妊娠期糖尿病中患者miR-138-5p通过调控缺氧诱导因子1α保护β细胞功能

目的:探讨在妊娠期糖尿病(GDM)患者中miR-138-5p对胰岛β细胞功能的影响及其相关作用机制。方法:通过RT-qPCR对比15例GDM患者与15例的正常健康孕妇外周血中miR-138-5p的表达差异;miR-138-5p mimic及inhibitor分别转染入β细胞系INS-1细胞中,过表达或抑制其在该细胞中的表达水平,并通过RT-qPCR验证转染效率;利用MTT增殖实验、Annexin V-FITC凋亡实验及胰岛素释放实验分别检测miR-138-5p对INS-1细胞的增殖、凋亡和胰岛素释放能力的影响;通过miRNA靶基因预测软件TargetScan筛选miR-138-5p的目标靶基因,并利用双荧光素酶基因报告及Western blot实验进行验证;功能挽救实验证实miR-138-5p是否通过靶向调控其目标基因而发挥对INS-1细胞的增殖、凋亡及胰岛素释放能力影响;Western blot实验检测miR-138-5p在INS-1细胞中作用的分子信号通路。结果:与正常健康孕妇相比,GDM患者外周血中miR-138-5p的表达显著低表达;在INS-1细胞中转染miR-138-5p mimic及inhibitor后可显著促进或抑制miR-138-5p的表达;过表达miR-138-5p可明显促进INS-1细胞的增殖,抑制其发生凋亡并促进细胞对胰岛素的释放能力;而下调miR-138-5p的表达,可显著抑制INS-1细胞的增殖,促进其发生凋亡及抑制细胞的胰岛素释放能力;通过miRNA靶基因预测软件TargetScan筛选缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)为miR-138-5p的目标靶基因,双荧光素酶基因报告实验及Western blot实验提示miR-138-5p可抑制INS-1细胞中HIF-1α的表达;功能挽救实验证实miR-138-5p通过调控HIF-1α的表达,影响INS-1细胞的增殖、凋亡及胰岛素释放能力;Western blot实验明确miR-138-5p可能通过靶向调控HIF-1α的表达,影响PI3K/AKT信号通路中PI3K、AKT及其磷酸化后的p-PI3K、p-AKT蛋白而发挥对INS-1细胞的作用。结论:在GDM患者中,miR-138-5p可能通过靶向调控HIF-1α的表达,进而影响PI3K/AKT信号通路,促进β细胞的增殖、抑制其凋亡,并促进其胰岛素释放能力从而保护β细胞的功能。     

醒脑静注射液对脑梗死缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的: 观察醒脑静注射液对脑梗死患者的疗效及对缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-lα)水平的影响。方法: 68例脑梗死患者随机分为治疗组35例和对照组33例,对照组给予常规治疗,治疗组在对照组治疗的基础上给予醒脑静注射液,疗程均为10 d。治疗前,治疗后3 d、10 d分别进行神经功能缺损评分（NIHSS）及检测血清HIF-lα水平。结果: 治疗后3 d、10 d,治疗组的NIHSS评分较治疗前下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,治疗组下降更明显,两组差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后3 d、10 d两组血清HIF-lα水平均较治疗前下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;与治疗组比较,对照组下降更明显,两组差异具有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关分析显示HIF-lα水平与NIHSS减少值呈正相关（P<0.05）。结论: 醒脑静注射液可通过上调血清HIF-lα表达水平保护、治疗缺血脑组织。     

miR-142-5p通过DNA甲基转移酶1抑制胃癌细胞增殖迁移的机制研究

目的:探究miR-142-5p在胃癌（GC）细胞中的作用并研究其机制。方法:qRT-PCR检测miR-142-5p表达;CCK-8和Transwell实验研究miR-142-5p对细胞增殖及迁移的影响;双荧光素酶报告基因和Western blot验证miR-142-5p的作用靶点。结果:miR-142-5p在GC组织及细胞系中的表达分别低于人正常胃组织及胃正常上皮黏膜细胞系GES-1,且其表达水平与胃癌肿瘤大小及淋巴结转移密切相关。在MKN28细胞中过表达miR-142-5p及在BGC-823细胞中沉默miR-142-5p能够分别抑制及促进胃癌细胞的增殖和迁移。DNA甲基转移酶1（DNMT1）是miR-142-5p直接作用靶点,miR-142-5p能够直接调节DNMT1的表达,并通过DNMT1调控胃癌细胞增殖及迁移。结论:miR-142-5p在GC中的表达降低,并在胃癌细胞中发挥抑癌基因的作用,能够通过抑制DNMT1来抑制胃癌细胞的增殖和迁移。     

