同源盒基因2在黑色素瘤细胞对于曲美替尼耐药中的作用

目的:研究同源盒基因2（MSX2）在黑色素瘤细胞A375对于曲美替尼耐药中的作用机制。方法:构建曲美替尼耐药的A375细胞株（A375-AR）,曲美替尼干预A375和A375-AR后采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。采用小干扰RNA（siRNA）沉默A375-AR中MSX2基因,设计A375、A375-AR、A375-AR-MSX2,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。构建MSX2过表达的A375细胞系（A375-OE）,设置A375、A375-OE和A375-AR组,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。结果:A375-AR对1.8 nmol/L的曲美替尼耐药,采用1.8 nmol/L曲美替尼干预后,A375细胞活力和细胞凋亡率显著高于A375-AR,A375细胞中Bcl-2基因表达水平低于A375-AR,而Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达水平高于A375-AR。A375-AR沉默MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著增高,且细胞活力下调,凋亡率上调,细胞中Bcl-2表达下调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达上调。A375过表达MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著下调,细胞活力上调,凋亡率下调,细胞中Bcl-2表达上调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达下调。结论:MSX2基因可以诱导黑色素瘤细胞对于曲美替尼的耐药,是治疗黑色素瘤耐药的潜在靶点。     

地塞米松对人胎盘葡萄糖转运功能的作用及机制

目的: 探讨地塞米松对人胎盘葡萄糖转运功能的作用及机制。方法: 取本院治疗并分娩的早产孕妇160例,随机分为对照组和地塞米松组,各80例。随机选取两组各10例胎盘组织样品,采用免疫组织化学检测胎盘生乳素（human placental lactogen,HPL）蛋白。选取人绒毛膜癌细胞系JEG-3细胞株纳入机制研究,根据转染载体的不同分为4组,pcDNA3.1组：JEG-3细胞转染对照载体pcDNA3.1;pcDNA3.1-GRα组：JEG-3细胞转染GRα过表达载体pcDNA3.1-GRα;Control siRNA组：JEG-3细胞转染Control siRNA;GRα siRNA组：JEG-3细胞转染GRα siRNA。分别利用CCK-8法检测胎盘细胞增殖、TUNEL法检测细胞凋亡程度、检测线粒体膜电位、检测胎盘细胞葡萄糖摄取量、荧光分子探针测定胎盘细胞活性氧（reactive oxygen species, ROS）的含量及实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction）检测糖皮质激素受体α（glucocorticoid receptor-α,GRα）、葡萄糖转运蛋白（glucose transporter,GLUT）的相对表达量。结果: 对照组的HPL强阳性细胞多于地塞米松组。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-GRα组的细胞增殖能力、线粒体膜电位水平、葡萄糖摄取量显著升高（P<0.05,P<0.01）;细胞凋亡、ROS含量明显降低（P<0.01）;GRα、GLUT1、GLUT3的相对表达量显著上调（P<0.01）。与Control siRNA组比较,GRα siRNA组细胞的增殖能力、线粒体膜电位水平、葡萄糖摄取量明显下降（P<0.05, P<0.01）;细胞凋亡、ROS含量明显升高（P<0.01）;GRα、GLUT1、GLUT3的相对表达量均显著下调（P<0.05）。 结论: 地塞米松能够抑制胎盘对葡萄糖的转运功能,并且极有可能通过ROS/AMPK路径实现这一调控。     

碳酸酐酶1沉默对肺癌A549细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:探讨沉默碳酸酐酶1（CA1）对人肺癌A549细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:采用脂质体转染法将CA1特异性siRNA（si-CA1组）及阴性对照（si-NC组）转染肺癌A549细胞,同时以转染空脂质体的A549细胞为空白对照组（Blank组）。采用实时荧光定量PCR（qPCR）和蛋白印迹法（Western blot）检测CA1 mRNA和蛋白表达水平,细胞计数试剂盒法（CCK-8）、流式细胞术、Transwell实验分别检测A549细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力。结果:qPCR和Western blot检测结果显示,转入CA1 siRNA的A549细胞中CA1 mRNA和蛋白的表达水平均明显下调（P<0.05）;CCK-8实验结果显示,沉默CA1后si-CA1组A549细胞在24、48和72 h时光密度（OD）值明显低于si-NC组（P<0.05）;流式细胞术结果发现,si-CA1组A549细胞凋亡率明显高于si-NC组（P<0.05）;Transwell实验结果显示,si-CA1组侵袭和迁移细胞数均明显少于si-NC组（P<0.05）。与Blank组相比,si-NC组以上各指标差异均不显著（P>0.05）。结论:沉默CA1能够抑制肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡。     

