肉桂油活性成分(E)-肉桂醛对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨肉桂油主要活性成分(E)-肉桂醛对人结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:采用CCK-8法测定(E)-肉桂醛对LOVO细胞增殖活性的影响。平板克隆形成实验检测(E)-肉桂醛对LOVO细胞克隆形成能力的影响。AnnexinV-PE/7-AAD双染色法测定(E)-肉桂醛对细胞凋亡的影响。Western blot分析细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平。结果:(E)-肉桂醛能显著抑制结肠癌细胞LOVO的增殖活力和克隆形成能力(P<0.05)，且细胞增殖抑制作用随时间的延长和剂量的增加而增强。与对照组相比(E)-肉桂醛作用LOVO细胞48 h后，细胞凋亡率升高(P<0.05)。Western blot检测结果显示(E)-肉桂醛作用LOVO细胞48 h后Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)，Bax、Caspase-3表达水平明显增高(P<0.05)。结论:(E)-肉桂醛能抑制结肠癌细胞增殖并诱导凋亡，其机制可能是通过增加Bax、Caspase-3的活性及抑制Bcl-2的表达来实现的，(E)-肉桂醛是一种具有发展潜力的抗结肠癌药物。     

氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的作用机制

目的: 探讨氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的可能作用机制。方法: 人肺癌细胞株A549和NCI-H460 细胞先加入终浓度IL-1β₁ 1μg/L刺激 24 h,再加入不同浓度氯美昔布继续培养 24 h,采用Western blot 法检测ERK2、p-ERK及Bcl-2表达水平。氯美昔布体外处理A549、NCI-H460后,采用Western blot法检测Bcl-2、Bax表达水平。结果: 氯美昔布作用后肺癌细胞中ERK2及p-ERK的磷酸化水平均下降,并伴有Bcl-2水平的下降,差异有统计学意义(P<0.01)。并且随着氯美昔布浓度的增大, Bcl-2蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达在A549细胞中增强,在NCI-H460细胞中不变,Bcl-2/Bax的比值下降。结论: 氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的机制可能与通过ERK信号转导途径调节肺癌细胞产生Bcl-2,进而诱导Bcl-2/Bax的比值下降有关。     

枸杞多糖对顺铂诱导小鼠睾丸支持细胞凋亡的影响

目的：研究枸杞多糖（lycium barbarum polysaccharides, LBP）对顺铂（cis-dichlorodiamineplatinum, CDDP）诱导小鼠睾丸支持细胞（TM4）凋亡的影响并探讨其可能机制。方法：体外培养TM4细胞,四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测LBP对CDDP诱导TM4细胞生存率的影响,Western blot检测LBP对CDDP诱导TM4细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果：与Control组相比,CDDP组TM4细胞凋亡显著增加,细胞内抑凋亡基因Bcl-2表达量显著降低,促凋亡基因Bax表达量及Caspase-3表达量显著升高;与CDDP组相比,CDDP+LBP组TM4细胞凋亡显著减少,细胞内抑凋亡基因Bcl-2表达量显著升高,促凋亡基因Bax表达量及Caspase-3表达量显著降低。 结论：LBP作用于CDDP诱导的TM4细胞,能够通过增强细胞内Bcl-2的表达,抑制Bax及Caspase-3的表达来阻抑因CDDP诱导的TM4细胞凋亡,进而减轻CDDP对TM4细胞造成的损伤。     

独一味乙醇提取物诱导人黏液表皮样癌MEC-1细胞凋亡的机制研究

目的:探索独一味乙醇提取物（ethanol extract of lamiophlomis rotate,EELR）促进人黏液表皮样癌MEC-1细胞凋亡的作用及其机制。方法: 采用磺酰罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）比色法测定细胞活力、细胞克隆形成实验检测细胞增殖率、Hoechst33258/PI荧光染色以及流式细胞术检测EELR对MEC-1细胞凋亡率的影响,采用蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果:EELR在一定浓度范围呈时间和剂量依赖性抑制MEC-1细胞增殖,且不同剂量EELR作用于MEC-1细胞48 h后细胞凋亡率有明显差异,Western blot检测表明随EELR作用浓度增加,MEC-1细胞Bcl-2蛋白表达下调,Bax、Casepase-3蛋白表达量升高。 结论:EELR可能通过调节人黏液表皮样癌MEC-1细胞的Bcl-2、Bax、Casepase-3蛋白表达水平进而诱导细胞凋亡。     