通经定晕丸阻断颈椎病大鼠NF-κB激活MCP-1/CCR2通路及TNF-α及IL-1β、IL-6表达的研究

目的:研究通经定晕丸阻断颈椎病大鼠核因子-κB(NF-κB)激活单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/趋化因子受体-2(CCR2)通路及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)表达的影响。方法:用手术的方法制作颈椎病大鼠模型,用通经定晕丸(5.0和10.0 g/kg)和颈复康冲剂(0.84 g/kg)灌胃给药,每天1次,连续4周,每天观察实验大鼠一般状况。4周后检测,腹主动脉取血,进行血液黏度,血液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量分析;取颈椎椎间盘进行组织形态学分析;实时定量PCR检测颈椎椎间盘组织中MCP-1和CCR2的mRNA表达,Western blot检测椎间盘组织中NF-κBp65蛋白表达。结果: 通经定晕丸(5.0和10.0 g/kg)和颈复康冲剂(0.84 g/kg)可显著改善颈椎病模型大鼠的一般状况,降低血液低切黏度值、中切黏度值、高切黏度值,促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量及椎间盘组织中MCP-1、CCR2和NF-κBp65的mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01),减轻促炎因子对椎间盘造成的损伤,降低颈椎间盘高度和退变程度,降低纤维环裂隙、髓核、细胞数量、软骨厚度,其中以通经定晕丸10.0 g/kg剂量组作用效果更为显著。结论:通经定晕丸对颈椎病模型大鼠具有较好的治疗的作用,其作用机制与降低血液黏度,抑制MCP-1/CCR2信号通路激活、NF-κB活化及TNF-α、IL-1β和IL-6的生成相关。     

miR-34a-5p在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞侵袭迁移的影响和机制

目的:研究miR-34a-5p在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞侵袭迁移的影响和机制。方法:收集50例膀胱癌组织及对应的癌旁组织,qRT-PCR检测miR-34a-5p表达差异。在膀胱癌细胞中转染miR-34a-5p mimics,qRT-PCR、Transwell小室和Western blot分别检测miR-34a-5p水平、侵袭迁移数目和E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。靶基因预测软件发现肿瘤蛋白D52（TPD52）可能为miR-34a-5p的靶基因,构建荧光素酶报告载体鉴定靶基因。Western blot检测miR-34a-5p mimics对膀胱癌细胞中TPD52表达的影响。以qRT-PCR检测膀胱癌组织和癌旁组织中TPD52表达变化,分析膀胱癌组织中TPD52表达水平与miR-34a-5p表达水平的相关性。将miR-34a-5p mimics和pcDNA3.1-TPD52共转染至膀胱癌细胞中,按照上述方法检测细胞中TPD52蛋白、侵袭迁移数目及E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达变化。 结果:miR-34a-5p在膀胱癌组织中表达水平降低,miR-34a-5p mimics提高膀胱癌细胞中miR-34a-5p表达水平,降低膀胱癌细胞侵袭和迁移能力,降低膀胱癌细胞中N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平,提高E-cadherin蛋白表达水平。miR-34a-5p靶向调控TPD52表达,并且miR-34a-5p mimics抑制细胞中TPD52蛋白表达。TPD52在膀胱癌组织中高表达,其在膀胱癌组织中的表达水平与miR-34a-5p呈负相关。与共转染miR-34a-5p mimics和pcDNA3.1的细胞比较,miR-34a-5p mimics和pcDNA3.1-TPD52共转染提高膀胱癌细胞中TPD52蛋白表达水平,提高膀胱癌细胞侵袭和迁移能力,促进细胞中N-cadherin、Vimentin蛋白表达,降低E-cadherin蛋白表达水平。结论:miR-34a-5p在膀胱癌组织中低表达,上调miR-34a-5p靶向TPD52抑制膀胱癌细胞侵袭和迁移。     

miR-423-5p靶向水通道蛋白1对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎AR42J细胞损伤的影响

目的:研究miR-423-5p对雨蛙肽诱导的胰腺AR42J细胞损伤的影响及其分子作用机制。方法:通过雨蛙肽处理AR42J细胞建立胰腺炎损伤模型,qRT-PCR检测AR42J细胞中miR-423-5p的表达,Western blot检测水通道蛋白1（aquaporin 1,AQP1）、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达,ELISA法检测培养上清中IL-6和TNF-α的分泌水平,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-423-5p与AQP1间的调控关系。结果:在雨蛙肽诱导的AR42J细胞中miR-423-5p表达上调,AQP1表达下调;抑制miR-423-5p和过表达AQP1均可减轻雨蛙肽诱导的AR42J细胞损伤,抑制细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果显示miR-423-5p靶向负调控AQP1的表达;抑制AQP1逆转了抑制miR-423-5p对雨蛙肽诱导的胰腺AR42J细胞损伤的作用。结论:miR-423-5p通过靶向AQP1减轻雨蛙肽诱导的胰腺AR42J细胞损伤,抑制细胞凋亡。     