RAB32对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖和迁移作用的研究

目的: 探讨RAB32对慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞增殖和迁移作用的影响。方法: 使用Western blot和qRT-PCR分别检测RAB32在CML患者、健康对照以及CML K562细胞株中的表达情况。进一步转染RAB32-shRNA到K562细胞株中敲除RAB32基因后,流式细胞仪分析K562细胞周期变化,Western blot和qRT-PCR分别检测K562细胞中细胞增殖相关蛋白C-myc、Cyclin D1和细胞迁移相关蛋白MMP-3、MMP-9的蛋白和mRNA表达水平变化。结果: Western blot和qRT-PCR检测结果显示,RAB32在CML患者和K562细胞株中高表达（P＜0.01）。在K562细胞株中转染RAB32-shRNA抑制RAB32表达后,细胞周期分析结果显示,较NC-shRNA组相比,RAB32-shRNA组K562细胞的S期和G2/M期细胞比例均有不同程度降低,且S期细胞比例降低更为显著（P＜0.01）。Western blot检测结果显示,与NC-shRNA组相比,RAB32-shRNA组K562细胞的细胞增殖相关蛋白C-myc、Cyclin D1和细胞迁移相关蛋白MMP-3、MMP-9蛋白表达水平明显降低（P＜0.01）,qRT-PCR检测结果显示,这四种因子的mRNA水平也相应降低（P＜0.01）。结论: 抑制RAB32的表达能够抑制CML K562细胞的增殖和迁移能力。     

硒酸酯多糖诱导白血病多药耐药细胞凋亡的作用机制

目的: 观察硒酸酯多糖(Kappa-selenocarrag-eenan, KSC) 对 K562/ADM 耐药细胞的诱导凋亡效应, 并探讨其作用机制。方法: 应用噻唑蓝(MTT) 比色法、Wright-Giemsa 染色、DNA 琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(Flow cytometry, FCM) 观察K562/ADM 细胞凋亡;FCM 测定 K562/ADM 细胞 Fas、P53 和 Bcl-2 蛋白表达水平;RT-PCR 检测 Caspase-3 mRNA 的表达。结果: 50 ~ 500 mg°L^-1KSC 抑制 K562/ADM 细胞增殖, 并诱导 K562/ADM 细胞凋亡, 细胞出现呈典型凋亡形态改变, DNA 电泳可见 DNA 梯状条带(DNAladder);FCM 分析出现亚 G 1 期细胞群, S 期细胞比例增高。Fas 蛋白表达上调, Bcl-2 蛋白表达下调,Caspase-3 mRNA 表达显著增强, 但 P53 蛋白表达无明显改变。结论: KSC 通过 Fas 依赖性 Caspase-3 激活途径诱导K562/ADM 细胞凋亡。     

RNAi抑制DNA甲基转移酶1的表达对胃癌细胞p16基因的影响

目的:运用RNAi（RNA interference）抑制胃癌细胞株BGC-823中DNA甲基转移酶1（DNA methylation transferase 1,DNMT1）基因的表达,当DNMT1基因沉默后观察p16基因的表达情况。 方法:以DNMT1的mRNA核苷酸序列,构建siRNA质粒1、2、3和阴性对照siRNA质粒b,胃癌细胞培养后经脂质体转染。对DNMT1基因行Q-PCR检测其mRNA表达水平及Western blot检测其蛋白表达水平,确认其表达下调后筛选出最佳干扰质粒。以同样的方法检测胃癌细胞最佳干扰组、阴性对照组和空白对照组的p16基因的表达情况,以确认抑制DNMT1基因表达后对胃癌细胞p16基因的影响。结果:RNAi可有效抑制胃癌细胞株BGC-823中DNMT1基因的表达。对转染后的胃癌细胞DNMT1基因检测mRNA及蛋白表达情况,结果显示,转染siRNA2的胃癌细胞中DNMT1的表达明显低于其他转染组、阴性对照组及空白对照组（P＜0.05）,由此筛选出最佳干扰质粒siRNA2。用同样的方法检测胃癌细胞最佳干扰组（siRNA2）、阴性对照组和空白对照组的p16基因表达情况。结果显示,最佳干扰组的mRNA（1.6727±0.2242）及蛋白（0.9227±0.0337）表达水平均高于阴性对照组（1.0025±0.0877）、（0.5440±0.0229）和空白对照组（0.4729±0.0940）、（0.4767±0.0774）（P＜0.05）。结论:用RNAi可以抑制胃癌细胞DNMT1基因的表达从而使p16基因去甲基化,使p16基因恢复表达。     