奥巴克拉联合5-氟尿嘧啶对低氧性胰腺癌细胞凋亡的作用研究

目的: 研究在低氧条件下,奥巴克拉(obatoclax,OBX)联合5-fluorouracil(5-FU)对胰腺癌HPAC细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法: 建立低氧条件;采用Western blot检测正常氧及低氧条件下HPAC细胞中HIF-1α抗体的表达;Hoechst 33258染色检测OBX在正常氧及低氧条件下对胰腺癌细胞凋亡的影响;细胞分组为低氧组、5-FU组、OBX+5-FU组,MTT检测各组中细胞增殖活性, Western blot检测各组中HIF-1α、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果: 低氧条件下HIF-1α的表达显著高于其在正常氧条件下的表达,说明低氧条件成功;在低氧条件下,OBX诱导胰腺癌HPAC细胞凋亡的能力增强,凋亡率增加,且呈一定的剂量依赖关系;低氧条件下5-FU可抑制胰腺癌细胞活力,降低细胞中HIF-1α、Bcl-2的表达,促进Bax的表达;OBX联合5-FU组,细胞活力显著降低,HIF-1α、Bcl-2的表达进一步下降,Bax的表达明显升高。结论: 在低氧条件下,OBX联合5-FU可通过抑制HIF-1α和Bcl-2的表达,促进Bax的表达,诱导细胞凋亡而抑制胰腺癌HPAC细胞的增殖。     

地塞米松对小鼠急性胰腺炎胰腺组织中Notch信号及凋亡相关基因表达的影响

目的: 探讨地塞米松对急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）小鼠胰腺组织中Notch1,Hes1及凋亡因子Bax、Bcl-2表达的影响。方法: 利用蛙皮素建立小鼠急性胰腺炎动物模型,实验分组为生理盐水组（对照组）,模型组（AP组）,地塞米松（dexamethasone,DEX）组,利用ELISA法检测各组动物血清中TNF-α, IL-6的含量;利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测各组动物胰腺组织中Notch1,Hes1,Bax及Bcl-2 mRNA的表达情况;利用Western blot检测各组胰腺组织中Notch1,Hes1,Bax及Bcl-2蛋白的表达情况。结果: ELISA检测结果显示,与模型组相比较,DEX组动物血清中TNF-α与IL-6的含量显著降低;RT-qPCR与Western blot结果显示,与模型组相比较,DEX组胰腺组织中Notch1,Hes1,Bcl-2 mRNA的表达与蛋白的表达均显著降低,而Bax mRNA的表达与蛋白的表达显著升高。结论: DEX可能通过抑制Notch信号的激活,抑制Notch1与Hes1的表达,进一步抑制抗凋亡的Bcl-2蛋白的作用,促进促凋亡蛋白Bax的表达,促进胰腺腺泡细胞的凋亡,减少胰腺腺泡细胞的坏死,减少炎症因子,如TNF-α与IL-6等的合成与释放。     

17-DMAG对鼻咽癌细胞株HNE1增殖与凋亡的影响

目的: 探讨17-DMAG对鼻咽癌HNE1细胞增殖与凋亡的影响。方法: MTT比色法测定17-DMAG对HNE1细胞活性的影响;溴化丙啶(PI)染色法测定HNE1细胞凋亡;JC-1 染色法测定17-DMAG对线粒体膜电位的影响;Western blot测定细胞Bcl-2/Bax的表达水平。结果: 17-DMAG可抑制鼻咽癌HNE1细胞的增殖,且该抑制作用随作用时间的延长和剂量增加而增强;PI染色显示17-DMAG具有诱导HNE1细胞凋亡作用（P<0.01）;JC-1染色显示17-DMAG可诱导HNE1细胞线粒体膜电位降低;Western blot 显示17-DMAG作用HNE1细胞24 h,Bcl-2表达显著降低（P<0.01）,Bax表达明显增加,尤其在中、高剂量组（P<0.01）。结论: 17-DMAG具有抑制鼻咽癌细胞HNE1细胞增殖的作用,该抑制作用与浓度和时间成正相关。该作用主要通过诱导HNE1细胞凋亡实现,诱导凋亡的机制可能与其下调细胞线粒体膜电位,降低Bcl-2表达,增加Bax水平有关。     