中枢σ-2受体对神经精神疾病影响和治疗的研究进展

中枢σ-2 受体可能在神经精神疾病的发病和治疗中起重要作用。近年来,随着新型σ-2受体选择性配体的问世,其神经生物学相关研究取得了长足进展。最新研究发现,孕激素受体膜组分1（progesterone receptor membrane component 1,PGRMC1）可能是σ-2受体的一部分,这为σ-2受体的功能研究提供了新方向。因此,本文就σ-2受体在神经系统中的生理功能,以及σ-2受体对神经精神疾病的影响和治疗的相关研究进展作一综述。     

胰岛素通过PI3K/AKT及PI3K/ERK通路减轻脂多糖对钠泵α1亚基的抑制

目的:研究胰岛素减轻脂多糖对肺泡II型上皮细胞Na+-K+-ATPase α1亚基表达抑制的分子机制。方法:以A549细胞为研究对象,脂多糖（1 μg/mL）诱导8 h后,再加用胰岛素（100 nmol/L）处理4 h,采用Western blot法检测Na+-K+-ATPase α1亚基表达及AKT、ERK1/2、p70s6k、NEDD4-2总蛋白表达及其磷酸化水平变化。结果:A549细胞在1 μg/mL脂多糖作用下,Na+-K+-ATPase α1亚基蛋白表达显著降低。胰岛素处理可部分解除脂多糖对A549细胞Na+-K+-ATPase α1亚基表达的抑制。胰岛素上调Na+-K+-ATPase α1亚基表达是通过改变PI3K/AKT及PI3K/ERK通路中关键蛋白AKT、NEDD4-2、ERK1/2、p70s6k的磷酸化水平来实现的。结论:胰岛素通过调控PI3K/AKT及PI3K/ERK通路部分解除脂多糖对肺泡II型上皮细胞Na+-K+-ATPase α1亚基表达的抑制,这为临床上采用胰岛素干预急性呼吸窘迫综合征提供了初步实验依据。     

葛根素对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞中Tau蛋白磷酸化水平及Aβ40/42蛋白表达的影响

目的: 研究葛根素对寡聚态Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞Tau蛋白过度磷酸化及Aβ40/42蛋白表达的影响。方法: 通过ELISA、蛋白免疫印迹法检测SH-SY5Y细胞中Aβ40/42、Tau蛋白磷酸化水平,以及糖原合成酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β-Ser9的蛋白表达水平。结果: 葛根素可以显著抑制寡聚态Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞Tau蛋白在Ser396、Ser199、Thr231位点的磷酸化,减少SH-SY5Y细胞中Aβ40/42的表达,并能通过激活GSK-3β-Ser9表达来抑制GSK-3β的活性。结论: 葛根素可通过抑制GSK-3β的表达,抑制寡聚态Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞Tau蛋白的过度磷酸化,同时可减少Aβ40/42的表达。     

阿托伐他汀对ApoE-/-小鼠载脂蛋白A-I和B族1型清道夫受体的影响

目的: 观察阿托伐他汀对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)病变形成及载脂蛋白A-I(ApoA-I)和B族1型清道夫受体(SR-B1)表达水平的影响,探讨阿托伐他汀抑制AS病变形成的可能机制。方法: C57BL/6J小鼠 10只作为正常对照组常规饲养(A组),ApoE^-/-小鼠30只高脂饮食饲养,随机分为ApoE^-/-高脂模型组(B组)、阿托伐他汀小剂量组(10 mg·kg^-1·d^-1,C组)和阿托伐他汀大剂量组(20 mg·kg^-1·d^-1,D组)。给予生理盐水或药物干预12周后,测定小鼠血脂水平,HE染色和油红O染色观察各组小鼠胸主动脉粥样斑块的病理改变,采用Western blot法测定肝组织ApoA-I和SR-B1表达水平,实时定量PCR法测定肝组织ApoA-I和SR-B1 mRNA表达水平。结果: 与A组相比,B组血清TG、TC、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显升高[分别为(2.93±0.18) mmol/L vs (0.59±0.09) mmol/L;(21.78±2.03) mmol/L vs (2.13±0.24) mmol/L;(2.86±0.26) mmol/L vs (0.57±0.10) mmol/L;(18.92±1.87) mmol/L vs (1.54±0.21) mmol/L;P<0.01]。与B组相比,C组和D组TC、LDL-C明显下降 [TC B组:(21.78±2.03)mmol/L,C组:(11.79±0.98) mmol/L,D组:(10.07±1.03) mmol/L;LDL-C B组:(18.92±1.87) mmol/L,C组:(8.76±1.15) mmol/L,D组:(7.91±0.77) mmol/L;P<0.01]。胸主动脉粥样斑块面积明显减小[B组:(23.12±3.46)×10⁴ μm²,C组:(11.42±1.25)×10⁴ μm²,D组:(7.34±1.03)×10⁴ μm²,P<0.01];肝组织 ApoA-I和SR-B1表达水平明显上调(ApoA-I B组:1.08±0.10,C组:1.36±0.11,D组:1.78±0.14;SR-B1 B组:0.72±0.07,C组:1.46±0.14,D组:1.50±0.21, P<0.01)。结论: 阿托伐他汀可以通过降低ApoE^-/-小鼠胆固醇水平,上调ApoA-I和SR-B1表达,发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

