%±0.69%,牦牛皮抗氧化肽清除DPPH·、ABTS+·、·OH的IC₅₀值分别为2.884、2.110、2.523 mg/mL。综上,该制备工艺下的牦牛皮抗氧化肽对自由基有良好的清除能力,且有较强的还原能力,说明牦牛皮抗氧化肽有望作为天然抗氧化剂得到开发利用。     

响应面优化酶解法制备蒲公英籽蛋白抗氧化肽工艺

以蒲公英籽蛋白质抽提物为原料,采用响应面分析法(RSM)优化酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺。采用碱性蛋白酶酶解制备蒲公英籽抗氧化肽,以酶解产物对DPPH自由基清除力为评价指标,考察酶解p H、底物浓度、酶底比及酶解温度对酶解产物抗氧化活性的影响。在单因素实验的基础上,采用三因素三水平的响应面分析法确定酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺,同时建立酶解工艺的二次项数学模型并验证其可靠性。以酶解时间、酶底比和酶解p H为自变量,研究这3个因素的交互作用及最佳酶解工艺条件并进行验证。研究表明,对酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺的影响因素主次顺序为:p H酶底比酶解时间,最佳酶解工艺条件:酶解时间4.90 h,p H8.5和酶底比7.80%。在最佳工艺条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为79.13%。     

响应面优化酶解法制备蒲公英籽蛋白抗氧化肽工艺

以蒲公英籽蛋白质抽提物为原料,采用响应面分析法(RSM)优化酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺。采用碱性蛋白酶酶解制备蒲公英籽抗氧化肽,以酶解产物对DPPH自由基清除力为评价指标,考察酶解p H、底物浓度、酶底比及酶解温度对酶解产物抗氧化活性的影响。在单因素实验的基础上,采用三因素三水平的响应面分析法确定酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺,同时建立酶解工艺的二次项数学模型并验证其可靠性。以酶解时间、酶底比和酶解p H为自变量,研究这3个因素的交互作用及最佳酶解工艺条件并进行验证。研究表明,对酶解蒲公英籽蛋白质制备抗氧化肽工艺的影响因素主次顺序为:p H>酶底比>酶解时间,最佳酶解工艺条件:酶解时间4.90 h,p H8.5和酶底比7.80%。在最佳工艺条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为79.13%。      

响应面法优化胃蛋白酶制备花椒籽蛋白抗菌肽的研究

以花椒籽蛋白为原料,采用胃蛋白酶水解制备抗菌肽。在单因素实验结果的基础上,应用Box-Behnken中心组合方法进行四因素三水平的实验设计,以大肠杆菌（Escherichia coli）抑菌率为响应值建立数学模型,确定底物浓度4.9%、酶与底物比（g/g）0.9∶100、pH2.0、酶解温度32℃、酶解时间3h为最佳酶解条件。此条件下酶解产生的抗菌肽复合物的抑菌率可以达到60.96%。      

奇亚籽蛋白酶解制备抗氧化肽的工艺优化

以奇亚籽粗蛋白为原料,酶解法制备抗氧化肽并通过响应面法优化工艺。同时以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和羟基自由基清除率为指标,通过单因素试验,筛选最佳酶并考察加酶量、pH值、时间、温度等对产物抗氧化能力的影响。在单因素试验基础上,通过响应面分析法对酶解工艺进一步优化,同时建立酶解工艺的二次项数学模型并验证其可靠性。结果表明:中性蛋白酶为最适酶,酶解最佳工艺为:加酶量3170 U/g,pH 6.9,酶解时间4.9 h,酶解温度50℃,此时DPPH自由基和羟基自由基清除率分别为54.90%、41.03%,与理论值无显著差异,回归模型较可靠,抗氧化能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)值为(0.53±0.03)μmol TE/mg,表明奇亚籽抗氧化肽具有良好的抗氧化活性。     

大米蛋白抗氧化肽的酶法制备工艺研究及其优化

以大米蛋白粉为反应底物,采用酶解法制备大米蛋白抗氧化肽。以酶解液的水解度与对DPPH自由基的清除率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶3种蛋白酶中筛选出木瓜蛋白酶为最佳用酶。通过BoxBehnken响应面设计法优化木瓜蛋白酶酶解大米蛋白抗氧化肽的工艺条件为p H值5.25、酶解温度61.4℃、加酶量5.6 U/m L、底物质量浓度5.3 g/100 m L。其酶解液稀释5倍后对DPPH自由基的清除率为94.8%。     

超高压与Alcalase协同作用制备牛乳清蛋白抗氧化肽

为探讨超高压与碱性蛋白酶Alcalase协同作用下乳清蛋白抗氧化肽的制备,以牛乳清分离蛋白(WPI)为原料,采用Alcalase分别对100～600MPa的超高压处理中和超高压处理后的WPI进行水解,并采用邻苯三酚自氧化法对其水解产物的超氧阴离子自由基清除能力进行测定。结果表明,超高压与Alcalase协同作用显著地促进了WPI的水解,其水解产物的抗氧化活性也显著提高;分子量小于3ku的组分具有最强的超氧阴离子自由基清除能力,其半抑制浓度IC50值最小,为411.62μg/mL。因此,超高压与Alcalase协同作用于乳清蛋白可用于开发新型天然抗氧化剂。     

超高压与Alcalase协同作用制备牛乳清蛋白抗氧化肽

为探讨超高压与碱性蛋白酶Alcalase协同作用下乳清蛋白抗氧化肽的制备,以牛乳清分离蛋白(WPI)为原料,采用Alcalase分别对100～600MPa的超高压处理中和超高压处理后的WPI进行水解,并采用邻苯三酚自氧化法对其水解产物的超氧阴离子自由基清除能力进行测定。结果表明,超高压与Alcalase协同作用显著地促进了WPI的水解,其水解产物的抗氧化活性也显著提高;分子量小于3ku的组分具有最强的超氧阴离子自由基清除能力,其半抑制浓度IC50值最小,为411.62μg/mL。因此,超高压与Alcalase协同作用于乳清蛋白可用于开发新型天然抗氧化剂。