灯盏花素对非小细胞肺癌A549细胞的促凋亡作用

目的: 分析灯盏花素对非小细胞肺癌细胞的促凋亡作用以及对移植瘤生长的影响及初步机制探讨。方法: 检测25、50、100 μmol/L灯盏花素处理后A549细胞凋亡、Caspase-3活性及促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2表达的改变,用A549细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型,每日腹腔注射10 mg/kg和20 mg/kg灯盏花素,每周观察肿瘤的大小、裸鼠体质量,第21天时处死小鼠,获取瘤体,Western blot检测Bax和Bcl-2的表达,分析Bax/Bcl-2比值变化;免疫组化法检测组织内Caspase-3表达变化,TUNEL染色检测肿瘤组织内细胞凋亡情况。结果: 灯盏花素增加A549细胞凋亡率;酶标仪检测结果显示灯盏花素处理后,Caspase-3活性较对照组显著增加;Western blot结果显示灯盏花素能够显著抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,增加促凋亡蛋白Bax表达,致Bax/Bcl-2比值显著增加。体内实验中,第14和21天时,肿瘤大小较对照组明显减小;而裸鼠的体质量无明显降低。Western blot检测结果显示灯盏花素能够上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达,而Caspase-3的表达明显增加。TUNEL染色结果显示灯盏花素处理后,细胞凋亡比例较对照组明显增加。 结论: 灯盏花素能够在体内外诱导A549细胞凋亡,其机制可能是灯盏花素通过上调Bax的表达和抑制Bcl-2的表达,增加Bax/Bcl-2的比值,激活Caspase-3,达到促凋亡作用。     

五味子甲素在人肝星状细胞中的抗纤维化作用

目的: 研究五味子甲素对人肝星状细胞系 LX-2细胞的增殖、纤维化指标及凋亡相关蛋白的影响。方法: 采用不同浓度的五味子甲素与肝星状细胞LX-2共孵育,MTT法检测五味子甲素对细胞的抑制作用,RT-PCR法和Western blot法测定纤维化指标I型胶原α亚基1（collagen type I alpha 1,collagen I-1）和α-平滑肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）的表达量,并检测五味子甲素对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达量的影响。结果: 五味子甲素在不同浓度时可抑制人肝星状细胞系LX-2细胞的增殖,可降低 collagenⅠ和α-SMA的mRNA水平和蛋白表达量 ( P<0.05),并能降低Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达量以及Bcl-2/Bax的比值( P<0.05)。结论: 五味子甲素可能通过抑制细胞增殖、降低纤维化指标的表达,从而发挥抗肝纤维化的作用。     

芝麻素联用维生素E对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的: 观察芝麻素（Ses）联用维生素E（Vit E）对自发性高血压大鼠（SHR）心肌细胞凋亡的抑制作用及机制。方法: 32只SHR大鼠随机分为SHR组、Ses +Vit E（160 mg·kg^-1·d^-1+ 10 mg·kg^-1·d^-1）组、Vit E（10 mg·kg^-1·d^-1）及Ses（160 mg·kg^-1·d^-1）组，每组8只，另设WKY正常对照组8只（0.5% CMC-Na 5 mL/kg）。每天灌胃一次，连续10周。TUNEL法检测心肌细胞凋亡水平；免疫组化法检测Bax、Bcl-2的蛋白表达；Western blot法检测心肌组织Bax、Bcl-2、PUMA的蛋白表达及p53的磷酸化水平。结果: 芝麻素联用维生素E可显著降低SHR心肌细胞凋亡率，下调心肌组织Bax、PUMA的蛋白表达及p53磷酸化水平，上调Bcl-2的蛋白表达，提高Bcl-2/Bax比值(P<0.01)。结论: 芝麻素联用维生素E对SHR心肌细胞凋亡具有协同抑制作用，其机制可能与减少SHR心肌组织的PUMA蛋白表达，减少p53磷酸化水平，提高Bcl-2/Bax比值，调节Bax和Bcl-2蛋白表达的平衡有关。     

栀子苷通过抑制VPO1/ERK1/2信号通路减轻糖尿病心肌病大鼠的心肌细胞凋亡

目的：探讨栀子苷（geniposide, GE）改善大鼠糖尿病心肌病的作用及其具体机制。方法：24只成年雄性SD大鼠,随机分为3组：正常组（Control组,8只）、糖尿病心肌病组（DCM组,8只）、糖尿病心肌病组+栀子苷组（DCM+GE组,8只）,采用高脂饲料联合链脲佐菌素（STZ）构建糖尿病心肌病大鼠模型,应用次氯酸（HOCl）诱导H9C2损伤模型。干预12周后,HE和Masson染色观察心脏组织病理学改变;TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡水平;免疫组化检测及Western blot检测法检测VPO1/ERK1/2信号通路及凋亡相关蛋白表达水平。给予次氯酸刺激心肌细胞后,Western blot检测法检测ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的改变。给予ERK1/2酶抑制剂U0126后,用Western blot检测法再次检测ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的改变。结果：HE及Masson染色显示,与Control组相比,DCM组出现心肌纤维排列紊乱、心肌胶原含量明显增多,而DCM+GE组心肌损伤情况明显改善（P<0.05）。与Control组相比,DCM组心肌细胞凋亡水平及Bax/Bcl-2比值明显增加,而DCM+GE组心肌凋亡情况得到明显好转（P<0.05）。免疫组化和Western blot结果显示,在DCM组中VPO1、p-ERK1/2蛋白表达水平升高,而DCM+GE组中VPO1、p-ERK1/2蛋白表达水平得到了抑制（P<0.05）。进一步对H9C2细胞行HOCl干预发现,与Control组相比,次氯酸组出现p-ERK1/2蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值增加,而加入ERK1/2酶抑制剂U0126后p-ERK1/2蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值下降（P<0.05）。 结论：栀子苷通过抑制VPO1/ERK1/2信号通路抑制心肌细胞凋亡从而改善糖尿病引起的心肌损伤。     