体外沉默血管内皮生长因子对D-(-)-MTX/A549耐药细胞株迁移侵袭能力的影响

目的: 研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因沉默对D-(-)-MTX /A549耐药细胞株迁移和侵袭的影响及可能的分子机制。方法: 采用siRNA技术沉默D-(-)-MTX/A549耐药细胞株VEGF基因, 细胞划痕试验和Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR检测VEGF、MMP-2 mRNA,Western blot检测p-ERK1/2蛋白的表达。结果: VEGF siRNA序列及阴性对照成功转染至D-(-)-MTX/A549后,VEGF mRNA表达水平明显下降, 与阴性对照相比下降了2.29倍,差异具有统计学意义（P=0.002）,表明转染成功。阴性对照组与空白组差异无统计学意义（P>0.05）。转染后,D-(-)-MTX/A549迁移和侵袭能力明显下降（P值均<0.05）,D-(-)-MTX/A549耐药细胞 MMP-2 mRNA、p-ERK1/2的蛋白达也较阴性对照水平明显下降（P值均<0.05）。结论: 抑制VEGF基因表达可以抑制D-(-)-MTX/A549细胞的迁移和侵袭能力,这一过程可能涉及到MMP-2和p-ERK1/2信号通路。     

粘附分子CD54、CD44在苦瓜蛋白诱导K562 细胞凋亡中的作用

目的: 观察苦瓜蛋白诱导K562 细胞凋亡时细胞粘附分子(CD54 、CD44) 表达水平的变化,探讨粘附分子在苦瓜蛋白诱导K562 细胞凋亡中的作用。方法: 以一定浓度的苦瓜蛋白处理K562 细胞;CCK-8试剂盒检测其对细胞生长的影响;流式细细术(AnnexinⅤ) 、透射电镜等方法检测细胞凋亡;同时应用流式细细术检测粘附分子(CD54 、CD44) 蛋白表达水平的变化。结果: 苦瓜蛋白对K562 细胞生长具有明显的抑制作用;流式细胞术及形态学观察(电镜) 证实一定作用浓度的苦瓜蛋白可诱导K562 细胞发生明显的细胞凋亡;苦瓜蛋白处理组K562 细胞中CD54 、CD44表达分别为18.62 %和1.32 %,对照组分别为0.25 % 和0.17 %,分别上调了18.37 %、1.15 %。结论: 苦瓜蛋白引起K562 细胞凋亡的过程中,粘附分子CD54表达上调;CD54表达上调可能是苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一,其机制可能涉及细胞粘附依赖性细胞凋亡。     

不同靶点的反义bcl-2 寡核苷酸对白血病细胞足叶乙甙敏感性影响的研究1

目的 探讨针对bcl-2 mRNA 蛋白编码区的反义寡核苷酸对足叶乙甙诱导HL-60 和K562 细胞凋亡的影响。方法 应用MTT 法和流式细胞仪检测反义寡核苷酸与足叶乙甙联合作用的HL60 和K 562 细胞中bcl-2 蛋白表达和细胞凋亡及足叶乙甙IC₅₀值。结果 10 μmol·L^-1 反义寡核苷酸与足叶乙甙联用能明显抑制HL60 和K562 细胞中bcl-2 蛋白表达和增强细胞对足叶乙甙诱导凋亡的敏感性, 提高细胞的凋亡率;并且针对bcl-2 mRNA 蛋白编码区的反义寡核苷酸比针对bcl-2 mRNA 翻译起始区的反义寡核苷酸作用更强。结论 针对bcl-2 mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸能促进HL60 和K 562 细胞足叶乙甙敏感性。     