有机阴离子转运多肽1B1的遗传药理学进展

人体存在多种类型的药物转运体,对于药物的吸收、分布和排泄起重要作用。参与药物跨膜转运的转运体功能受影响,将可能导致诸多临床药物的疗效、毒副作用甚至药物相互作用的发生。在各种影响因素中,遗传多态性所起的作用最为重要,可导致基因表达和蛋白功能发生改变。目前,阐明转运体基因的多态性以及基因型与表型之间的相互关系已成为应用遗传信息指导临床个体化用药的必要步骤。本文就肝脏有机阴离子转运多肽1B1(OATP1B1[OATP-C],编码基因SLCO1B1)基因多态性对药代动力学和药效动力学的影响及其临床意义等方面的进展作一综述。     

白藜芦醇调控miR-409-3p/FKBP14抑制胃癌细胞BGC823恶性进程

目的：探究白藜芦醇（resveratrol, RES）调控miR-409-3p/FKBP14对胃癌（gastric cancer, GC）细胞恶性生物学进程的影响。方法：CCK-8实验研究RES对BGC823细胞活性的影响;qRT-PCR检测RES对miR-409-3p表达的调控;EdU实验研究RES对BGC823细胞增殖的影响;Transwell实验研究RES对BGC823细胞迁移和侵袭的影响;双荧光素酶报告基因和Western blot实验检测miR-409-3p对FKBP14表达的调控。结果：RES（>200 μmol/L）能够显著抑制BGC823细胞活性。RES通过上调miR-409-3p抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。FKBP14是miR-409-3p的靶基因,RES能够通过上调miR-409-3p抑制胃癌细胞中FKBP14的表达。过表达FKBP14后减弱RES的抑癌作用。 结论：RES可通过调控miR-409-3p/FKBP14信号通路在胃癌中发挥肿瘤抑制作用,RES有应用于临床胃癌治疗的潜力。     

结肠癌患者血清中miR-186-5p表达的研究

目的：探讨miR-186-5p在结肠癌中的表达及其对于结肠癌的影响,为结肠癌的治疗和预后治疗提供新的治疗靶点。方法：收集本院符合条件的病人血清样本,分为健康组、临床I、II、III、IV期5个组别（n=20）,利用miRVana microRNA分离试剂盒提取病人血清中的miRNA,利用荧光实时定量PCR检测miR-186-5p在不同阶段结肠癌病人血清中表达的差异。将miR-186-5p的全长基因克隆到pENTR/D-Topo载体,构建miR-186-5p高表达的细胞系,利用miR-186-5p抑制剂,降低miR-186-5p表达。利用细胞增殖ELISA试剂盒,将5×103/孔的细胞接种到96孔板中,孵育24 h后加入BrdU标记24 h,在370和492 nm测定吸光度,测定miR-186-5p对肿瘤细胞增殖的影响。用MTT法检测miR-186-5p对结肠癌细胞系对化疗药物敏感性的影响。结果：结肠癌病人血清中miR-186-5p呈低表达状态,与正常组相比,临床I、II、III、IV期病人血清中miR-186-5p表达明显减少（P<0.01）。利用质粒构建miR-186-5p高表达的细胞系,利用miR-186-5p抑制剂（hsa-miR-186-5p inhibitor）降低SW480、HCT116两种细胞内miR-186-5p的表达。与对照组相比,过表达miR-186-5p的HCT116细胞和SW480细胞增殖能力减弱,说明miR-186-5p表达增多抑制了HCT116细胞和SW480细胞的增殖。miR-186-5p抑制剂处理后,与对照组相比,HCT116细胞和SW480细胞的增殖能力均升高,说明miR-186-5p表达降低可以增加HCT116细胞和SW480细胞的增殖。不同浓度顺铂处理24 h后,高表达miR-186-5p的HCT116和SW480细胞死亡率均高于对照组（P<0.01）,miR-186-5p表达降低后,死亡率低于对照组（P<0.01）。在miR-186-5p高表达的结肠癌细胞系中,PLK1蛋白表达降低,而抑制miR-186-5p表达后,PLK1蛋白表达升高。 结论：结肠癌患者中miR-186-5p表达降低,过表达miR-186-5p可以抑制结肠癌细胞增殖生长,并降低结肠癌细胞的耐药性,抑制miR-186-5p表达可以增加结肠癌细胞增殖,并增强细胞的耐药性。     