同源盒基因2在黑色素瘤细胞对于曲美替尼耐药中的作用

目的:研究同源盒基因2（MSX2）在黑色素瘤细胞A375对于曲美替尼耐药中的作用机制。方法:构建曲美替尼耐药的A375细胞株（A375-AR）,曲美替尼干预A375和A375-AR后采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。采用小干扰RNA（siRNA）沉默A375-AR中MSX2基因,设计A375、A375-AR、A375-AR-MSX2,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。构建MSX2过表达的A375细胞系（A375-OE）,设置A375、A375-OE和A375-AR组,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。结果:A375-AR对1.8 nmol/L的曲美替尼耐药,采用1.8 nmol/L曲美替尼干预后,A375细胞活力和细胞凋亡率显著高于A375-AR,A375细胞中Bcl-2基因表达水平低于A375-AR,而Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达水平高于A375-AR。A375-AR沉默MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著增高,且细胞活力下调,凋亡率上调,细胞中Bcl-2表达下调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达上调。A375过表达MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著下调,细胞活力上调,凋亡率下调,细胞中Bcl-2表达上调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达下调。结论:MSX2基因可以诱导黑色素瘤细胞对于曲美替尼的耐药,是治疗黑色素瘤耐药的潜在靶点。     

PI3K/AKT/mTOR信号通路对甘氨鹅脱氧胆酸钠诱导的肝细胞凋亡的机制研究

目的: 探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路对甘氨鹅脱氧胆酸钠（GCDC）诱导的人肝正常细胞HL-7702增殖、凋亡的影响。方法: 将HL-7702细胞分为对照组、GCDC组（1 mmol/L的GCDC预处理细胞4 h）、GCDC+LY294002组（GCDC处理细胞4 h后,使用15 μmol/L的LY294002处理细胞24 h）和GCDC+IGF-1组（GCDC处理细胞4 h后,使用20 nmol/L的IGF-1处理细胞24 h）。处理结束后,通过Western blot检测PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、Bcl-2、Bax和Nrf2蛋白表达;MTT法及Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞增殖和凋亡率;DCFH-DA探针法检测细胞活性氧（ROS）含量。结果: GCDC可明显下调HL-7702细胞PI3K、p-AKT、p-mTOR、Bcl-2和Nrf2表达,上调Bax表达,抑制细胞增殖,诱导凋亡,诱导细胞ROS产生（P<0.05）,LY294002可增强GCDC对HL-7702细胞增殖、凋亡、ROS水平及PI3K、p-AKT、p-mTOR、Bcl-2、Bax和Nrf2表达影响,IGF-1反之。结论: 激活PI3K/AKT/mTOR信号通路可改善胆汁性肝纤维化,机制可能与抗凋亡和抗氧化有关。     

西红花酸对乙醛诱导的肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的: 探讨西红花酸(Crocetin)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell, HSC)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法: 培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,建立乙醛诱导的HSC纤维化模型;用不同浓度的西红花酸(10^-6、10^-7、10^-8 mol/L)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,MTT法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测HSC-T6胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞凋亡;Western blot检测细胞ERK1/2、Bax、Bcl-2蛋白的表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达。结果: 在一定浓度范围里,西红花酸能抑制乙醛引起的HSC增殖和胶原合成; 西红花酸诱导乙醛刺激的HSC细胞凋亡;西红花酸能增加Bax蛋白表达,降低乙醛刺激升高的ERK1/2、Bcl-2蛋白表达;西红花酸能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP-1的表达,提高MMP-2的表达。结论: 西红花酸通过抑制乙醛诱导的HSC增殖和胶原合成以及促进活化的HSC凋亡起到抗肝纤维化作用,其机制可能与ERK信号传导通路和对基质金属蛋白酶的调节有关。