miR-222、MBD2在胃癌患者中的表达及对铂类化疗敏感性的影响

目的:研究miRNA-222与甲基化CpG结合结构蛋白2（MBD2）水平在胃癌组织中的表达水平及其对铂类化疗敏感性的影响。方法:选择2016年2月至2017年5月在本院就诊的75例原发性胃癌患者作为研究对象。检测患者癌组织及癌旁组织中miR-222、MBD2表达水平；分析miR-222、MBD2水平与胃癌临床病理参数的相关性。将miR-222 inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞中，RT-PCR和Western blot分别检测转染后细胞中miR-222和MBD2的表达水平，MTT法、流式细胞术分别检测转染对细胞增殖、凋亡的影响。结果:胃癌组织中miR-222的阳性表达率显著高于癌旁组织（P<0.05）。胃癌组织中miR-222相对表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）。胃癌组织中MBD2的阳性表达率显著低于癌旁组织（P<0.05）。miR-222及MBD2表达水平与分化程度、TNM分期有明显相关性（P<0.05）。转染miR-222 inhibitor的各组SGC-7901细胞中miR-222表达水平均显著低于空白对照组（Control组）和miR-NC组（NC组）（P<0.05）。转染miR-222 inhibitor的各组细胞中MBD2 mRNA和蛋白表达水平显著高于Control组和NC组（P<0.05）。转染miR-222 inhibitor的各组细胞的增殖率显著低于Control组和NC组（P<0.05），且miR-222 inhibitor+顺铂（Cisplatin，CDDP ）组的细胞增殖率显著低于miR-222 inhibitor组及CDDP 组，细胞凋亡率显著高于miR-222 inhibitor组及CDDP 组（P<0.05），且与CDDP联合运用能够更明显地抑制肿瘤细胞的增殖率，促进细胞的凋亡。结论:miR-222在胃癌组织中表达明显上调，MBD2显著下调，其表达高低与胃癌分化程度、TNM分期有明显相关性。miR-222可增强 CDDP 对胃癌的化疗敏感性，其可能通过抑制胃癌中的靶基因MBD2发挥作用。     

siRNA沉默ASIC1a基因对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞凋亡的影响研究

目的: 探讨小分子干扰RNA(siRNA)技术诱导佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默对细胞凋亡的影响。方法: 通过化学合成法合成特异性荧光短链ASIC1a siRNA-FAM,使用Lipofectamine 2000转染试剂盒将ASIC1a siRNA转染入关节软骨细胞,采用荧光显微镜、流式细胞术、实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)及Western Blot法检测siRNA转染效率及其对ASIC1a mRNA和蛋白表达的抑制作用。同时采用Annexin-V /PI流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果: ASIC1a siRNA能成功转入软骨细胞,转染后AA大鼠关节软骨细胞中ASIC1a mRNA表达显著低于对照组 (P<0.01),最大抑制率为85.4 %;Western Blot结果显示,转染特异性siRNA后ASIC1a蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)。Annexin-V /PI流式细胞术结果表明,与模型组相比,siRNA-3转染引起ASIC1a表达沉默后AA大鼠软骨细胞凋亡明显减少。结论: siRNA介导的AA大鼠关节软骨细胞ASIC1a表达沉默模型是研究酸敏感离子通道对软骨细胞代谢影响的可靠模型,siRNA-3转染对胞外酸化刺激条件下AA大鼠关节软骨细胞凋亡的保护作用可能与其调节ASIC1a的表达有关。     

联合应用化疗药物对三氧化二砷耐药白血病细胞的毒性实验研究

目的: 探讨化疗药物联合应用对三氧化二砷(As2O3)耐药白血病细胞(K562/AS2)的毒性作用。方法: 细胞毒实验采用MTT 法, 二药合用时细胞毒性作用采用Chou-Talalay 联合指数法分析, 细胞表面P-糖蛋白(P-gp)和细胞内柔红霉素(DNR)浓度测定采用流式细胞术测定。结果: K562/AS2 细胞对三氧化二砷、柔红霉素、鬼臼乙叉苷(VP16)、三尖杉酯碱(H)、米托蒽醌(NVT)和阿糖胞苷(Ara-C)的耐药倍数分别为7.4、2.9、3.8、3.6、2.8 和1.1。K562 细胞和K562/AS2 细胞的细胞表面P-gp 或细胞内任意荧光强度无显著的统计学意义(P >0.05)。As2O3 与DNR、VP16、H 或NVT 联合应用时, 对K562、K562/AS2 和P-gp 表达的白血病细胞(K562/A02)细胞的联合指数均大于1。异搏定与DNR 联合应用时, 对K562 和K562/AS2 细胞的联合指数均大于1, 但是对K562/A02 细胞的联合指数均小于1。结论: K562/AS2 细胞对As2O3、DNR、VP16 和NVT 耐药, 其机制与P-gp 表达无关。异搏定联合应用DNR 可以逆转K562/A02 对DNR 的耐药性, 不能逆转DNR 对As2O3耐药细胞的耐药性。As2O3 与DN、VP16、H 和NVT联合应用时, 对K562、K562/AS2 和K562/A02 细胞的毒性均为拮抗作用。     