miR-423-5p、TFFs、NAG-1在抗NASIDs致胃黏膜损伤中作用研究进展

非甾体抗炎药(NSAIDs)是临床上广泛应用的一类解热镇痛药物,然而NSAIDs致胃黏膜损伤同样常见。明确NSAIDs致消化道黏膜损伤的发病机制,寻找抗炎作用好、胃黏膜损伤副作用少的新型抗炎药物是许多医药工作者的研究热点。近年来,国内外学者研究表明miR-423-5p、TFFs及NAG-1均参与了胃黏膜损伤的进程,但三者之间的关系尚不明确。本文就NASIDs致胃黏膜损伤机制、三者性质及它们在胃黏膜损伤中作用的相关研究进展进行综述。     

大蒜素对肝脏药物转运体OATP1B1转运功能的影响

目的: 观察大蒜素对肝脏药物转运体-有机阴离子转运多肽1B1(Organic anion transporting polypeptide 1B1, OATP1B1)转运功能的影响。方法: 利用稳定表达人OATP1B1的人胚胎肾293(Human embryonic kidney 293, HEK293)细胞株,以[³H]硫酸雌酮和普伐他汀为底物进行OATP1B1摄取反应,观察大蒜素对OATP1B1摄取功能的影响。结果: 大蒜素对OATP1B1摄取[³H]硫酸雌酮和普伐他汀的功能有竞争性抑制作用,抑制常数K_i值分别为(18.3±5.2) μmol/L 和(15.4±6.8) μmol/L。结论: 大蒜素对肝脏药物转运体OATP1B1转运功能的抑制作用可诱导中药-西药相互作用。     

miR-195-5p通过靶向调控FBXW7基因对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的影响研究

目的：探讨miR-195-5p对氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）损伤的影响及其作用机制。方法：RT-PCR检测miR-195-5p在ox-LDL诱导的HUVECs细胞中的表达;CCK-8、ELISA和流式细胞仪分别检测细胞增殖、氧化应激和凋亡;双荧光酶素报告分析实验检测miR-195-5p的潜在作用靶点;Western blot检测靶蛋白在ox-LDL诱导的HUVECs细胞中的表达及其与miR-195-5p表达之间的关系。结果：miR-195-5p在ox-LDL诱导的HUVECs细胞中的表达显著高于正常HUVECs细胞。随后,在ox-LDL诱导的HUVECs细胞中沉默miR-195-5p能有效促进HUVECs细胞增殖,并抑制氧化应激因子［丙二醛（malondialdehyde, MDA）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）］表达和凋亡水平。双荧光酶素实验和Western blot结果分别显示miR-195-5p可以直接靶向FBXW7蛋白基因并负调控FBXW7的表达。最后,miR-195-5p能通过调节FBXW7的表达影响ox-LDL诱导的HUVECs细胞增殖、氧化应激和凋亡。 结论：miR-195-5p在ox-LDL诱导的HUVECs细胞中高表达。此外,miR-195-5p能通过抑制FBXW7的表达来加剧ox-LDL诱导的HUVECs细胞毒性、氧化应激和凋亡损伤。     

Ce和B对HSn70-1合金组织和性能的影响

在HSn70-1合金中添加适量稀土Ce的同时再添加不同含量的B,利用金相显微镜、拉伸试验、扫描电镜、静态腐蚀试验及X射线衍射分析,研究了B对HSn70-1合金组织与性能的影响。结果表明,添加0.10%的Ce和0.03%的B(质量分数),HSn70-1合金的力学性能和耐蚀性能显著提高;B的加入对HSn70-1合金组织细化作用不明显,但添加0.03%的B使得合金中的第二相分布均匀、弥散。