PI3K/Akt/FOXO3a信号通路介导的保护性自噬参与肺腺癌获得性顺铂耐药表型重塑

目的：比较顺铂压力下人肺腺癌亲本A549细胞与获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞自噬水平,探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。方法：不同浓度顺铂（cisplatin, DDP）干预亲本A549细胞及获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞,应用CCK-8法比较两株细胞耐药指数、免疫印迹法比较自噬相关蛋白（Beclin 1、LC3Ⅱ及p62）表达水平;应用10 μmol/L顺铂（相当于亲本A549细胞半数抑制浓度,即A549 IC50值）干预A549及A549/DDP细胞,构建细胞应激状态,CCK-8法比较两株细胞生存活力,免疫印迹法比较自噬相关蛋白（Beclin 1、LC3Ⅱ及p62）、凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3）、转录因子FOXO3a及其磷酸化蛋白（p-FOXO3a）表达水平,免疫荧光法观察FOXO3a亚细胞定位,并利用自噬晚期抑制剂巴弗洛霉素A1（Baf A1）干预A549及A549/DDP细胞,进一步验证顺铂压力下细胞自噬激活情况;利用蛋白激酶抑制剂干预PI3K/Akt信号通路,免疫印迹法检测顺铂压力下A549及A549/DDP细胞Akt、p-Akt及自噬相关蛋白表达水平,以探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。结果：与亲本A549细胞相比,获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞具有更强的顺铂耐药性及较高的基础自噬水平。在10 μmol/L顺铂压力下,A549/DDP细胞存活率明显高于A549细胞;A549细胞中,顺铂通过抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,上调转录因子FOXO3a表达水平,下调Bcl-2表达、促进Bax及Cleaved Caspase-3活性片段表达增加,诱导细胞凋亡;A549/DDP细胞中,相同浓度的顺铂通过抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,抑制FOXO3a磷酸化,上调Beclin 1及LC3Ⅱ表达、下调p62表达,促进细胞保护性自噬,使耐药细胞获得生存活性。 结论：顺铂诱导亲本A549细胞凋亡可能与抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,上调转录因子FOXO3a表达有关;A549/DDP细胞顺铂耐药表型的获得可能与顺铂抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,抑制FOXO3a磷酸化,上调细胞保护性自噬相关。     

生物钟基因Period2调节肝癌细胞warburg效应及转移侵袭中的作用机制

目的:研究钟基因Period2在肝癌细胞warburg效应及转移侵袭中的作用。方法:采用实时荧光定量PCR（RT-QPCR）检测组织以及肝癌细胞的Period2表达水平。上调肝癌细胞MHCC97L中Period2的水平,沉默HepG2中Period2的表达。检测葡萄糖摄取水平、乳酸水平、细胞氧耗水平、细胞活力、迁移能力、侵袭能力。Western-Blot检测细胞中代谢关键酶的表达。结果:肿瘤组织中Period2基因水平显著高于癌旁组织（P<0.05）。4株肿瘤细胞中MHCC97L中Period2表达水平较低,而HepG2水平较高。Period2沉默后,HepG2细胞葡萄糖相对摄取水平相比control下调、乳酸相对产生水平相比control下调,细胞耗氧量相比control增高,细胞活力、迁移及侵袭能力下降。糖代谢关键酶表达水平下调。而Period2过表达后,MHCC97L细胞葡萄糖摄取水平相比control增高、乳酸产生水平相比control上调,细胞耗氧量相比control降低,细胞活力、迁移及侵袭能力上调。糖代谢关键酶表达水平上调。结论:钟基因Period2在肝癌中高表达,其作用与促进肝癌细胞Warburg效应,促进转移侵袭有关。     

异丙酚预处理对缺氧/复氧后培养海马神经元金属硫蛋白-3蛋白表达的影响

目的:本研究观察异丙酚对培养海马神经元缺氧复氧后损伤反应的影响及金属硫蛋白-3(metallothionein-3,MT-3)在其中的作用。方法: 培养7~10 d 海马神经元,以不同浓度的异丙酚(50,150,250 μmol/L)预处理后 24 h 后,制备缺氧 4 h 后复氧 24 h 模型(H/R),Western blot法检测MT-3蛋白表达水平;以MT-3特异性siRNA沉默MT-3表达后,采用MTT法观察异丙酚对H/R海马神经元存活率的影响。结果: 在H/R条件下,异丙酚可浓度依赖性促进MT-3的蛋白表达。以MT-3 siRNA抑制MT-3蛋白表达后,异丙酚提高神经元存活率的作用消失。结论:异丙酚具有神经元保护效应,这一作用可能与其上调MT-3的蛋白表达有关。     

白藜芦醇诱导K562 细胞凋亡过程中活性氧水平的改变

目的: 探讨白藜芦醇对K562 细胞的凋亡诱导效应和对K562 细胞内活性氧水平的影响。方法: 应用噻唑蓝(MTT) 比色法、光镜、DNA 琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(FCM) 检测细胞凋亡;FCM 测定细胞内活性氧(ROS) 水平。结果: 白藜芦醇显著抑制K562 细胞增殖, 并呈现典型的凋亡形态学改变;DNA 电泳可见梯状条带出现;FCM 分析显示S 期细胞数明显增多, 出现S/G₂ 期阻滞, ROS 水平升高。结论: 白藜芦醇诱导K562 细胞凋亡与细胞内活性氧水平升高有关。     

UTP23基因在上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞中的表达及对紫杉醇化疗耐药的影响

目的: 探讨UTP23基因在上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞中的表达及对紫杉醇化疗耐药的影响。方法: 采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）法检测上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞中UTP23、P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药基因（MDR1）的mRNA表达水平,使用特异性UTP23-siRNA转染上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞,使用RT-PCR和 Western blot法检测转染后UTP23、P-gp、MDR1基因的表达,使用MTT法检测UTP23-siRNA对上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞生长的影响及耐药性。结果: 耐药组UTP23基因mRNA表达水平明显低于敏感组（P<0.05）,耐药组P-gp、MDR1基因mRNA表达水平明显高于敏感组（P<0.05）;转染组与未转染组、阴性对照组相比较,UTP23 mRNA水平明显升高（P<0.05）, 未转染组与阴性对照组相比较,UTP23 mRNA水平和蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05）;转染组与未转染组、阴性对照组相比较,P-gp、MDR1 mRNA表达水平明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）,未转染组与阴性对照组相比较,P-gp、MDR1 mRNA表达水平无明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）; 紫杉醇对UTP23-siRNA转染后上皮性卵巢癌耐药细胞的IC50浓度明显高于未转染组和阴性对照组（P<0.05）。结论: UTP23基因在上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞中低表达,其可能通过间接调控MDR1及P-gp的表达而参与上皮性卵巢癌紫杉醇细胞对紫杉醇的耐药。     

硝普钠抑制K562 细胞增殖并诱导细胞凋亡的实验研究

目的: 观察外源性一氧化氮(NO) 供体硝普钠对K562 细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用。方法: 将不同浓度的硝普钠与K562 细胞在体外培养, 观察其作用时间效应和剂量效应;用活细胞计数、MTT 法观察硝普钠对K562 细胞增殖的抑制作用;用DNA凝胶电泳、DNA 含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和DNA 片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。同时设高铁氰化钾(PFC) 对照组和空白对照组。结果: NO 能抑制K562 细胞生长, 并在一定的剂量范围内呈现作用时间和剂量的量效关系, 大部分细胞阻滞于G₀/G₁ 期;K562 细胞与硝普钠作用后出现典型的细胞形态改变, DNA 片断化, 亚G₁ 峰检出并显著增加, Annexin V/PI 和DNA 片段原位末端标记表达增加等均证实NO 能诱导K562 细胞凋亡。而对照组并无此类变化。结论: NO 通过阻滞G₀/G₁期细胞显著抑制K562 细胞的增殖, 并有很强的致凋亡作用。